UNIVERSITÉ IBN ZOHR

FACULTÉ POLYDISCIPLINAIRE DE TAROUDANT

Département des Sciences et Techniques

Travaux dirigés

Module : Microbiologie Générale

Filière AGRO + SV (S3)

Responsable : Pr. M. SADIKI

Année Universitaire 2020-2021

 TD 2 : Croissance bactérienne et Techniques de numération
bactérienne
Exercice 1 :
Afin de diagnostiquer une maladie de l’appareil urinaire, 0,01 ml de l’urine d’un malade a été déposée à la
surface d’une cellule de Malassez et examinée au microscope, au fort grossissement après 30 minutes de
repos permettant la décantation des cellules. Le comptage direct a donné 20 cellules par carré.
1. Calculer le nombre des cellules bactériennes par 1 ml dans cette urine, sachant que chaque rectangle
de Malassez contient 25 carrés couvrant une surface de 1 mm2 et une profondeur de 0,02 mm.
2. Le comptage de 5 petits carrés a donnés les nombres de cellules bactériennes suivants : 20, 20, 24,
28, 28. Calculer le nombre des cellules par 1 ml dans cette urine.

Exercice 2 :
Lors d’une séance de travaux pratiques, trois binômes ont entamé une analyse bactériologique d'un jus
contaminé. Après le dénombrement de colonies sur la gélose utilisé, les résultats obtenus sont présentés
dans le tableau suivant. (Système avec une boite par dilution).

Dilution 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5

Binôme 1 ND 1700 190 20 0
Binôme 2 ND 1400 170 18 1
Binôme 3 ND 1670 180 17 0

ND : non dénombrable
Sachant que 0,1 ml de chaque dilution a été ensemencé par boite de milieu de culture gélosé,
1. Définissez une colonie
2. Faites un schéma des étapes de dilution.
3. Quelle est la/les dilution (s) à prendre en compte pour le dénombrement ? Donner le nombre de
bactéries par ml de jus ?
4. Le dénombrement bactérien sur le même échantillon de jus, par la méthode directe au microscope
optique, a donné 2.106 bactéries /ml, comparer les deux résultats et interpréter.

Exercice 3 :
Le dénombrement des bactéries ammonifiantes dans des suspensions de trois sols différents a été réalisé
par la méthode du NPP.
A partir de chaque sol une suspension de 1g de sol broyé dans 10 ml d'eau physiologique stérile a été
préparée. Des séries de dilutions de 10-1 à 10-7 ont été préparées dans l’eau physiologique à partir de chaque
suspension de sol. Ensuite, 1 ml de chaque dilution préparée (10-1 à 10-7) a été ensemencé dans un milieu
de culture spécifique, à raison de trois répétitions pour chaque dilution. Après incubation à 28°C pendant
15 jours, les tubes positifs sont détectés par une coloration orange, après addition du réactif de Nessler. Les
résultats obtenus sont représentés ci-dessous :

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 1. Calculez pour chaque type de sol, le nombre de germes par gramme de sol.
2. Quel serait le résultat si le volume ensemencé était de 0,1 ml ?

Exercice 4 :
On réalise une expérience de croissance bactérienne avec une souche d’Escherichia coli qui exige la guanine
comme facteur de croissance. L’expérience est réalisée à 37°C, à partir d’une culture de 24 heures dans un
milieu contenant de la guanine.
On étudie les variations du nombre de bactéries par millilitre de milieu de culture en fonction du temps. Soit
N ce nombre.
Temps
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
(h)
Log10 N 2 2 2 2,2 2,8 3,5 4,4 5,3 6,2 6,8 7,0 7,0 7,0 7,0 7,0 6,9 6,5 5,7

a) Tracer la courbe représentative de la fonction log10 N = f (t)

b) Caractériser chacune des phases de la croissance d’E. coli dans le milieu utilisé ;
c) Calculer le taux de croissance pendant la phase exponentielle. En déduire la valeur du temps de
génération pendant cette même phase. On prendra log10 2 = 0,30.
Exercice 5 :
Une souche de Pseudomonas isolée à partir du sol est capable de se développer sur le milieu de culture
suivant : Glucose : 16g/l ; (NH4)2 SO4 : 1g/l ; K2HPO4 : 7g/l ; KH2PO4 : 3g/l ; MgSO4, 7H2O : 0,1g/l.
Pour étudier la croissance bactérienne de cette souche, ce milieu a été ensemencé à partir d'une culture de
24 h de cette souche sur gélose nutritive puis incubé dans les conditions optimales de température et de pH.
L’évolution du nombre de bactéries en fonction du temps est schématisée sur la figure 1.

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 1. Délimiter sur le graphe ci-dessus les différentes phases de croissance ; interprétez et qualifiez
chacune d’elles.
2. Déterminez la valeur numérique de trois paramètres nécessaires et suffisants pour caractériser cette
croissance.
3. D'après les conditions expérimentales, de quoi dépend la 1ère phase de la courbe ?
4. Expliquez la troisième phase de la courbe à partir de la corrélation entre la croissance bactérienne
et la consommation du glucose (figure 2).

Exercice 6 :
Une suspension de bactéries de concentration 4x108 bactéries/ml est diluée au 2x10-5. 0,1 ml de la solution
diluée est étalée sur une boite de Pétri et incubée une nuit à 37°C.
A) Combien de colonies apparaitront sur la boite ?
B) On ensemence 4 ml de la solution diluée dans un volume total de 500 ml de milieu de croissance
contenant de l’ampicilline. Le milieu contient combien de cellules ?
C) Cette culture est incubée à 37°C pendant 10h. Quelles caractéristiques doivent posséder les
bactéries pour croitre dans ces conditions ?
D) Quelle est la concentration de la culture avant incubation à 37°C ?
E) Si le temps de génération de cette culture est de 30 min, quelle sera la concentration de cette culture
(cellules par ml) au bout des 10h d’incubation.

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