Facult de Mdecine dAnnaba

Dpartement de Pharmacie

Physiologie Bactrienne : Nutrition et Croissance

des Bactries
I. La Nutrition :
1. Introduction :
Pour assurer sa croissance ou sa survie, une bactrie doit trouver dans son
environnement de quoi satisfaire ses besoins nutritifs : substances nergtiques
permettant la cellule de raliser la synthse de ses constituants et substances
lmentaires ou matriaux constitutifs de la cellule.
Toutes les bactries ont besoin deau, dune source dnergie, dune source
de carbone, dune source dazote et dlments minraux. Ces besoins
lmentaires sont suffisants pour permettre la nutrition de bactries qualifies
de prototrophes. Certaines bactries qualifies dauxotrophes ncessitent en
plus des besoins lmentaires la prsence de facteurs de croissance.

2. Leau :
Leau reprsente 80 90% du poids cellulaire. Elle joue un rle fondamental en
solubilisant les nutriments, en assurant leur transport et en assurant les
ractions dhydrolyse.

3. La source dnergie :
Selon la source dnergie, les bactries se divisent en phototrophes et
chimiotrophes.
La source dnergie des bactries phototrophes est la lumire. Si la source
dlectrons est minrale, les bactries sont qualifies de photolithotrophes et si
la source dlectrons est organique, les bactries sont photo-organotrophes.
Les bactries chimiotrophes puisent leur nergie partir de composs minraux
ou organiques. Si le donneur dlectrons est minral, les bactries sont
chimiolithotrophes et si le donneur dlectrons est organique, les bactries sont
chimio-organotrophes.

4. La source de carbone :
Le carbone est llment constitutif le plus abondant chez les bactries.

Les bactries phototrophes et la plupart des bactries chimiolithotrophes

peuvent utiliser le dioxyde de carbone comme unique source de carbone et elles
sont dites autotrophes. Pour les autres bactries la source de carbone
assimilable doit tre un substrat organique et ces bactries sont qualifies de
htrotrophes.
Les bactries htrotrophes peuvent dgrader de nombreuses substances
hydrocarbones : alcools, acides organiques, sucres ou polyholosides.

5. La source dazote :
La synthse des protines ncessite des substances azotes. Pour la majorit
des bactries, la source dazote est constitue par des composs inorganiques
(ammoniac, sels dammonium, nitrites, nitrates) ou par des sources organiques
(groupements amines des composs organiques).

6. Les lments minraux :

Le soufre et le phosphore sont particulirement importants.
Le soufre est prsent dans certains acides amins (groupement thiol) et il est le
plus souvent incorpor sous forme de sulfate ou de composs soufrs organiques.
Le phosphore fait partie des acides nucliques, de nombreuses coenzymes et de
lATP, il est incorpor sous forme de phosphate inorganique.
Le sodium, le potassium, le magnsium et le chlore jouent un rle dans lquilibre
physico-chimique de la cellule.
Dautres lments comme le fer, le calcium sont des oligolments ncessaires
des concentrations trs faibles.

7. Les facteurs de croissance :

En prsence deau, dune source dnergie, dune source de carbone, dune source
azote et dlments minraux, de nombreuses bactries sont capables de croitre
et elles sont qualifies de prototrophes. Les bactries auxotrophes ncessitent,
en plus, un ou plusieurs facteurs de croissance quelles sont incapables de
synthtiser.
Les facteurs de croissance sont des bases puriques ou pyrimidiques, des acides
gras, des acides amins, des vitamines (coenzymes, prcurseurs de coenzymes,
groupements prosthtiques de diverses enzymes) ou divers composs comme
lhme et ses drivs.
Les besoins en facteur de croissance peuvent parfois tre satisfaits par la
prsence dune autre bactrie. Ce mcanisme dinteraction mtabolique, qualifi
de syntrophie, se traduit sur un milieu solide par la prsence de colonies
satellites (bactries auxotrophes) se dveloppant au voisinage de la bactrie
productrice du facteur de croissance.

Exemple : le besoin en facteur V des Haemophilus spp sera apport par une
souche de Staphylococcus aureus ensemence selon une strie sur une glose au
sang cuit. La croissance des souches exigeantes en facteur V ne sera alors
observe qu proximit de la culture de staphylocoques : cest le phnomne de
satellitisme.

Les diffrents types trophiques ou nutritionnels des bactries

Classe du besoin

Nature du besoin

Type trophique

Source dnergie

Lumire
Oxydation de composs

Phototrophe
Chimiotrophe

organiques ou
Donneur dlectrons
Source de carbone
Facteurs de croissance

II.

inorganiques
Minral
Organique
Compos minral
Compos organique
Non ncessaires
Ncessaires

Lithotrophe
Organotrophe
Autotrophe
Htrotrophe
Prototrophe
Auxotrophe

La Croissance Bactrienne :

1. Dfinition :
Chez les bactries, la croissance peut se traduire par une augmentation de
volume des cellules, mais elle conduit principalement une augmentation de
nombre de cellules.
La croissance bactrienne est exponentielle car les cellules se divisent par
fission binaire. Le temps quil faut pour les cellules de la population pour
doubler, appel temps de doublement, dpend du taux de croissance de
lorganisme, de la composition du milieu et des conditions environnementales.

2. La courbe de croissance bactrienne :

Quand les bactries se dveloppent en milieu liquide dans un systme clos ou
culture en batch, la courbe de croissance rsultante ; reprsente
graphiquement comme le logarithme du nombre de cellules en fonction du temps
dincubation ; est constitue de quatre phases distinctes :

La phase de latence: lorsque les bactries sont inocules dans un milieu, il

existe une priode pendant laquelle aucune croissance ne se fait. Durant cette
phase, les bactries sadaptent au nouvel environnement, synthtisent de
nouvelles enzymes ncessaires pour la division cellulaire.
La phase exponentielle ou logarithmique: les bactries se dveloppent une
vitesse maximale et constante (temps de doublement). Les cellules en phase
exponentielle sont habituellement utilises dans les tudes biochimiques et
physiologiques.
La phase stationnaire: la croissance de la population finit par sarrter et la
courbe de croissance devient horizontale (puisement des nutriments).
Pendant cette phase, le nombre total des microorganismes viables reste
constant. Ceci peut rsulter dun entre division et mort cellulaire.
La phase de mortalit: aprs un certain temps, le taux de mortalit cellulaire
devient plus important que la division cellulaire et le nombre de cellules viables
chute (carence en nutriments et accumulation des dchets). Les cellules se
lysent et la culture devient moins trouble.

3. La diauxie :
En milieu synthtique, lorsque lon fournit la bactrie deux substrats carbons
(aliments limitants), tels que le glucose et le lactose, on peut observer deux
modes de croissance :
Une courbe de croissance normale, comme si un seul substrat limitant a t
donn ;
une courbe diphasique, caractrise par une premire croissance
exponentielle, suivie dun plateau puis dune deuxime phase exponentielle
succdant une phase de latence intermdiaire plus ou moins prononce.
Explication : au cours de la croissance, lun des substrats est utilis en premier
jusqu puisement (glucose) avant que le deuxime substrat (lactose) ne soit
assimil.

4. La croissance synchrone :
Dans une population bactrienne en phase exponentielle de croissance, les
cellules se multiplient la mme vitesse mais pas au mme moment
(asynchronisme de croissance). Au laboratoire, on peut obtenir des cellules
bactriennes qui se divisent au mme instant laide procds physico-chimiques
(filtration slective sur un support cellulosique ; choc thermique).
Dans de telles cultures synchrones, la partie logarithmique de la courbe de
croissance prend un aspect descalier, o chaque marche reprsente un
doublement brusque du nombre de cellules.

5. La culture continue :
Dans les systmes de culture continue, la population microbienne peut tre
maintenue longtemps en phase exponentielle de croissance par lapport continu
de nutriments et llimination des dchets.
Deux types principaux de systmes de culture continue sont gnralement
utiliss : les chmostats et les turbidostats.
Ces procds sont utiliss en industrie pour obtenir de grandes quantits de
mtabolites bactriens (vitamines), des toxines bactriennes (prparation
danatoxine).

6. La mesure de la croissance bactrienne :

Il existe plusieurs moyens de mesurer la croissance microbienne :
6.1. Mesure du nombre de cellules :
Comptage du nombre total des bactries :
Les chambres de comptage : les hmocytomtres
Les compteurs lectroniques tels que le Coulter
Les techniques de fluorescence ex : coloration lacridine orange.
Ces techniques ne permettent pas de diffrencier entres les cellules mortes et
viables.
Comptage du nombre de bactries viables :
Les techniques disolement par talement en surface ou en profondeur
Lutilisation des membranes filtrantes
6.2. Mesure de la biomasse cellulaire :
Dtermination du poids sec
Mesure de la turbidit
Mesure des marqueurs biochimiques : mesure du taux dATP, des protines,
des acides nucliques
Mesure des variations physico-chimiques du milieu : pH, impdance, potentiel
doxydo-rduction.

7. Facteurs physico-chimiques intervenant dans la croissance

bactrienne :
Lutilisation des nutriments par les bactries dpend des conditions
denvironnement susceptibles dinhiber ou de favoriser le dveloppement
bactrien :
7.1. La temprature:
La temprature influence la multiplication et le mtabolisme. Selon leur
temprature optimale de croissance, on distingue schmatiquement diverses
catgories de bactries :

Les bactries psychrophiles : se dveloppent bien OC et ont une

temprature optimale de croissance 15C ou moins. Le maximum est denviron
20C.
Les bactries psychrotrophes ou psychrophiles facultatifs : peuvent aussi
vivre 0C mme sils ont des tempratures optimales de croissance de 20
30 C et des maximums denviron 35C.
Les bactries msophiles : se dveloppent des tempratures optimales
denviron 20 45C avec une temprature minimale de 15 20 C. Leur
maximum est gal ou infrieur 45C. Presque tous les agents pathognes
humains sont msophiles vu que leur environnement a une temprature assez
constante de 37C.
Les bactries thermophiles : ils peuvent se dvelopper des tempratures
de 55C ou plus. Leur minimum est situ autour de 45C, avec des optimums
entre 55 et 65C. Certains thermophiles ont des maximums au dessus de
100C.
Les bactries hyperthermophiles : leur temprature optimale de croissance
se situe entre 80 et environ 113C. en gnral, ils ne se dveloppent pas bien
en-dessous de 55C.
7.2. Le pH:
Les bactries acidophiles ont leur optimum de croissance entre pH 1 et 6.
Les bactries neutrophiles se multiplient prfrentiellement des pH voisin
de la neutralit : 6.5 7.5.
Les bactries basophiles ou alcalophiles se dveloppent bien entre 8.5 et 11.5.
7.3. La pression:
Les bactries barophiles ou pizophiles croissent dans une atmosphre dont la
pression est suprieure la pression atmosphrique.
7.4. La pression osmotique:
Les bactries peuvent tre influences par des modifications de la concentration
osmotique de leur environnement (permabilit slective de la membrane
plasmique).
Les espces halophiles exigent pour pousser des concentrations leves en
chlorure de sodium souvent au dessus de 0.2M.
Les espces halotolrantes se dveloppent dans une large gamme de
concentration osmotique.
7.5. Loxygne:
Cest vis- vis de loxygne que les exigences gazeuses des bactries sont
prcises :
Les bactries arobies obligatoires : sont compltement dpendants de
loxygne atmosphrique pour vivre. Ex : Pseudomonas ; Mycobacterium.

Les bactries anarobies strictes ou obligatoires : ne tolrent pas loxygne

et ne peuvent se dvelopper et survivre quen absence doxygne. Ex :
Bacteroides, Clostridium).
Les bactries aro-anarobies ou anarobies facultatives : peuvent croitre
aussi bien en prsence quen absence doxygne. Ex : Escherichia.
Les bactries anarobies aro-tolrantes : tolrent loxygne mais leur
croissance est meilleure en anarobiose. Ex : Streptococcus pyogenes.
Les bactries micro-arophiles : ont besoin doxygne mais ne supportent
pas une concentration en oxygne quivalente celle de lair (20%) et elles ne
peuvent se multiplier quen prsence dune faible concentration en oxygne (2
10%).

III.

Les Milieux de Culture :

1. Dfinition :
Le milieu de culture doit apporter la bactrie un mlange quilibr de tous les
nutriments ncessaires, des concentrations qui permettent une croissance
optimale.
La composition du milieu de culture varie linfini. Elle est choisie en fonction du
but atteindre et des besoins requis par la bactrie.

2. Classification :

De trs nombreux milieux de culture sont utiliss en bactriologie et ils peuvent

tre classs selon de nombreux critres. Les classifications bases sur la
consistance, sur la composition et sur lutilisation sont les plus employes.
2.1. Classification selon la consistance:
Daprs leur consistance, on distingue les milieux liquides ou bouillons et les
milieux solides.
Les milieux solides permettent la croissance des bactries en colonies isoles et
donc leur sparation. Ils contiennent de la glose ou agar-agar (consistance
solide). Elle est soluble dans leau 100C et elle reste en surfusion jusqu 40C,
temprature laquelle elle se glifie. La glose prsente deux autres avantages :
elle nest que rarement attaque par les bactries dintrt mdical et elle
permet une observation aise des colonies.
2.2. Classification selon la composition:
Les milieux de culture doivent contenir quantitativement et qualitativement les
nutriments exigs pour la croissance et lentretien des bactries.
Leur pH est gnralement compris entre 7 et 7.6, leur isotonie correspond
gnralement une solution de NaCl 9 pour 1000 et leur taux dhumidit doit
tre suffisant pour permettre la croissance de la grande majorit des bactries.
Les milieux naturels ou empiriques:

Trs utiliss, ils sont prpars partir de constituants dorigine animale

(macrations ou dcoctions de tissus, peptones, uf, glatine, lait) ou dorigine
vgtale (pomme de terre, levure, soja).
Les macrations et les dcoctions sont obtenues en laissant sjourner dans
leau des tissus tels que du muscle, du foie ou de la cervelle. Au bout de
quelques heures on rcupre une solution riche en sels minraux, en vitamines
hydrosolubles en protines peu dgrades et en glucides. Ces macrations et
dcoctions sont commercialises sous le nom dextraits de viande.
Les peptones sont des mlanges de composs solubles dans leau et rsultant
de laction denzymes protolytiques sur diverses protines. Leur classification
repose sur la nature de lenzyme protolytique (peptones pepsiques,
pancratiques, trypsiques) et sur lorigine des protines (peptones de
viande, de casine, de glatine, de soja).
Exemples de milieux naturels :
Glose nutritive : macration de viande, peptone trypsique, NaCl, agaragar ;
Glose trypticase-soja : peptone trypsique de casine, peptone papanique
de soja, NaCl, glose .
Les milieux synthtiques:
Ont une composition parfaitement dfinie. Ils sont constitus de corps purs
chimiquement dfinis et dissous dans de leau distille en proportions
dtermines. Ex : le milieu ure-indole .
Les milieux semi-synthtiques:
Contiennent des substances chimiques pures en proportions dtermines et des
produits dorigine naturelle. La plupart des milieux actuellement commercialiss
sont des milieux semi-synthtiques. Ex : glose lactose au bromocrsol pourpre.
2.3. Classification selon lutilisation:
La classification daprs lutilisation permet de distinguer :
Les milieux usuels ou de base dun emploi aussi gnral que possible. Il
convient cependant de remarquer quaucun milieu nest apte assurer la
croissance de toutes les bactries. Ex : glose nutritive, bouillon nutritif ;
Les milieux disolement qui peuvent tre :
des milieux usuels. Ex : glose nutritive ;
des milieux enrichis (avec du sang, du srum..). Ex : glose au sang ;
des milieux lectifs ou denrichissement : permettent la culture
abondante et rapide de certaines bactries alors que la majorit des
espces sy dveloppent lentement. Ex : bouillon au slnite(SFB) pour les
salmonelles ;
des milieux slectifs : permettent la croissance dune ou de quelques
espces alors que la multiplication de la majorit des autres espces est

entrave. Un effet slectif est obtenu en jouant sur les facteurs physicochimiques (pH, pression osmotique) ou par lutilisation dagents
bactriostatiques. Ex :
- le milieu Chapman pour les staphylocoques ;
- le milieu Hektoen pour les bacilles Gram ngatif non exigeants ;
Les milieux didentification : qui permettent la mise en vidence des
caractres biochimiques des bactries et de rsoudre les problmes
didentification diffrentielle. Ex : milieu TSI ;
Les milieux de conservation : qui sont des milieux pauvres au sein desquels
les bactries survivent dans un tat de vie ralentie ;
Les milieux de transport (bouillon T.G.V).

Conclusion : les Applications de la Croissance

Bactrienne :
Ltude de la nutrition et de la croissance bactrienne est riche dapplications :
1. Le diagnostic bactriologique:
Elle permet de dfinir les paramtres assurant une culture optimale des
bactries (atmosphre gazeuse, temprature, pression) ;
Elle permet la confection de milieux servant cultiver, isoler et identifier les
bactries ainsi qu tudier leur sensibilit aux antibiotiques.
2. Lantibiothrapie:
Les modifications de la courbe de croissance permettent de mesurer lactivit
antibactrienne dun nouvel antibiotique sur une bactrie donne
3. Lindustrie:
Elle permet de
- fabriquer des denres alimentaires (vinaigres, yaourts) ;
- dobtenir de grandes quantits de substances dorigine bactrienne (toxines,
certains antibiotiques) et dobtenir des cellules bactriennes en grand nombre
en vue de la prparation de vaccins ou de ractifs (antignes utilisables dans
le diagnostic) ;
- Doser des vitamines et autres substances qui sont des facteurs de croissance.
4. Elle permet:
De raliser des contrles de strilit (mesure de linactivation des bactries
aprs strilisation ou de la densit bactrienne) (contrle de la qualit de lair,
contrle des surfaces) ou le contrle des denres alimentaires et des eaux de
boisson (recherche de bactries responsables de toxi-infections alimentaires).