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Nutrition et croissance des bactries (procaryotes)

http://www.biologiemarine.com/micro/nutrition.htm, 08/03/2017, 17 : 12.

Introduction

Selon les conditions environnementales, une bactrie existe sous deux tats principaux :
(i) l'tat vgtatif durant lequel sont assures des biosynthses quilibres permettant
une croissance plus ou moins rapide et (ii) l'tat de repos caractris par un minimum
d'change avec le milieu extrieur et par une survie sans multiplication.
Chez les bactries la croissance peut se traduire par une augmentation de volume des
cellules, mais elle conduit principalement une augmentation du nombre de cellules.
L'tat de repos est un tat prcaire qui ncessite l'absence de conditions ltales et la
prsence d'un minimum de substrats assimilables afin d'assurer le mtabolisme de base
de la cellule. Dans une population au repos, il existe toujours un taux de mortalit dont
l'importance dpend des conditions ambiantes. Dans les conditions de conservation
optimale (lyophilisation ou conglation - 70 C) le taux de mortalit est faible mais il
n'est pas nul.
Pour assurer sa croissance ou sa survie, une bactrie doit trouver dans son
environnement de quoi satisfaire ses besoins nutritifs : substances nergtiques
permettant la cellule de raliser la synthse de ses constituants et substances
lmentaires ou matriaux constitutifs de la cellule.

Nutrition

Toutes les bactries ont besoin d'eau, d'une source d'nergie, d'une source de carbone,
d'une source d'azote et d'lments minraux. Ces besoins lmentaires sont suffisants
pour permettre la nutrition des bactries qualifies de prototrophes. Certaines bactries
qualifies d'auxotrophes ncessitent, en plus des besoins lmentaires, la prsence de
facteurs de croissance.

Eau

L'eau reprsente 80 90 p. cent du poids cellulaire. Elle joue un rle fondamental en


solubilisant les nutriments, en assurant leur transport et en assurant les ractions
d'hydrolyse. Un paramtre appel Aw (activity of water, activit de l'eau) quantifie la
disponibilit de l'eau. Dans un nutriment, une partie de l'eau est plus ou moins lie aux
composants (sels, protines) et elle n'est pas disponible pour les micro-organismes qui
ont besoin d'eau libre pour se dvelopper. L'activit de l'eau se dfinit comme le rapport
de la pression de vapeur saturante du milieu la pression de vapeur saturante de l'eau
pure la mme temprature. Ce rapport, infrieur ou gal 1, peut tre assimil
l'humidit relative du milieu. Les bactries exigent un certain seuil d'humidit et pour des
Aw faibles, leur croissance est ralentie.
Certains germes ne se dveloppent que pour une valeur de l'Aw suprieure 0,97. C'est
le cas des Acinetobacter spp. (Aw > 0,99) ou de Clostridium botulinum (Aw > 0,97).
Les Salmonella spp. ou Escherichia coli commencent se multiplier pour une valeur de
l'Aw suprieure 0,95. Staphylococcus aureus se multiplie partir de 0,85 mais la
production ventuelle de toxines n'est possible que pour des valeurs suprieures
0,97. Listeria monocytogenes peut supporter une valeur de l'Aw de 0,83 et les bactries
halophiles une valeur de 0,75.
Les endospores peuvent survivre dans un environnement dpourvu d'eau libre.
Le degr d'humidit des aliments a une influence sur leur conservation et leur schage
est un procd de conservation fond en partie sur la diminution de l'Aw.
Source d'nergie

Selon la source d'nergie, les bactries se divisent en phototrophes et chimiotrophes.


La source d'nergie des bactries phototrophes est la lumire. Si la source d'lectrons est
minrale, les bactries sont qualifies de photolithotrophes et si la source d'lectrons est
organique, les bactries sont photo-organotrophes.
Les bactries chimiotrophes puisent leur nergie partir de composs minraux ou
organiques. Si le donneur d'lectrons est minral, les bactries sont chimiolithotrophes et
si le donneur d'lectrons est organique, les bactries sont chimio-organotrophes.

Source de carbone

Le carbone est l'lment constitutif le plus abondant chez les bactries.


Les bactries phototrophes et la plupart des bactries chimiolithotrophes peuvent utiliser
le dioxyde de carbone comme unique source de carbone et elles sont dites autotrophes.
Pour les autres bactries la source de carbone assimilable doit tre un substrat organique
et ces bactries sont qualifies de htrotrophes.
Le dioxyde de carbone seul ne permet pas la survie des htrotrophes, mais il joue
cependant un rle important chez ces bactries. En effet, la croissance de nombreuses
espces bactriennes htrotrophes est impossible en l'absence de dioxyde de carbone
et une atmosphre enrichie en dioxyde de carbone favorise la croissance de certaines
espces comme
les Brucella spp., Capnocytophaga spp., Neisseria spp., Campylobacter spp., Haemophilu
s spp., Taylorella spp. ...
Les bactries htrotrophes peuvent dgrader de nombreuses substances
hydrocarbones : alcools, acides organiques, sucres ou polyholosides. La liste des
substrats carbons utilisables par une souche bactrienne comme unique source de
carbone et d'nergie constitue l'auxanogramme de la souche. Les techniques
auxanographiques, gnralement ralises en milieu liquide et en utilisant des
micromthodes (systmes API, BioLogue, ...), sont utilises pour l'identification des
souches et pour des enqutes pidmiologiques. La bactrie tudier est place dans un
milieu dpourvu de toute source de carbone autre que celle apporte par le nutriment
dont on veut tudier l'assimilation. Selon que la bactrie est capable ou non d'assimiler le
nutriment qui lui est propos, on observera une culture (prsence d'un trouble) ou une
absence de culture (le milieu reste limpide).

Source d'azote

La synthse des protines ncessite des substances azotes.


L'azote molculaire est fix par quelques bactries vivant en symbiose avec des
lgumineuses ou des champignons ou par des bactries jouant un rle dans la
fertilisation des sols.
Pour la majorit des bactries la source d'azote est constitue par d'autres composs
inorganiques (ammoniac, sels d'ammonium, nitrites, nitrates) ou par des sources
organiques (groupements amines des composs organiques).

lments minraux

Le souffre et le phosphore sont particulirement importants.


. Le souffre est prsent dans certains acides amins (groupement thiol) et il est le plus
souvent incorpor sous forme de sulfate ou de composs souffrs organiques. Pour
certaines bactries, le souffre doit tre apport sous forme organique (mthiononine,
cystine, biotine, thiamine) qui se confond avec le besoin en facteurs de croissance
(Cf. infra).
. Le phosphore fait partie des acides nucliques, de nombreuses coenzymes et de l'ATP. il
est incorpor sous forme de phosphate inorganique.
Le sodium, le potassium, le magnsium et le chlore jouent un rle dans l'quilibre
physico-chimique de la cellule.
D'autres lments comme le fer, le manganse, le molybdne, le calcium, le vanadium ou
le cobalt sont des oligolments ncessaires des concentrations trs faibles.
Dans l'organisme, le fer est li la transferrine ou la lactoferrine et il n'est pas
directement disponible pour les bactries. Aussi, pour assurer leur multiplication, les
bactries pathognes ont dvelopp des mcanismes leur permettant de capter le fer
chlat la transferrine et la lactoferrine.

Facteurs de croissance

En prsence d'eau, d'une source d'nergie, d'une source de carbone, d'une source azote
et d'lments minraux, de nombreuses bactries sont capables de crotre et elles sont
qualifies de prototrophes. Les bactries auxotrophes ncessitent, en plus, un ou
plusieurs facteurs de croissance qu'elles sont incapables de synthtiser.
Un facteur de croissance ne doit pas tre confondu avec un mtabolite essentiel. Les
facteurs de croissance et les mtabolites essentiels sont des composs organiques
strictement ncessaires la nutrition. Toutefois, un mtabolite essentiel peut tre
synthtis par une bactrie alors qu'un facteur de croissance doit tre prsent dans
l'environnement car la bactrie est incapable de le synthtiser. Dans un milieu contenant
du glucose, une source d'azote et des sels minraux une bactrie telle
que Escherichia coli est capable de se multiplier alors que ce n'est pas le cas
pour Proteus vulgaris. La croissance de Proteusvulgaris exige l'adjonction supplmentaire
de nicotinamide. La nicotinamide est indispensable pour la croissance de ces deux
espces, mais contrairement Proteus vulgaris, Escherichia coli est capable d'en assurer
la synthse. La nicotinamide est un mtabolite essentiel pour ces deux espces, mais elle
n'est un facteur de croissance que pour Proteus vulgaris.
La notion de facteur de croissance est relative un genre, une espce voire mme
une souche.
Les facteurs de croissance sont des bases puriques ou pyrimidiques, des acides gras, des
acides amins, des vitamines (coenzymes, prcurseurs de coenzymes, groupements
prosthtiques de diverses enzymes) ou diverses composs comme l'hme et ses drivs.
L'exigence d'une souche pour le facteur X (protoporphyrine) et pour le facteur V
(nicotinamide adnine dinuclotide ou nicotinamide adnine dinuclotide phosphate) est
un temps essentiel de l'identification des espces du genre Haemophilus. Par
exemple, Haemophilus felis et Haemophilus parasuis exigent la prsence de facteur
V, Haemophilus haemoglobinophilus exige le facteur X et Haemophilus influenzaeexige
la fois le facteur X et le facteur V. Dans le sang frais, le NAD est souvent intracellulaire et
le sang frais contient des inhibiteurs du NAD. Aussi, les meilleurs milieux d'isolement
pour les espces exigeantes en facteur V sont des gloses au sang cuit ("glose
chocolat"), des gloses enrichies en extraits globulaires ou des gloses complmentes
en NAD ou en NADP.
Les besoins quantitatifs en facteurs de croissance sont de l'ordre de 10 g/mL pour les
bases puriques ou pyrimidiques, les acides gras ou les acides amins et de l'ordre de
moins de 1 g/mL pour les vitamines. En ce qui concerne le facteur X, selon les espces
et les souches, les exigences des Haemophilus spp. varient de 0,1 200 g/mL et les
exigences en facteur V sont comprises entre 0,2 et 25 g/mL.
La croissance d'une bactrie auxotrophe peut tre proportionnelle, dans certaines limites,
la concentration d'un facteur de croissance ce qui permet un dosage des facteurs de
croissance par voie microbiologique. Un exemple classique est le dosage microbiologique
de la vitamine B12 en utilisant une souche de Lactobacillus leichmannii ou la
souche Escherichia coli 113, auxotrophes pour la vitamine B12.
Un anti-mtabolite est un analogue structural d'un facteur de croissance, capable d'entrer
en comptition avec ce dernier et d'inhiber la croissance d'une souche auxotrophe. Ainsi,
le para-aminobenzne sulfanylamide (ou PAS) est une molcule proche de l'acide para-
aminobenzoque (ou PAB) et il peut jouer le rle d'un anti-mtabolite empchant la
croissance des bactries auxotrophes pour le PAB.
Les besoins en facteur de croissance peuvent parfois tre satisfaits par la prsence d'une
autre bactrie. Ce mcanisme d'interaction mtabolique, qualifi de syntrophie, se traduit
sur un milieu solide par la prsence de colonies satellites (bactrie auxotrophe) se
dveloppant au voisinage de la bactrie productrice du facteur de croissance.
Le besoin en facteur V des Haemophilus spp. peut s'tudier en utilisant une glose dans
laquelle on introduit, avant autoclavage, 5 10 p. cent de sang. Aprs autoclavage, le
facteur X (thermostable) reste prsent alors que le facteur V est dtruit. Le facteur V sera
alors apport par une souche de staphylocoques ou d'entrocoques ensemence selon
une strie. La croissance des souches exigeantes en facteur V ne sera alors observe qu'
proximit de la culture de staphylocoques ou d'entrocoques (voir figure 1).

Les diffrents types nutritionnels ou trophiques

Les diffrents types trophiques sont rsums dans le tableau ci-dessous.

Classe du besoin Nature du besoin Type trophique

Rayonnement lumineux Phototrophe


Source d'nergie Oxydation de composs Chimiotrophe
organiques ou inorganiques

Minral Lithotrophe
Donneur d'lectrons
Organique Organotrophe

Compos minral Autotrophe


Source de carbone
Compos organique Htrotrophe

Non ncessaires Prototrophe


Facteurs de croissance
Ncessaires Auxotrophe

Les bactries d'intrt vtrinaire sont principalement des bactries chimio-


organotrophes. Elles sont gnralement htrotrophes et elles peuvent tre prototrophes
ou auxotrophes.
Les bactries appartenant la classe des Chlamydiae et l'ordre des Rickettsiales tirent
leur nergie de la cellules qu'elles parasitent et elles sont qualifies de paratrophes.

Croissance

Le cycle cellulaire bactrien


Les synthses permettent aux bactries de crotre en taille et en volume jusqu' une
dimension limite qui conduit gnralement la division cellulaire par scission binaire. Le
cycle cellulaire a t particulirement bien tudi chez Escherichia coli (figure 2).
Dans une culture de Escherichia coli, les cellules bactriennes n'ont pas le mme ge et
si toutes les cellules ont un diamtre constant il n'en va pas de mme pour leur longueur.
Les cellules jeunes sont courtes alors que les cellules ges sont plus longues. En fait, la
longueur (et donc le volume) d'une cellule augmente jusqu' atteindre une valeur critique
dclenchant le division. Cette longueur critique, gale deux fois la longueur d'une
cellule nouvellement forme, est appele la longueur cellulaire unitaire (L).
Chez Escherichia coli, L est d'environ 1,6 m.
Un cycle cellulaire bactrien se dcompose en trois tapes : l'initiation (B), la rplication
de l'ADN chromosomique (C) et la division cellulaire (D). Ces trois tapes se succdent au
cours du cycle : C ne dbute qu' la fin de la priode B et D ne dbute que lorsque la
rplication de l'ADN chromosomique est termine.
Durant la priode B, on assiste la synthse d'ARNm et de protines ncessaires
linitiation de la rplication du chromosome.
Pendant la priode C, lADN chromosomique se rplique et, la fin de cette priode, les
deux copies du chromosome bactrien migrent chacune, selon un mcanisme actif, vers
une des deux futures cellules filles (quipartition).
Lorsque le chromosome bactrien sest entirement rpliqu, linitiation de la septation
est dclenche. La formation du septum est sous la dpendance d'au moins quatre
gnes. Une fois le septum form, le produit d'un cinquime gne conduit l'hydrolyse de
la double couche de peptidoglycane, puis la membrane externe sinvagine son tour.
Sous l'action d'un nouveau gne, la division sensu stricto a lieu et les cellules filles se
sparent.
La dure des tapes C et D ne varie pas avec le taux de croissance. Chez Escherichia coli,
C dure environ 40 minutes et D dure environ 20 minutes. En revanche, l'tape d'initiation
a une dure variable selon les conditions de culture et elle devient de plus en plus courte
quand le temps de gnration dcrot. Quand le temps ncessaire au doublement du
nombre de cellules (G) est gal 60 minutes, la priode B est gale zro et lorsque G
est infrieur 60 minutes, la priode B prend une valeur ngative ce qui revient dire
que la rplication du chromosome bactrien dbute avant mme que ne soit termine la
rplication du cycle prcdent. Plusieurs fourches de rplication de lADN chromosomique
sont alors prsentes dans la cellule bactrienne.
Chez les bactries Gram positif, dont la paroi est riche en peptidoglycane, la sparation
complte des bactries filles est sous la dpendance de la concentration en autolysines.
Lorsque la culture ne comprend qu'un faible nombre de cellules, les quantits
d'autolysines sont faibles et les bactries filles ne se sparent pas compltement ce qui
conduit la formation de chanes de cellules. Par contre, lorsque la culture est riche en
cellules (notamment au sein d'une colonie), les concentration en autolysines sont fortes,
elles agissent sur le peptidoglycane et les cellules filles se sparent compltement. C'est
la raison pour laquelle le mode de groupement des bactries doit s'apprcier sur une
culture jeune en milieu liquide et non partir d'une colonie.
Les espces des genres Streptococcus, Enterococcus et Lactococcus donnent naissance
des chanes de coques plus ou moins longues car les cellules se divisent selon un plan
quatorial. Les bacilles Gram positif peuvent donner des chanes (Bacillus spp.) ou
rester grouper par deux en ralisant des formes en V ou en L (Listeria spp.) ou former des
groupements rappelant des idogrammes chinois (Corynebacterium spp.). Des formes en
ttrades ou en amas rguliers apparaissent lorsque les bactries se divisent en mme
temps selon le mme plan quatorial : deux plans pour les ttrades
(Aerococcus spp., Tetrasphaera spp., Tetragenococcus spp.), trois plans pour les amas
cubiques (Sarcina spp.). Des amas irrguliers sont observs lorsque les bactries se
divisent de manire anarchique
(Staphylococcusspp., Macrococcus spp., Micrococcus spp.).
Au sein de la classe des Actinobacteria les bactries se multiplient exclusivement,
prfrentiellement, ou occasionnellement, selon un mode qui se rapproche de celui des
champignons. Ces bactries forment des filaments ramifis ou hyphes dont l'ensemble
constitue le myclium.
Le genre le plus reprsentatif de cette classe est le genre Streptomyces dont le cycle
cellulaire peut tre rsum de la manire suivante. La cellule bactrienne initiale (ou
conidie ou arthrospore) donne naissance un tube germinatif qui se diffrencie en un
myclium rampant en surface ou pntrant dans le substrat. Aprs une priode de
croissance, le myclium se dveloppe verticalement. Ces hyphes ariens vont dvelopper
des torsades, tel un tire-bouchon. Leurs parties terminales, aprs une srie de
rplications et de migrations du chromosome bactrien, se cloisonnent (formation de
septums) et forme autant de jeunes cellules bactriennes que l'on appelle des conidies ou
arthrospores par analogie avec les spores fongiques. Aprs maturation, les hyphes
ariens se rompent et librent les conidies qui seront l'origine d'un nouveau cycle. Les
arthrospores du genre Dermatophilus possdent aussi la proprit dtre mobiles
La structure myclienne typique du genre Streptomyces est plus rudimentaire pour
les Actinomyces spp. et surtout pour les Mycobacterium spp. qui ne forment jamais
d'hyphes ariens.

Moyens d'tude de la croissance

Les techniques permettant l'tude de la croissance sont nombreuses ce qui montre


qu'aucune n'est parfaite. Sur un milieu solide, l'tude de la croissance est rendue difficile
en raison notamment de l'agrgation des cellules les unes aux autres. En milieu liquide,
les cellules sont disperses (ou si elles sont agrges, il est possible de les disperser par
agitation) ce qui permet des prises d'chantillons. La croissance peut alors tre apprcie
en se basant sur le nombre de cellules ou sur la masse bactrienne.

Mesure du nombre de cellules

Une numration totale des cellules peut tre effectue au microscope en utilisant des
compartiments volumtriques (type hmatimtres) ou au moyen de compteurs de
particules. Ces deux techniques posent plusieurs problmes et, notamment, elles ne
permettent pas de distinguer facilement les cellules vivantes des cellules mortes.
La technique d'pifluorescence permet en thorie de distinguer les cellules vivantes des
cellules mortes. Elle utilise l'acridine orange ou d'autres fluorochromes qui se fixent sur
l'ADN. Examine en lumire ultraviolette, la fixation de l'acridine orange sur un ADN
bicatnaire donne une fluorescence verte alors que sa fixation sur un ADN monocatnaire
donne une fluorescence rouge. Au microscope lumire ultraviolette, les bactries au
repos apparaissent vertes alors que les bactries mortes, mais galement les bactries
en multiplication (ouverture de la double chane d'ADN lors de sa rplication),
apparaissent rouges.
La numration des cellules viables aprs culture est une technique de rfrence et
d'usage courant (figure 3). Un volume fixe d'une suspension bactrienne parfaitement
homogne et de ses dilutions est tal sur un milieu glos ou incorpor un milieu
glos en surfusion. Dans ces conditions, seules les cellules viables donnent une colonie.
Aprs incubation ralise dans des conditions convenables, on compte les colonies
bactriennes apparues sur ou dans le milieu de culture. L'analyse est ralise en triple
exemplaires et le comptage est effectue sur les botes renfermant entre 30 et 300
colonies. On ne peut cependant pas tre sr qu'une colonie rsulte du dveloppement
d'une seule bactrie. En effet, les amas ou les agglomrats bactriens donnent une seule
colonie et plusieurs bactries dposes par hasard proximit les unes des autres
peuvent galement donner naissance une seule colonie. Aussi, les rsultats ne sont pas
donns en nombre de cellules mais en units formant colonies (UFC ou CFU pour colony
forming unit).
D'autres techniques de numration, plus simples mettre en uvre, sont galement
utilises.
. Les systmes d'ensemencement en spirale font appel un ensemenceur semi-
automatique qui dpose un volume calibr d'un chantillon liquide la surface d'une
glose place sur un plateau tournant, en dcrivant une spirale d'Archimde. Aprs
incubation, la lecture se fait grce des abaques. Cette technique permet de raliser le
dnombrement bactrien d'un chantillon sur une seule et mme bote en supprimant
toutes ou partie des dilutions intermdiaires. Cette mthodologie est trs utilise en
bactriologie alimentaire et c'est une technique officiellement accepte.
. Les techniques des lames immerges font appel une lame en plastique recouverte de
milieux gloss. L'ensemencement est ralis en plongeant le dispositif dans la
suspension bactrienne ou le liquide biologique examiner. Aprs incubation, la lecture
s'effectue en apprciant la densit des colonies qui est compare des abaques fournies
par le fabricant. La technique des lames immerges est trs utilise pour la numration
des germes contenus dans des chantillons d'urine.
. Les botes-contact contiennent un milieu glos surlev. La glose est applique sur
des surfaces afin d'valuer leur contamination. Ces dispositifs sont d'une utilisation
courante dans les hpitaux et les industries.
. La technique des Ptrifilm fait appel un double film enduit de nutriments
dshydrats, d'un agent glifiant et d'un indicateur de pH ou de potentiel redox. La
suspension bactrienne est dpose entre les deux films et le systme est mis incuber.
La lecture consiste compter les colonies dont l'aspect est variable selon le systme
utilis. Pour plus d'informations, voir le site du fabricant : Les tests 3M Petrifilm.

Mesure de la biomasse

De trs nombreuses techniques permettent de mesurer la biomasse : dtermination du


poids sec, mesure de la densit optique, mesure d'un ou de plusieurs constituants
cellulaires, mesure de la consommation d'un substrat, mesure des produits d'excrtion,
mesure des variations physico-chimiques induites par la croissance, etc.
La mesure de la densit optique est la technique la plus simple, la plus rapide et la plus
utilise. Elle consiste mesurer la lumire absorbe par une suspension bactrienne
l'aide d'un spectrophotomtre rgl une longueur d'onde de 650 nm (longueur d'onde
pour laquelle l'absorption de la lumire par les constituants cellulaires est la plus faible).
Dans des conditions techniques prcises, l'absorbance est proportionnelle la
concentration cellulaire. La turbidit tant inversement proportionnelle la surface de la
particule, pour que la turbidit soit une mesure prcise de la masse bactrienne, il faut
que la surface cellulaire moyenne reste constante au cours de la mesure. Cette situation
ne se produit qu'au cours de la phase active de croissance (phase exponentielle, Cf. infra)
et toute mesure effectue sur des cellules au repos est errone. La mesure de la densit
optique a une sensibilit modre (il faut au moins 10 7 bactries par mL pour pouvoir
mesurer une densit optique), elle est inutilisable avec des milieux trs colors et elle est
incapable de diffrencier les cellules vivantes des cellules mortes.

Les constantes de la croissance

A partir d'une unique cellule, le cycle cellulaire donne naissance deux cellules filles qui
vont chacune donner leur tour deux autres cellules et ainsi de suite, selon une
progression gomtrique : 1 cellule ---> 2 cellules ---> 4 cellules ---> 8 cellules ---> 16
cellules ---> 32 cellules ...
Le temps ncessaire au doublement du nombre de cellules ou temps de gnration
dpend de l'espce, voire mme de la souche et des conditions environnementales. Dans
les conditions optimales de culture, le temps de gnration ou G est de 13 minutes
pour Vibrio parahaemolyticus, de 20 minutes pour Escherichia coli, de 100 minutes
pour Lactobacillus acidophilus et de 1000 minutes pour Mycobacteriumtuberculosis.
Le nombre de divisions par unit de temps est gal l'inverse du nombre de gnration
(1/G). Pour les exemples donns ci-dessus il est de 4,6 par heure
pour Vibrio parahaemolyticus, de 3 par heure pour Escherichia coli, de 0,6 par heure
pour Lactobacillus acidophilus et de 0,06 par heure pour Mycobacterium tuberculosis.
Courbe de croissance en milieu non renouvel

Dans une population bactrienne, toutes les cellules ne se divisent pas de manire
synchrone et la croissance s'effectue de faon continue. Dans un milieu non renouvel, la
croissance des bactries est limite par l'puisement du milieu en nutriments. La
cintique de la croissance peut tre tablie exprimentalement en mesurant les
variations de la masse bactrienne (m) en fonction du temps (t) (voir figure 4). La vitesse
de croissance dm/dt ou accroissement de masse par unit de temps est proportionnelle
la masse bactrienne prsente au temps t. Le coefficient de proportionnalit, dsign par
, est nomm taux de croissance.
Sur la courbe de croissance six phases peuvent tre dfinies : phase de latence, phase
d'acclration, phase de croissance exponentielle, phase de dclration, phase
stationnaire et phase de dclin (voir figure 4).
. La phase de latence, durant laquelle la masse reste identique la masse bactrienne
initiale, se caractrise par une valeur de gale zro. La dure de la phase de latence
est trs variable et elle dpend la fois de la nature du milieu ainsi que de la nature et de
la taille de l'inoculum bactrien.
Un inoculum bactrien prlev en phase exponentielle de croissance et ensemenc dans
un milieu neuf identique se multiplie sans aucune phase de latence. En revanche, si le
mme inoculum est plac dans un milieu diffrent on observe une phase de latence lie
l'adaptation des bactries aux nouveaux substrats (priode d'adaptation enzymatique
durant laquelle les bactries synthtisent de nouvelles enzymes leur permettant d'utiliser
de nouveaux nutriments).
L'ensemencement d'un inoculum important rduit la dure de la phase de latence par des
mcanismes mal connus. On peut supposer qu'un grand nombre de bactries est apte
neutraliser rapidement un effet toxique du milieu. On peut galement expliquer ce
phnomne par un simple problme technique de dtection de la biomasse qui est plus
facile si l'inoculum est dj important.
L'ge des bactries a une influence sur la dure de la latence qui peut tre trs courte
lorsque des cellules jeunes sont introduites dans un milieu neuf. En effet, un inoculum g
peut contenir de nombreuses cellules mortes et les quelques cellules viables devront se
diviser de nombreuses fois avant de donner une masse mesurable. De plus, dans un
inoculum g, les bactries sont dans un tat physiologique peu favorable et il leur faut
du temps pour restaurer leurs systmes enzymatiques mis au repos.
. La phase d'acclration se caractrise par une augmentation de plus en plus rapide de
la masse. Le taux de croissance devient suprieur zro et il augmente progressivement.
. La phase de croissance exponentielle ne dure que quelques heures. Durant cette phase,
la masse augmente de faon exponentielle et atteint une valeur maximale et
constante. Les bactries se multiplient sans entrave et elles librent des mtabolites
pouvant avoir un intrt industriel comme des antibiotiques ou des toxines. La pente de
la droite permet de mesurer la valeur ' qui est gale X 0,4343. La valeur de '
dpend des conditions d'environnement comme la temprature, le pH, la nature et le
concentration des nutriments.
. Au cours de la phase de dclration, l'augmentation de la masse bactrienne ralentit
et diminue progressivement.
. La phase stationnaire peut durer de quelques heures quelques jours. La masse
bactrienne est maximale et constante et est gal zro. Les bactries peuvent
continuer se diviser mais le taux de division est alors gal au taux de mortalit. Cette
phase rsulte d'un puisement du milieu et de l'accumulation de dchets toxiques.
Durant cette phase les bactries en ayant la capacit peuvent sporuler.
. Au cours de la phase de dclin, les bactries ne se divisent plus, beaucoup d'entre elles
meurent et sont dtruites par des autolysines. Dans quelques cas, les bactries
survivantes peuvent amorcer une nouvelle phase de multiplication en utilisant les
substances libres par la lyse des cellules. On parle alors de croissance cryptique.
Phnomne de diauxie

Le phnomne de diauxie, mis en vidence par Monod, se traduit par une courbe de
croissance diphasique. Il est observ dans des milieux synthtiques contenant au moins
deux sources de carbone et il est li un mcanisme de rpression catabolique. Par
exemple, dans un milieu contenant du glucose et du lactose, certaines espces vont dans
un premier temps utiliser le glucose grce des enzymes constitutives. La dgradation
du lactose est sous la dpendance d'enzymes inductibles dont l'induction est rprime en
prsence de glucose. Lorsque le glucose sera puis, les bactries utiliseront le lactose et
donneront une nouvelle phase de croissance exponentielle aprs un temps de latence
intermdiaire.

Cultures continues

Dans un milieu non renouvel, la phase exponentielle de croissance ne peut durer que
quelques heures. Dans un but industriel, il peut tre ncessaire de prolonger cette phase
en renouvelant constamment le milieu de culture et en liminant les produits du
mtabolisme. Les croissances continues sont obtenues l'aide de turbidostat, de
chmostats, de fermenteurs en continu multi-tages ou d'autres dispositifs industriels.

Croissance en milieu solide

La croissance sur la surface d'un milieu solide se traduit soit par une nappe confluente
lorsque les bactries sont dposes en grand nombre soit par l'apparition de colonies
lorsque les cellules sont dposes de manire isole.
Lors de la formation d'une colonie, la croissance conduit d'abord l'apparition d'une
couche monocellulaire et la structure de la microcolonie est bidimensionnelle. La
prolifration des bactries de la priphrie conduit une extension radiale de la colonie
alors que la prolifration des bactries situes au centre de la colonie est l'origine de la
structure tridimensionnelle due la pousse vers le haut des cellules rsultant de la
division bactrienne.
La vitesse de croissance radiale dpend de lespce, de la souche et de la richesse du
milieu. Sur milieu pauvre, les colonies de Escherichia coli et de Klebsiella
pneumoniae croissent de 20 25 m/h lorsque la temprature est comprise entre 20 et
37 C. Sur un milieu riche, les colonies de Enterococcus faecalis croissent de 18 23
m/h et celles de Bacillus cereus de 575 m/h. La hauteur de la colonie est galement
fonction de l'espce. Chez Escherichia coli la hauteur augmente durant une quarantaine
d'heures puis elle cesse de s'accrotre.
Le dveloppement des colonies a des consquences en ce qui concerne l'accs des
bactries l'oxygne et aux nutriments. L'oxygne pntre difficilement dans une colonie
bien dveloppe et sa concentration au centre de la colonie peut tre faible. Les
nutriments diffusent vers le haut partir de la glose pour crer un gradient de
concentration inverse celui de l'oxygne.
Pour une bactrie arobie, toutes les cellules sont en croissance et en multiplication dans
une colonie jeune, alors que dans une colonie ge seules les cellules proches de la
surface continuent se multiplier. En effet, l'absence d'oxygne au centre de la colonie
inhibe la multiplication des bactries qui s'y trouvent.
Pour une espce aro-anarobie, l'oxygne a peu d'influence sur la multiplication et, quel
que soit l'ge des colonies, les cellules les plus actives sont celles en contact avec la
glose, zone o la concentration en substrat est la plus leve.
L'aspect des colonies est un critre important de l'identification d'une bactrie. Les
colonies se caractrisent par leur vitesse d'apparition, leur taille, leur aspect (colonies
lisses ou S pour smooth, colonies rugueuses ou R pour rough, colonies muqueuses ou M,
colonies brillantes ou mates, colonies bord rgulier ou irrgulier, colonies plates ou
surleves ou ayant un aspect en uf sur la plat, colonies pigmentes ou non
pigmentes, etc.), leur odeur (odeur de seringa pour Pseudomonas aeruginosa, odeur de
terre mouille pour Burkholderia pseusomallei, etc.), leur texture, leur caractre
hmolytique sur une glose au sang, leur adhrence ou non la glose, etc.

Les bactries viables mais non cultivables (VNC ou VBNC pour viable but
nonculturable)

En dpit de l'existence de trs nombreux milieux de culture, seule une infime proportion
de bactries peuvent tre cultives in vitro. On estime que les pourcentages de bactries
cultivables sont de 0,25 pour les espces vivant en eau douce, de 0,3 pour les bactries
du sol et 0,1 1 pour les espces colonisant l'homme ou les animaux. Actuellement de
nombreuses bactries ne sont connues que par les squences de leurs ARNr 16S. La
catgorie Candidatus a t propose en 1994 pour accueillir des bactries non cultivables
mais pour lesquelles on dispose, outre la squence de leurs ARNr, d'informations
concernant leur habitat, leur structure, leur mtabolisme etc.
Plusieurs tudes montrent que des bactries Gram ngatif ou Gram positif, telles
que Vibrio cholerae, Vibrio vulnificus, Mycobacterium tuberculosis, Campylobacter jejuni,
Helicobacter pylori ou Escherichia coli, ont la possibilit d'entrer dans un tat viable mais
non cultivable. Les bactries restent vivantes, elles ont une activit mtabolique rduite,
leur taille est souvent rduite, elles ont souvent une forme ovode, elles prsentent des
modifications structurales de leur membrane cytoplasmique, elles synthtisent de
nouvelles protines et elles sont incapables de crotre in vitro. L'tat viable mais non
cultivable serait gntiquement programm et permettrait une bactrie de survivre
dans des conditions qui lui sont hostiles. L'tat VNC prsente une importance majeure en
clinique car les bactries viables mais non cultivables sont capables de retrouver leur
virulence aprs infection de l'homme ou de l'animal.
Des bactries VNC pourraient tre responsables d'infections ou responsables de la
rsurgence d'infections observes chez des individus considrs comme guris depuis
plusieurs annes. Ainsi, les otites moyennes chroniques rsistantes aux antibiotiques ne
semblent pas dues une rponse inflammatoire comme on l'a longtemps cru mais elles
seraient dues la prsence de VNC rsistantes aux antibiotiques. Des cas de tuberculose
observs chez des individus guris seraient dus une "rsurrection" de mycobactries
VNC.

Les biofilms

Dans leur habitat naturel, les bactries vivent le plus souvent attachs des supports et
leur mode vie est sessile (par opposition au mode de vie planctonique ou vie l'tat libre
observe dans des milieux liquides). Les bactries sessiles forment des colonies qui se
recouvrent de polymres organiques et qui tendent s'associer en communaut. Elles
forment alors des biofilms que l'on retrouve dans les canalisations, la surface des
roches immerges d'une rivire, la surface des muqueuses, sur les dents (plaque
dentaire), sur les prothses, sur divers matriels mdicaux (cathter, valve cardiaque),
etc. Au sein des biofilms, les bactries sont soumises des phases d'abondance et de
restriction nutritionnelles, mais elles sont protges vis--vis des facteurs
environnementaux dfavorables (dessiccation, parasitisme par les bactriophages ou
les Bdellovibrio spp., prsence d'antibiotiques, prsence d'antiseptiques ou de
dsinfectants).

Facteurs physico-chimiques intervenant dans la croissance bactrienne

L'utilisation des nutriments par les bactries dpend des conditions d'environnement
susceptibles d'inhiber ou de favoriser le dveloppement bactrien.
Temprature

La temprature influence la multiplication et le mtabolisme. Selon leur temprature


optimale de croissance, on distingue schmatiquement diverses catgories de bactries.
. Les bactries msophiles prfrent une temprature moyenne comprise entre 20 et 40
C.
. Les psychrotrophes ont une temprature optimale de multiplication de 20 25 C, mais
elles peuvent galement cultiver 0 C.
. Les bactries psychrophiles ont une temprature optimale de croissance situe aux
environs de 10 C, mais elles peuvent cultiver 0 C.
. Les cryophiles peuvent se dvelopper des tempratures ngatives. Par
exemple, Trichococcus patagoniensis, isol en Patagonie des fces de pingouins, cultive
- 5 C.
. Les thermotrophes se dveloppent 50 C, mais leur temprature optimale de
croissance est comprise entre 30 et 40 C.
. Les thermophiles se multiplient prfrentiellement entre 45 et 55 C.
. Les hyperthermophiles ont une temprature optimale de croissance suprieure ou gale
70 C. Methanothermus sociabilis cultive 97 C, Pyrobaculum islandicum cultive 100
C, Pyrococcus furiosus a une temprature optimale de croissance de 100
C, Pyrodictium occultum a une temprature optimale de croissance de 105
C, Methanopyrus kandleri cultive 110 C et le record semble tre dtenu
par Pyrolobus fumarii apte se multiplier 113 C.
Les bactries constituant les flores bactriennes des mammifres ainsi que les bactries
pathognes pour les mammifres et les oiseaux sont des bactries msophiles. Les
bactries psychrotrophes et psychrophiles jouent un rle important car elles peuvent
contaminer et altrer des produits biologiques (sang et drivs du sang) ainsi que des
aliments conservs basse temprature.

pH

La majorit des bactries se multiplient prfrentiellement des pH voisins de la


neutralit (6,5 7,5), mais elles sont capables de crotre dans une large gamme de pH.
Par exemple, Escherichia coli peut se multiplier pour des pH compris entre 4,4 et 9,0.
Certaines bactries qualifies de acidophiles prfrent un pH acide. C'est le cas des
lactobacilles dont le pH optimal est de 6. Parmi les bactries n'ayant pas d'intrt en
biologie vtrinaire, on peut citer Thermoplasma acidophilum dont le pH optimal est
compris entre 0,8 et 3 et Thiobacillus thiooxidans dont le pH optimal de croissance est de
2 et qui peut se multiplier un pH de 0.
Inversement, les bactries basophiles (ou alcalophiles) prfrent des pH alcalins. Ainsi, le
pH optimal est de 9 pour la multiplication de Vibrio cholerae, il est compris entre 8,5 et
9,5 pour Exiguobacteriumaurantiacum et Alkaliphilus transvaalensis est capable de
crotre un pH de 12,5.
Au cours des cultures, le mtabolisme bactrien engendre des composs acides ou
basiques qui seraient susceptibles d'entraver la multiplication bactrienne. Pour viter
ces variations de pH, les milieux de culture sont tamponns, le plus souvent en utilisant
des tampons phosphates.

Pression

Les bactries barophiles (du grec baros, poids, pesanteur) ou pizophiles (du grec piezein,
presser) se caractrisent par le fait que leur croissance est favorise par une incubation
dans une atmosphre dont la pression est suprieure la pression atmosphrique.
La plupart des bactries barophiles actuellement caractrises appartiennent la classe
des Gammaproteobacteria et elles se recrutent principalement au sein des
genres Colwellia (Colwellia hadaliensis), Moritella (Moritella abyssi, Moritella japonica, Mor
itella profunda et Moritella yayanosii), Photobacterium (Photobacterium profundum), Psyc
hromonas (Psychromonas kaikoae, Psychromonas profunda)
et Shewanella (Shewanella benthica et Shewanella violacea). Parmi ces
espces, Colwellia hadaliensis, Moritella yayanosii et Psychromonas kaikoae sont
strictement barophiles et leur culture doit obligatoirement tre ralise avec une pression
suprieure la pression atmosphrique.
Des bactries barophiles, n'appartenant pas la classe des Proteobacteria ont toutefois
t caractrises. C'est le cas par exemple de Thermococcus barophilus et
de Marinitoga piezophila.

Pression osmotique

Les bactries, l'exception des Mycoplasmatales, sont peu sensibles aux variations de
pression osmotique car elles sont protges par leur paroi. Toutefois, certaines espces
marines sont adaptes des milieux contenant environ 35 g de NaCl par litre.
Selon leur sensibilit la pression osmotique, on distingue trois groupes de bactries.
. Les bactries non-halophiles capables de crotre dans des milieux dont la concentration
en NaCl est infrieure 0,2 M.
. Les espces halophiles ne pouvant crotre que dans des milieux contenant des
concentrations en NaCl suprieures 0,2 M pour les moins halophiles (Cobetia marina)
5,2 M pour les plus halophiles
(Halococcus morrhuae, Halobacterium salinarum, Halorubrum sodomense).
. Les espces halotolrantes comme les Staphylococcus spp., les Listeria spp. ou
les Lactobacillus spp.
La conservation des aliments comme les salaisons ou les confitures fait appel une
augmentation de la pression osmotique. Ces procds ancestraux de conservation ont
recours l'addition de sel ou de sucre qui limitent la croissance de nombreuses bactries.
Seules les bactries osmophiles se multiplient en prsence de fortes concentrations de
sucre et seules les bactries halophiles se multiplient en prsence de fortes
concentrations de sel.

Oxygne

C'est vis--vis de l'oxygne que les exigences gazeuses des bactries sont prcises.
. Lors de leur mtabolisme nergtique certaines bactries utilisent l'oxygne molculaire
comme accepteur final d'lectrons. Ces bactries ont obligatoirement besoin d'oxygne
libre et elles sont qualifies d'arobies.
. Au contraire, les bactries anarobies ne peuvent se multiplier et survivre qu'en
l'absence d'oxygne. Ce sont des bactries qui ne possdent ni catalase ni peroxydase ni
superoxyde dismutase et qui sont donc incapables de dtoxifier les composs forms lors
de ractions d'oxydation (comme l'eau oxygne ou l'ion superoxyde).
. Les bactries aro-anarobies peuvent crotre aussi bien en prsence qu'en absence
d'oxygne.
. Les bactries anarobies-arotolrantes tolrent l'oxygne mais leur croissance est
meilleure en anarobiose.
. Les bactries micro-arophiles ont besoin d'oxygne, mais elles ne supportent pas une
tension en oxygne quivalente celle de l'air et elles ne peuvent se multiplier qu'en
prsence d'une faible tension d'oxygne.
La mise en vidence du type respiratoire est schmatise dans la figure 5.
La culture des bactries arobies ou aro-anarobies ou anarobies-arotolrantes ne
prsente pas de difficults particulires car l'incubation peut tre ralise dans
l'atmosphre ambiante. En revanche la culture des bactries anarobies et micro-
arophiles ncessitent une incubation dans une atmosphre dpourvue d'oxygne
(bactries anarobies) ou appauvrie en oxygne (bactries micro-arophiles).
L'utilisation de chambres anarobies est rserve des laboratoires spcialiss. Un
laboratoire de diagnostic non spcialis, fera gnralement appel l'utilisation de jarres
anarobies qui sont des rcipients en polycarbonate ou en alliage mtallique pouvant
contenir 10 30 botes de Ptri. Selon le type de jarre, deux grandes modalits
d'utilisation sont possibles.
La premire, appele la technique d'vacuation-remplacement, consiste faire le vide
dans la jarre puis la remplir avec un mlange gazeux dpourvu d'oxygne et contenant
du dioxyde de carbone souvent ncessaire la croissance des anarobies. Par exemple,
on utilisera un mlange trois gaz : H 2: CO2: N2: = 5:15:80 (ou 5:5:90). L'opration sera
rpte trois fois ce qui permet d'obtenir rapidement une anarobiose de bonne qualit.
La deuxime modalit, de mise en uvre plus facile, consiste utiliser des systmes
gnrateurs de gaz commercialiss. On place dans une jarre les botes de Ptri, un
catalyseur ainsi qu'un sachet contenant un mlange de bicarbonate de sodium, d'acide
tartrique et d'hydrure de carbone. Au moment de l'emploi le sachet est ouvert et
additionn d'eau et la jarre est ferme le plus rapidement possible. Il se produit un
dgagement de CO2 et d'H2 qui limine l'oxygne en prsence d'un catalyseur.
L'inconvnient du systme tient au temps ncessaire l'obtention de l'anarobiose et
une concentration en oxygne infrieure 0,2 p. cent n'est obtenu que 210 minutes
aprs la fermeture de la jarre.
Les milieux utiliss pour la culture des bactries anarobies sont soit des milieux pr-
rduits soit des milieux frachement prpars (ou dsars par bullition 100 C durant
20 minutes) et contenant un agent rducteur tel que du thioglycolate de sodium, du
glutathion, du chlorure de palladium, etc.
Des systmes comparables sont utiliss pour raliser une atmosphre micro-arophile.
Dans la technique d'vacuation-remplacement on utilise le plus souvent un mlange de
quatre gaz CO2: N2: O2: H2 = 5:88:5:2. On peut galement utiliser des jarres avec des
systmes gnrateurs de gaz condition d'enlever le catalyseur.

Milieux de culture

De trs nombreux milieux de culture sont utiliss en bactriologie et ils peuvent tre
classs selon de nombreux critres, mais toutes les classifications se recoupent. Seules
les classifications bases sur la consistance, sur la composition et sur l'utilisation seront
brivement envisages ci-dessous.

Classification selon la consistance

D'aprs leur consistance on distingue les milieux liquides ou bouillons et les milieux
solides.
Les milieux solides ont permis un progrs dcisif en bactriologie car ils permettent la
croissance des bactries en colonies isoles et donc leur sparation et leur purification.
En 1881 Koch utilisa la glatine pour solidifier les milieux. La glatine prsentait
cependant deux inconvnients : elle fond aux alentours de 25 C et elle est liqufie par
de nombreuses bactries. Ultrieurement Hesse proposa de remplacer la glatine par la
glose ou agar-agar. La glose, extraite d'algues, est un polyoside qui possde la
proprit de fixer une grande quantit d'eau (jusqu' 500 fois son poids). Elle est soluble
dans l'eau 100 C et elle reste en surfusion jusqu' 40 C, temprature laquelle elle se
glifie. Une fois glifie, il faudra la chauffer nouveau 100 C pour obtenir sa
liqufaction. Cela signifie qu'au cours d'une incubation, gnralement effectue des
tempratures variant de 20 45 C pour les bactries d'intrt vtrinaires, la glose
restera solide. Lorsque la glose est en surfusion, par exemple aux alentours de 45 C, on
peut lui ajouter des produits biologiques comme du sang, du srum ou du lait, sans que
ces produits biologiques soient altrs par la chaleur. Enfin la glose prsente deux
autres avantages : elle n'est que rarement attaque par les bactries d'intrt vtrinaire
et elle est transparente ce qui permet une observation aise des colonies.

Classification selon la composition

Les milieux de culture doivent contenir quantitativement et qualitativement les


nutriments exigs pour la croissance et l'entretien des bactries. Leur pH est
gnralement compris entre 7 et 7,6, leur isotonie correspond gnralement une
solution de NaCl 9 p. 1000 et leur taux d'humidit doit tre suffisant pour permettre la
croissance de la grande majorit des bactries.
Les milieux naturels ou empiriques, trs utiliss, sont prpars partir de constituants
d'origine animale (macrations ou dcoctions de tissus, peptones, uf, glatine, lait, ...)
ou d'origine vgtale (pomme de terre, levure, soja, ...). Leur composition n'est pas
parfaitement dfinie et, pour un mme milieu, elle peut varier d'un lot un autre.
. Les macrations et les dcoctions sont obtenues en laissant sjourner dans l'eau des
tissus tels que du muscle, du foie ou de la cervelle. Au bout de quelques heures on
rcupre une solution riche en sels minraux, en vitamines hydrosolubles, en protines
peu dgrades et en glucides. L'extraction aqueuse peut s'effectuer froid et on parle de
macration ou s'effectuer chaud (100 C) et on parle de dcoction. Ces macrations et
dcoctions sont commercialises sous le nom d'extraits de viande.
. Les peptones occupent une place trs importante dans la prparation des milieux de
culture. Ce sont des mlanges de composs solubles dans l'eau et rsultant de l'action
d'enzymes protolytiques sur diverses protines. Leur classification repose sur la nature
de l'enzyme protolytique (peptones pepsiques, pancratiques, trypsiques, papaniques,
etc.) et sur l'origine des protines (peptones de viande, de casine, de glatine, de soja,
etc.). Pour dsigner une peptone il faut donc indiquer le nom de l'enzyme et celui de la
protine. Par exemple, on parlera de peptone pancratique de viande, de peptone
trypsique de cur, etc. La composition des peptones est trs variable. Ainsi, les peptones
pepsiques contiennent des polypeptides complexes dpourvus d'acides amins libres et
ce sont donc des produits trs peu dgrads. Inversement les peptones pancratiques
renferment des polypeptides simples avec une forte proportion d'acides amins libres.
Deux exemples de milieux naturels sont donns ci-dessous.
. Glose nutritive : macration de viande (1 litre), peptone trypsique (15 g), NaCl (5 g),
agar-agar (15 20 g).
. Glose trypticase-soja : peptone trypsique de casine (15 g/L), peptone papanique de
soja (5 g/L), NaCl (5 g/L), glose (15 g/L).
Les milieux synthtiques ont une composition parfaitement dfinie. Ils sont constitus de
corps purs chimiquement dfinis et dissous dans de l'eau distille en proportions
dtermines. C'est le cas par exemple du milieu ure-indole dont la composition est la
suivante : L-tryptophane (0,3 g), KH2PO4 (0,1 g), K2HPO4 (0,1 g), NaCl (0,5 g), ure (2 g),
alcool 95 (1 mL), rouge de phnol 1 p. cent (0,25 mL), eau distille (100 mL).
Les milieux semi-synthtiques contiennent des substances chimiques pures en
proportions dtermines et des produits d'origine naturelle. La plupart des milieux
actuellement commercialiss sont des milieux semi-synthtiques. Par exemple, la glose
lactose au bromocrsol pourpre (BCP) contient (en grammes par litre d'eau distille) 5 g
de peptone, 3 g d'extraits de viande, 10 g de lactose, 15 g d'agar-agar et 0,025 g de
pourpre de bromocrsol.

Classification selon l'utilisation

La classification d'aprs l'utilisation permet de distinguer quatre grands types de milieux.


Les milieux usuels ou de base d'un emploi aussi gnral que possible. Il convient
cependant de remarquer qu'aucun milieu n'est apte assurer la croissance de toutes les
bactries.
Les milieux d'isolement qui peuvent tre des milieux usuels, des milieux enrichis (avec du
sang, du srum, ...), des milieux lectifs ou d'enrichissement permettant la culture
abondante et rapide de certaines bactries alors que la majorit des espces s'y
dveloppent lentement et des milieux slectifs permettant la croissance d'une ou de
quelques espces alors que la multiplication de la majorit des autres espces est
entrave. Un effet slectif est obtenu en jouant sur les facteurs physico-chimiques (pH,
pression osmotique) ou par l'utilisation d'agents bactriostatiques ou bactricides
(colorants, antibiotiques).
Les milieux d'enrichissement et les milieux slectifs sont actuellement trs nombreux et
ils permettent d'isoler une ou quelques espces bactriennes mme au sein d'une flore
complexe.
Les milieux d'identification qui permettent la mise en vidence des caractres
biochimiques des bactries et de rsoudre les problmes d'identification diffrentielle.
Les milieux de conservation qui sont des milieux pauvres au sein desquels les bactries
survivent dans un tat de vie ralentie.

Conclusion

L'tude de la nutrition et de la croissance bactrienne est riche d'applications :


Elle permet de dfinir les paramtres assurant une culture optimale des bactries
(atmosphre gazeuse, temprature, pression, etc.).
Elle permet la confection de milieux servant cultiver, isoler et identifier les bactries
ainsi qu' tudier leur sensibilit aux antibiotiques.
Dans l'industrie, elle permet de fabriquer des denres alimentaires (vinaigres, yaourts,
laits ferments, choucroutes, ...), d'obtenir des substances d'origine bactrienne (toxines,
certains antibiotiques, certains insecticides, protines recombinantes) et d'obtenir des
cellules bactriennes en grand nombre en vue de la prparation de vaccins ou de ractifs
(antignes utilisables dans le diagnostic).
Elle permet de raliser des contrles de strilit (mesure de l'inactivation des bactries
aprs strilisation) ou de densit bactrienne (contrles de la qualit de l'air, contrles
des surfaces) ou le contrle des denres alimentaires et de eaux de boisson (recherche
de bactries responsables de toxi-infections alimentaires, recherche de bactries
responsables d'altrations, recherche de bactries signant une contamination fcale).
Elle permet la mise au point de mthodes permettant de limiter la croissance bactrienne
dans les aliments ou diverses substances biologiques (action du froid, de la chaleur, de
l'acidit, de la salinit, de l'atmosphre gazeuse, etc.).