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Introduction
Selon les conditions environnementales, une bactrie existe sous deux tats principaux :
(i) l'tat vgtatif durant lequel sont assures des biosynthses quilibres permettant
une croissance plus ou moins rapide et (ii) l'tat de repos caractris par un minimum
d'change avec le milieu extrieur et par une survie sans multiplication.
Chez les bactries la croissance peut se traduire par une augmentation de volume des
cellules, mais elle conduit principalement une augmentation du nombre de cellules.
L'tat de repos est un tat prcaire qui ncessite l'absence de conditions ltales et la
prsence d'un minimum de substrats assimilables afin d'assurer le mtabolisme de base
de la cellule. Dans une population au repos, il existe toujours un taux de mortalit dont
l'importance dpend des conditions ambiantes. Dans les conditions de conservation
optimale (lyophilisation ou conglation - 70 C) le taux de mortalit est faible mais il
n'est pas nul.
Pour assurer sa croissance ou sa survie, une bactrie doit trouver dans son
environnement de quoi satisfaire ses besoins nutritifs : substances nergtiques
permettant la cellule de raliser la synthse de ses constituants et substances
lmentaires ou matriaux constitutifs de la cellule.
Nutrition
Toutes les bactries ont besoin d'eau, d'une source d'nergie, d'une source de carbone,
d'une source d'azote et d'lments minraux. Ces besoins lmentaires sont suffisants
pour permettre la nutrition des bactries qualifies de prototrophes. Certaines bactries
qualifies d'auxotrophes ncessitent, en plus des besoins lmentaires, la prsence de
facteurs de croissance.
Eau
Source de carbone
Source d'azote
lments minraux
Facteurs de croissance
En prsence d'eau, d'une source d'nergie, d'une source de carbone, d'une source azote
et d'lments minraux, de nombreuses bactries sont capables de crotre et elles sont
qualifies de prototrophes. Les bactries auxotrophes ncessitent, en plus, un ou
plusieurs facteurs de croissance qu'elles sont incapables de synthtiser.
Un facteur de croissance ne doit pas tre confondu avec un mtabolite essentiel. Les
facteurs de croissance et les mtabolites essentiels sont des composs organiques
strictement ncessaires la nutrition. Toutefois, un mtabolite essentiel peut tre
synthtis par une bactrie alors qu'un facteur de croissance doit tre prsent dans
l'environnement car la bactrie est incapable de le synthtiser. Dans un milieu contenant
du glucose, une source d'azote et des sels minraux une bactrie telle
que Escherichia coli est capable de se multiplier alors que ce n'est pas le cas
pour Proteus vulgaris. La croissance de Proteusvulgaris exige l'adjonction supplmentaire
de nicotinamide. La nicotinamide est indispensable pour la croissance de ces deux
espces, mais contrairement Proteus vulgaris, Escherichia coli est capable d'en assurer
la synthse. La nicotinamide est un mtabolite essentiel pour ces deux espces, mais elle
n'est un facteur de croissance que pour Proteus vulgaris.
La notion de facteur de croissance est relative un genre, une espce voire mme
une souche.
Les facteurs de croissance sont des bases puriques ou pyrimidiques, des acides gras, des
acides amins, des vitamines (coenzymes, prcurseurs de coenzymes, groupements
prosthtiques de diverses enzymes) ou diverses composs comme l'hme et ses drivs.
L'exigence d'une souche pour le facteur X (protoporphyrine) et pour le facteur V
(nicotinamide adnine dinuclotide ou nicotinamide adnine dinuclotide phosphate) est
un temps essentiel de l'identification des espces du genre Haemophilus. Par
exemple, Haemophilus felis et Haemophilus parasuis exigent la prsence de facteur
V, Haemophilus haemoglobinophilus exige le facteur X et Haemophilus influenzaeexige
la fois le facteur X et le facteur V. Dans le sang frais, le NAD est souvent intracellulaire et
le sang frais contient des inhibiteurs du NAD. Aussi, les meilleurs milieux d'isolement
pour les espces exigeantes en facteur V sont des gloses au sang cuit ("glose
chocolat"), des gloses enrichies en extraits globulaires ou des gloses complmentes
en NAD ou en NADP.
Les besoins quantitatifs en facteurs de croissance sont de l'ordre de 10 g/mL pour les
bases puriques ou pyrimidiques, les acides gras ou les acides amins et de l'ordre de
moins de 1 g/mL pour les vitamines. En ce qui concerne le facteur X, selon les espces
et les souches, les exigences des Haemophilus spp. varient de 0,1 200 g/mL et les
exigences en facteur V sont comprises entre 0,2 et 25 g/mL.
La croissance d'une bactrie auxotrophe peut tre proportionnelle, dans certaines limites,
la concentration d'un facteur de croissance ce qui permet un dosage des facteurs de
croissance par voie microbiologique. Un exemple classique est le dosage microbiologique
de la vitamine B12 en utilisant une souche de Lactobacillus leichmannii ou la
souche Escherichia coli 113, auxotrophes pour la vitamine B12.
Un anti-mtabolite est un analogue structural d'un facteur de croissance, capable d'entrer
en comptition avec ce dernier et d'inhiber la croissance d'une souche auxotrophe. Ainsi,
le para-aminobenzne sulfanylamide (ou PAS) est une molcule proche de l'acide para-
aminobenzoque (ou PAB) et il peut jouer le rle d'un anti-mtabolite empchant la
croissance des bactries auxotrophes pour le PAB.
Les besoins en facteur de croissance peuvent parfois tre satisfaits par la prsence d'une
autre bactrie. Ce mcanisme d'interaction mtabolique, qualifi de syntrophie, se traduit
sur un milieu solide par la prsence de colonies satellites (bactrie auxotrophe) se
dveloppant au voisinage de la bactrie productrice du facteur de croissance.
Le besoin en facteur V des Haemophilus spp. peut s'tudier en utilisant une glose dans
laquelle on introduit, avant autoclavage, 5 10 p. cent de sang. Aprs autoclavage, le
facteur X (thermostable) reste prsent alors que le facteur V est dtruit. Le facteur V sera
alors apport par une souche de staphylocoques ou d'entrocoques ensemence selon
une strie. La croissance des souches exigeantes en facteur V ne sera alors observe qu'
proximit de la culture de staphylocoques ou d'entrocoques (voir figure 1).
Minral Lithotrophe
Donneur d'lectrons
Organique Organotrophe
Croissance
Une numration totale des cellules peut tre effectue au microscope en utilisant des
compartiments volumtriques (type hmatimtres) ou au moyen de compteurs de
particules. Ces deux techniques posent plusieurs problmes et, notamment, elles ne
permettent pas de distinguer facilement les cellules vivantes des cellules mortes.
La technique d'pifluorescence permet en thorie de distinguer les cellules vivantes des
cellules mortes. Elle utilise l'acridine orange ou d'autres fluorochromes qui se fixent sur
l'ADN. Examine en lumire ultraviolette, la fixation de l'acridine orange sur un ADN
bicatnaire donne une fluorescence verte alors que sa fixation sur un ADN monocatnaire
donne une fluorescence rouge. Au microscope lumire ultraviolette, les bactries au
repos apparaissent vertes alors que les bactries mortes, mais galement les bactries
en multiplication (ouverture de la double chane d'ADN lors de sa rplication),
apparaissent rouges.
La numration des cellules viables aprs culture est une technique de rfrence et
d'usage courant (figure 3). Un volume fixe d'une suspension bactrienne parfaitement
homogne et de ses dilutions est tal sur un milieu glos ou incorpor un milieu
glos en surfusion. Dans ces conditions, seules les cellules viables donnent une colonie.
Aprs incubation ralise dans des conditions convenables, on compte les colonies
bactriennes apparues sur ou dans le milieu de culture. L'analyse est ralise en triple
exemplaires et le comptage est effectue sur les botes renfermant entre 30 et 300
colonies. On ne peut cependant pas tre sr qu'une colonie rsulte du dveloppement
d'une seule bactrie. En effet, les amas ou les agglomrats bactriens donnent une seule
colonie et plusieurs bactries dposes par hasard proximit les unes des autres
peuvent galement donner naissance une seule colonie. Aussi, les rsultats ne sont pas
donns en nombre de cellules mais en units formant colonies (UFC ou CFU pour colony
forming unit).
D'autres techniques de numration, plus simples mettre en uvre, sont galement
utilises.
. Les systmes d'ensemencement en spirale font appel un ensemenceur semi-
automatique qui dpose un volume calibr d'un chantillon liquide la surface d'une
glose place sur un plateau tournant, en dcrivant une spirale d'Archimde. Aprs
incubation, la lecture se fait grce des abaques. Cette technique permet de raliser le
dnombrement bactrien d'un chantillon sur une seule et mme bote en supprimant
toutes ou partie des dilutions intermdiaires. Cette mthodologie est trs utilise en
bactriologie alimentaire et c'est une technique officiellement accepte.
. Les techniques des lames immerges font appel une lame en plastique recouverte de
milieux gloss. L'ensemencement est ralis en plongeant le dispositif dans la
suspension bactrienne ou le liquide biologique examiner. Aprs incubation, la lecture
s'effectue en apprciant la densit des colonies qui est compare des abaques fournies
par le fabricant. La technique des lames immerges est trs utilise pour la numration
des germes contenus dans des chantillons d'urine.
. Les botes-contact contiennent un milieu glos surlev. La glose est applique sur
des surfaces afin d'valuer leur contamination. Ces dispositifs sont d'une utilisation
courante dans les hpitaux et les industries.
. La technique des Ptrifilm fait appel un double film enduit de nutriments
dshydrats, d'un agent glifiant et d'un indicateur de pH ou de potentiel redox. La
suspension bactrienne est dpose entre les deux films et le systme est mis incuber.
La lecture consiste compter les colonies dont l'aspect est variable selon le systme
utilis. Pour plus d'informations, voir le site du fabricant : Les tests 3M Petrifilm.
Mesure de la biomasse
A partir d'une unique cellule, le cycle cellulaire donne naissance deux cellules filles qui
vont chacune donner leur tour deux autres cellules et ainsi de suite, selon une
progression gomtrique : 1 cellule ---> 2 cellules ---> 4 cellules ---> 8 cellules ---> 16
cellules ---> 32 cellules ...
Le temps ncessaire au doublement du nombre de cellules ou temps de gnration
dpend de l'espce, voire mme de la souche et des conditions environnementales. Dans
les conditions optimales de culture, le temps de gnration ou G est de 13 minutes
pour Vibrio parahaemolyticus, de 20 minutes pour Escherichia coli, de 100 minutes
pour Lactobacillus acidophilus et de 1000 minutes pour Mycobacteriumtuberculosis.
Le nombre de divisions par unit de temps est gal l'inverse du nombre de gnration
(1/G). Pour les exemples donns ci-dessus il est de 4,6 par heure
pour Vibrio parahaemolyticus, de 3 par heure pour Escherichia coli, de 0,6 par heure
pour Lactobacillus acidophilus et de 0,06 par heure pour Mycobacterium tuberculosis.
Courbe de croissance en milieu non renouvel
Dans une population bactrienne, toutes les cellules ne se divisent pas de manire
synchrone et la croissance s'effectue de faon continue. Dans un milieu non renouvel, la
croissance des bactries est limite par l'puisement du milieu en nutriments. La
cintique de la croissance peut tre tablie exprimentalement en mesurant les
variations de la masse bactrienne (m) en fonction du temps (t) (voir figure 4). La vitesse
de croissance dm/dt ou accroissement de masse par unit de temps est proportionnelle
la masse bactrienne prsente au temps t. Le coefficient de proportionnalit, dsign par
, est nomm taux de croissance.
Sur la courbe de croissance six phases peuvent tre dfinies : phase de latence, phase
d'acclration, phase de croissance exponentielle, phase de dclration, phase
stationnaire et phase de dclin (voir figure 4).
. La phase de latence, durant laquelle la masse reste identique la masse bactrienne
initiale, se caractrise par une valeur de gale zro. La dure de la phase de latence
est trs variable et elle dpend la fois de la nature du milieu ainsi que de la nature et de
la taille de l'inoculum bactrien.
Un inoculum bactrien prlev en phase exponentielle de croissance et ensemenc dans
un milieu neuf identique se multiplie sans aucune phase de latence. En revanche, si le
mme inoculum est plac dans un milieu diffrent on observe une phase de latence lie
l'adaptation des bactries aux nouveaux substrats (priode d'adaptation enzymatique
durant laquelle les bactries synthtisent de nouvelles enzymes leur permettant d'utiliser
de nouveaux nutriments).
L'ensemencement d'un inoculum important rduit la dure de la phase de latence par des
mcanismes mal connus. On peut supposer qu'un grand nombre de bactries est apte
neutraliser rapidement un effet toxique du milieu. On peut galement expliquer ce
phnomne par un simple problme technique de dtection de la biomasse qui est plus
facile si l'inoculum est dj important.
L'ge des bactries a une influence sur la dure de la latence qui peut tre trs courte
lorsque des cellules jeunes sont introduites dans un milieu neuf. En effet, un inoculum g
peut contenir de nombreuses cellules mortes et les quelques cellules viables devront se
diviser de nombreuses fois avant de donner une masse mesurable. De plus, dans un
inoculum g, les bactries sont dans un tat physiologique peu favorable et il leur faut
du temps pour restaurer leurs systmes enzymatiques mis au repos.
. La phase d'acclration se caractrise par une augmentation de plus en plus rapide de
la masse. Le taux de croissance devient suprieur zro et il augmente progressivement.
. La phase de croissance exponentielle ne dure que quelques heures. Durant cette phase,
la masse augmente de faon exponentielle et atteint une valeur maximale et
constante. Les bactries se multiplient sans entrave et elles librent des mtabolites
pouvant avoir un intrt industriel comme des antibiotiques ou des toxines. La pente de
la droite permet de mesurer la valeur ' qui est gale X 0,4343. La valeur de '
dpend des conditions d'environnement comme la temprature, le pH, la nature et le
concentration des nutriments.
. Au cours de la phase de dclration, l'augmentation de la masse bactrienne ralentit
et diminue progressivement.
. La phase stationnaire peut durer de quelques heures quelques jours. La masse
bactrienne est maximale et constante et est gal zro. Les bactries peuvent
continuer se diviser mais le taux de division est alors gal au taux de mortalit. Cette
phase rsulte d'un puisement du milieu et de l'accumulation de dchets toxiques.
Durant cette phase les bactries en ayant la capacit peuvent sporuler.
. Au cours de la phase de dclin, les bactries ne se divisent plus, beaucoup d'entre elles
meurent et sont dtruites par des autolysines. Dans quelques cas, les bactries
survivantes peuvent amorcer une nouvelle phase de multiplication en utilisant les
substances libres par la lyse des cellules. On parle alors de croissance cryptique.
Phnomne de diauxie
Le phnomne de diauxie, mis en vidence par Monod, se traduit par une courbe de
croissance diphasique. Il est observ dans des milieux synthtiques contenant au moins
deux sources de carbone et il est li un mcanisme de rpression catabolique. Par
exemple, dans un milieu contenant du glucose et du lactose, certaines espces vont dans
un premier temps utiliser le glucose grce des enzymes constitutives. La dgradation
du lactose est sous la dpendance d'enzymes inductibles dont l'induction est rprime en
prsence de glucose. Lorsque le glucose sera puis, les bactries utiliseront le lactose et
donneront une nouvelle phase de croissance exponentielle aprs un temps de latence
intermdiaire.
Cultures continues
Dans un milieu non renouvel, la phase exponentielle de croissance ne peut durer que
quelques heures. Dans un but industriel, il peut tre ncessaire de prolonger cette phase
en renouvelant constamment le milieu de culture et en liminant les produits du
mtabolisme. Les croissances continues sont obtenues l'aide de turbidostat, de
chmostats, de fermenteurs en continu multi-tages ou d'autres dispositifs industriels.
La croissance sur la surface d'un milieu solide se traduit soit par une nappe confluente
lorsque les bactries sont dposes en grand nombre soit par l'apparition de colonies
lorsque les cellules sont dposes de manire isole.
Lors de la formation d'une colonie, la croissance conduit d'abord l'apparition d'une
couche monocellulaire et la structure de la microcolonie est bidimensionnelle. La
prolifration des bactries de la priphrie conduit une extension radiale de la colonie
alors que la prolifration des bactries situes au centre de la colonie est l'origine de la
structure tridimensionnelle due la pousse vers le haut des cellules rsultant de la
division bactrienne.
La vitesse de croissance radiale dpend de lespce, de la souche et de la richesse du
milieu. Sur milieu pauvre, les colonies de Escherichia coli et de Klebsiella
pneumoniae croissent de 20 25 m/h lorsque la temprature est comprise entre 20 et
37 C. Sur un milieu riche, les colonies de Enterococcus faecalis croissent de 18 23
m/h et celles de Bacillus cereus de 575 m/h. La hauteur de la colonie est galement
fonction de l'espce. Chez Escherichia coli la hauteur augmente durant une quarantaine
d'heures puis elle cesse de s'accrotre.
Le dveloppement des colonies a des consquences en ce qui concerne l'accs des
bactries l'oxygne et aux nutriments. L'oxygne pntre difficilement dans une colonie
bien dveloppe et sa concentration au centre de la colonie peut tre faible. Les
nutriments diffusent vers le haut partir de la glose pour crer un gradient de
concentration inverse celui de l'oxygne.
Pour une bactrie arobie, toutes les cellules sont en croissance et en multiplication dans
une colonie jeune, alors que dans une colonie ge seules les cellules proches de la
surface continuent se multiplier. En effet, l'absence d'oxygne au centre de la colonie
inhibe la multiplication des bactries qui s'y trouvent.
Pour une espce aro-anarobie, l'oxygne a peu d'influence sur la multiplication et, quel
que soit l'ge des colonies, les cellules les plus actives sont celles en contact avec la
glose, zone o la concentration en substrat est la plus leve.
L'aspect des colonies est un critre important de l'identification d'une bactrie. Les
colonies se caractrisent par leur vitesse d'apparition, leur taille, leur aspect (colonies
lisses ou S pour smooth, colonies rugueuses ou R pour rough, colonies muqueuses ou M,
colonies brillantes ou mates, colonies bord rgulier ou irrgulier, colonies plates ou
surleves ou ayant un aspect en uf sur la plat, colonies pigmentes ou non
pigmentes, etc.), leur odeur (odeur de seringa pour Pseudomonas aeruginosa, odeur de
terre mouille pour Burkholderia pseusomallei, etc.), leur texture, leur caractre
hmolytique sur une glose au sang, leur adhrence ou non la glose, etc.
Les bactries viables mais non cultivables (VNC ou VBNC pour viable but
nonculturable)
En dpit de l'existence de trs nombreux milieux de culture, seule une infime proportion
de bactries peuvent tre cultives in vitro. On estime que les pourcentages de bactries
cultivables sont de 0,25 pour les espces vivant en eau douce, de 0,3 pour les bactries
du sol et 0,1 1 pour les espces colonisant l'homme ou les animaux. Actuellement de
nombreuses bactries ne sont connues que par les squences de leurs ARNr 16S. La
catgorie Candidatus a t propose en 1994 pour accueillir des bactries non cultivables
mais pour lesquelles on dispose, outre la squence de leurs ARNr, d'informations
concernant leur habitat, leur structure, leur mtabolisme etc.
Plusieurs tudes montrent que des bactries Gram ngatif ou Gram positif, telles
que Vibrio cholerae, Vibrio vulnificus, Mycobacterium tuberculosis, Campylobacter jejuni,
Helicobacter pylori ou Escherichia coli, ont la possibilit d'entrer dans un tat viable mais
non cultivable. Les bactries restent vivantes, elles ont une activit mtabolique rduite,
leur taille est souvent rduite, elles ont souvent une forme ovode, elles prsentent des
modifications structurales de leur membrane cytoplasmique, elles synthtisent de
nouvelles protines et elles sont incapables de crotre in vitro. L'tat viable mais non
cultivable serait gntiquement programm et permettrait une bactrie de survivre
dans des conditions qui lui sont hostiles. L'tat VNC prsente une importance majeure en
clinique car les bactries viables mais non cultivables sont capables de retrouver leur
virulence aprs infection de l'homme ou de l'animal.
Des bactries VNC pourraient tre responsables d'infections ou responsables de la
rsurgence d'infections observes chez des individus considrs comme guris depuis
plusieurs annes. Ainsi, les otites moyennes chroniques rsistantes aux antibiotiques ne
semblent pas dues une rponse inflammatoire comme on l'a longtemps cru mais elles
seraient dues la prsence de VNC rsistantes aux antibiotiques. Des cas de tuberculose
observs chez des individus guris seraient dus une "rsurrection" de mycobactries
VNC.
Les biofilms
Dans leur habitat naturel, les bactries vivent le plus souvent attachs des supports et
leur mode vie est sessile (par opposition au mode de vie planctonique ou vie l'tat libre
observe dans des milieux liquides). Les bactries sessiles forment des colonies qui se
recouvrent de polymres organiques et qui tendent s'associer en communaut. Elles
forment alors des biofilms que l'on retrouve dans les canalisations, la surface des
roches immerges d'une rivire, la surface des muqueuses, sur les dents (plaque
dentaire), sur les prothses, sur divers matriels mdicaux (cathter, valve cardiaque),
etc. Au sein des biofilms, les bactries sont soumises des phases d'abondance et de
restriction nutritionnelles, mais elles sont protges vis--vis des facteurs
environnementaux dfavorables (dessiccation, parasitisme par les bactriophages ou
les Bdellovibrio spp., prsence d'antibiotiques, prsence d'antiseptiques ou de
dsinfectants).
L'utilisation des nutriments par les bactries dpend des conditions d'environnement
susceptibles d'inhiber ou de favoriser le dveloppement bactrien.
Temprature
pH
Pression
Les bactries barophiles (du grec baros, poids, pesanteur) ou pizophiles (du grec piezein,
presser) se caractrisent par le fait que leur croissance est favorise par une incubation
dans une atmosphre dont la pression est suprieure la pression atmosphrique.
La plupart des bactries barophiles actuellement caractrises appartiennent la classe
des Gammaproteobacteria et elles se recrutent principalement au sein des
genres Colwellia (Colwellia hadaliensis), Moritella (Moritella abyssi, Moritella japonica, Mor
itella profunda et Moritella yayanosii), Photobacterium (Photobacterium profundum), Psyc
hromonas (Psychromonas kaikoae, Psychromonas profunda)
et Shewanella (Shewanella benthica et Shewanella violacea). Parmi ces
espces, Colwellia hadaliensis, Moritella yayanosii et Psychromonas kaikoae sont
strictement barophiles et leur culture doit obligatoirement tre ralise avec une pression
suprieure la pression atmosphrique.
Des bactries barophiles, n'appartenant pas la classe des Proteobacteria ont toutefois
t caractrises. C'est le cas par exemple de Thermococcus barophilus et
de Marinitoga piezophila.
Pression osmotique
Les bactries, l'exception des Mycoplasmatales, sont peu sensibles aux variations de
pression osmotique car elles sont protges par leur paroi. Toutefois, certaines espces
marines sont adaptes des milieux contenant environ 35 g de NaCl par litre.
Selon leur sensibilit la pression osmotique, on distingue trois groupes de bactries.
. Les bactries non-halophiles capables de crotre dans des milieux dont la concentration
en NaCl est infrieure 0,2 M.
. Les espces halophiles ne pouvant crotre que dans des milieux contenant des
concentrations en NaCl suprieures 0,2 M pour les moins halophiles (Cobetia marina)
5,2 M pour les plus halophiles
(Halococcus morrhuae, Halobacterium salinarum, Halorubrum sodomense).
. Les espces halotolrantes comme les Staphylococcus spp., les Listeria spp. ou
les Lactobacillus spp.
La conservation des aliments comme les salaisons ou les confitures fait appel une
augmentation de la pression osmotique. Ces procds ancestraux de conservation ont
recours l'addition de sel ou de sucre qui limitent la croissance de nombreuses bactries.
Seules les bactries osmophiles se multiplient en prsence de fortes concentrations de
sucre et seules les bactries halophiles se multiplient en prsence de fortes
concentrations de sel.
Oxygne
C'est vis--vis de l'oxygne que les exigences gazeuses des bactries sont prcises.
. Lors de leur mtabolisme nergtique certaines bactries utilisent l'oxygne molculaire
comme accepteur final d'lectrons. Ces bactries ont obligatoirement besoin d'oxygne
libre et elles sont qualifies d'arobies.
. Au contraire, les bactries anarobies ne peuvent se multiplier et survivre qu'en
l'absence d'oxygne. Ce sont des bactries qui ne possdent ni catalase ni peroxydase ni
superoxyde dismutase et qui sont donc incapables de dtoxifier les composs forms lors
de ractions d'oxydation (comme l'eau oxygne ou l'ion superoxyde).
. Les bactries aro-anarobies peuvent crotre aussi bien en prsence qu'en absence
d'oxygne.
. Les bactries anarobies-arotolrantes tolrent l'oxygne mais leur croissance est
meilleure en anarobiose.
. Les bactries micro-arophiles ont besoin d'oxygne, mais elles ne supportent pas une
tension en oxygne quivalente celle de l'air et elles ne peuvent se multiplier qu'en
prsence d'une faible tension d'oxygne.
La mise en vidence du type respiratoire est schmatise dans la figure 5.
La culture des bactries arobies ou aro-anarobies ou anarobies-arotolrantes ne
prsente pas de difficults particulires car l'incubation peut tre ralise dans
l'atmosphre ambiante. En revanche la culture des bactries anarobies et micro-
arophiles ncessitent une incubation dans une atmosphre dpourvue d'oxygne
(bactries anarobies) ou appauvrie en oxygne (bactries micro-arophiles).
L'utilisation de chambres anarobies est rserve des laboratoires spcialiss. Un
laboratoire de diagnostic non spcialis, fera gnralement appel l'utilisation de jarres
anarobies qui sont des rcipients en polycarbonate ou en alliage mtallique pouvant
contenir 10 30 botes de Ptri. Selon le type de jarre, deux grandes modalits
d'utilisation sont possibles.
La premire, appele la technique d'vacuation-remplacement, consiste faire le vide
dans la jarre puis la remplir avec un mlange gazeux dpourvu d'oxygne et contenant
du dioxyde de carbone souvent ncessaire la croissance des anarobies. Par exemple,
on utilisera un mlange trois gaz : H 2: CO2: N2: = 5:15:80 (ou 5:5:90). L'opration sera
rpte trois fois ce qui permet d'obtenir rapidement une anarobiose de bonne qualit.
La deuxime modalit, de mise en uvre plus facile, consiste utiliser des systmes
gnrateurs de gaz commercialiss. On place dans une jarre les botes de Ptri, un
catalyseur ainsi qu'un sachet contenant un mlange de bicarbonate de sodium, d'acide
tartrique et d'hydrure de carbone. Au moment de l'emploi le sachet est ouvert et
additionn d'eau et la jarre est ferme le plus rapidement possible. Il se produit un
dgagement de CO2 et d'H2 qui limine l'oxygne en prsence d'un catalyseur.
L'inconvnient du systme tient au temps ncessaire l'obtention de l'anarobiose et
une concentration en oxygne infrieure 0,2 p. cent n'est obtenu que 210 minutes
aprs la fermeture de la jarre.
Les milieux utiliss pour la culture des bactries anarobies sont soit des milieux pr-
rduits soit des milieux frachement prpars (ou dsars par bullition 100 C durant
20 minutes) et contenant un agent rducteur tel que du thioglycolate de sodium, du
glutathion, du chlorure de palladium, etc.
Des systmes comparables sont utiliss pour raliser une atmosphre micro-arophile.
Dans la technique d'vacuation-remplacement on utilise le plus souvent un mlange de
quatre gaz CO2: N2: O2: H2 = 5:88:5:2. On peut galement utiliser des jarres avec des
systmes gnrateurs de gaz condition d'enlever le catalyseur.
Milieux de culture
De trs nombreux milieux de culture sont utiliss en bactriologie et ils peuvent tre
classs selon de nombreux critres, mais toutes les classifications se recoupent. Seules
les classifications bases sur la consistance, sur la composition et sur l'utilisation seront
brivement envisages ci-dessous.
D'aprs leur consistance on distingue les milieux liquides ou bouillons et les milieux
solides.
Les milieux solides ont permis un progrs dcisif en bactriologie car ils permettent la
croissance des bactries en colonies isoles et donc leur sparation et leur purification.
En 1881 Koch utilisa la glatine pour solidifier les milieux. La glatine prsentait
cependant deux inconvnients : elle fond aux alentours de 25 C et elle est liqufie par
de nombreuses bactries. Ultrieurement Hesse proposa de remplacer la glatine par la
glose ou agar-agar. La glose, extraite d'algues, est un polyoside qui possde la
proprit de fixer une grande quantit d'eau (jusqu' 500 fois son poids). Elle est soluble
dans l'eau 100 C et elle reste en surfusion jusqu' 40 C, temprature laquelle elle se
glifie. Une fois glifie, il faudra la chauffer nouveau 100 C pour obtenir sa
liqufaction. Cela signifie qu'au cours d'une incubation, gnralement effectue des
tempratures variant de 20 45 C pour les bactries d'intrt vtrinaires, la glose
restera solide. Lorsque la glose est en surfusion, par exemple aux alentours de 45 C, on
peut lui ajouter des produits biologiques comme du sang, du srum ou du lait, sans que
ces produits biologiques soient altrs par la chaleur. Enfin la glose prsente deux
autres avantages : elle n'est que rarement attaque par les bactries d'intrt vtrinaire
et elle est transparente ce qui permet une observation aise des colonies.
Conclusion