Recommandations aux étudiants

1. L'absence non justifiée à un tiers des travaux pratiques entraîne l'exclusion du module.
2. La justification de l'absence doit être visée dans les 72 heures au département de
pharmacie et déposée au laboratoire de Toxicologie.
3. En cas d'absence justifiée, l'étudiant doit rattraper au sein d'un autre groupe du même
type de TP.
4. Aucun TP de rattrapage ne peut être organisé en dehors des travaux pratiques prévus
dans le programme affiché.
5. Les étudiants doivent se présenter 10 minutes avant l'horaire prévu des travaux
pratiques (Laboratoire N°08 deuxième étage).
6. Les TP débutent à 13 heures. Tout étudiant dépassant les 10 minutes de retard sera
exclu de la séance.
7. Les TP doivent être individuellement préparés sous la forme d'une fiche technique
concise, incluant le principe et le mode opératoire. L'utilisation du manuel n'est pas
permise pendant les séances de TP.
8. Chaque étudiant doit porter une blouse blanche bien fermée.
9. Les étudiants doivent nettoyer leurs postes de travail ainsi que la verrerie utilisée avant
de quitter la salle.
10. Les téléphones mobiles doivent être rangés et maintenus en position éteinte pendant
les travaux pratiques.
11. Les comptes rendus doivent être rédigés par binôme (trinome), la mention du numéro

d’échantillon est obligatoire.

12. Toute mauvaise manipulation de l'échantillon ou la perte de celui-ci ne justifie pas la

demande d'un deuxième échantillon par l'étudiant.

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 Préambule

La toxicologie analytique constitue le champ scientifique dédié à la détection, à l'identification

et à la quantification des divers agents toxiques présents dans les milieux biologiques,
environnementaux et alimentaires. Les laboratoires de toxicologie collaborent étroitement
avec diverses branches médicales et entités telles que les services d'urgence, la médecine
légale, la médecine du travail et les laboratoires de contrôle commercial. Cette collaboration
vise à fournir une expertise toxicologique permettant de poser un diagnostic, d'évaluer le
pronostic ou de déployer des traitements adaptés.

Ce recueil présente des techniques analytiques simples, offrant aux étudiants la possibilité
d'une application pratique dans les divers domaines de la toxicologie.

POSTE N° I : TOXICOLOGIE MEDICAMENTEUSE

1. Dosage des imipramines

2. Dosage du Paracétamol
POSTE N° II : TOXICOLOGIE MEDICOLEGALE

1. Dosage de l’alcoolémie
2. Dosage de Benzodiazépines (TRANXENE®)
POSTE N° III : TOXICOLOGIE ENVIRONNEMENTALE

1. Dosage des nitrites dans l’eau

2. Dosage du fluor

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 DOSAGE DES IMIPRAMINES
I. PRINCIPE

Il s’agit d’une méthode de dosage utilisant la coloration bleue développée par l’imipramine en
présence d’acide perchlorique et de nitrite de sodium.
Dans les liquides biologiques, la coloration mesurée est due aux composés imipraminiques
non métabolisés et aux métabolites déméthylés de la chaine latérale. Les métabolites
hydroxylés sur le noyau, cliniquement peu actifs ne donnent que peu ou pas cette coloration.

II. MODE OPERATOIRE

Dans une série de tubes à essai, mesurer comme mentionner dans le tableau :

Blanc 2 µg/ml 5 µg/ml 10 µg/ml 20 µg/ml X

Solution mère 0 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Imipramine 20 µg/ml
Acide perchlorique 60% Q.S.P 2,5 ml
Solution de nitrite de Na 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml

1. Agiter au vortex
2. Attendre 2 à 3 min
3. Lire les absorbances (A) au spectrophotomètre à 620 nm ;
4. Tracer la courbe d’étalonnage, densité optique en fonction de la concentration (Y=F(x))
5. Extrapoler la valeur de l’absorbance pour avoir la concentration de votre échantillon

III. RESULTATS
Les résultats sont exprimés en concentration en µg/mL des imipramines, suite à extrapolation
sur la courbe d’étalonnage.

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 DOSAGE DU PARACÉTAMOL DANS LE SANG
METHODE DE CLYNN ET KENDAL
I. PRINCIPE
C’est une méthode basée sur la formation en milieu alcalin d’un dérivé nitreux, 3-nitro4-
hydroxyacétanilide, de couleur jaune orangé, par action de l’acide nitreux (HNO2) sur le
paracétamol. La concentration du dérivé nitreux est déterminée par spectrophotométrie à
450 nm.

II. MODE OPERATOIRE

Tube 1 blanc Tube 2 Échantillon

Blanc Réactif 2 ml
Échantillon X / 2ml
HCl (6 N) 0,5 ml 0,5 ml
Nitrite de Na (6 N) 1 ml 1 ml
Mélanger doucement et laisser reposer pendant 2-3 minutes (faire attention au dégagement
de vapeurs rousses de dioxyde d’azote)
Sulfamate d’ammonium 1 ml goutte à goutte
Ajouter sulfamate goutte à goutte pour éliminer l’excès de l’acide nitreux
(Attention aux mousses abondantes)
Na OH (6 N) 2 ml 2 ml 2 ml

Ø Agiter rapidement pour éliminer les bulles de gaz ;

Ø Mesurer la DO à 450 nm au spectrophotomètre.

III. RESULTATS
Extrapolation à partir de la courbe d’étalonnage préétablie.
Risque toxique [mg/L] 4ème heure [mg/L] 15ème heure
Hepatite mortelle ≥ 300 ≥ 45

Hepatite grave ≥ 200 ≥ 30

Pas de risque ≤ 150 ≤ 25

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 DOSAGE DE L’ALCOOL ETHYLIQUE DANS LE SANG
Méthode de CORDEBARD-technique modifiée par TRUHAUT
I. PRINCIPE
Le dosage de l’alcool éthylique dans le sang repose sur deux propriétés fondamentales :
Ø L’une physique : sa volatilité.
Ø L’autre chimique : sa propriété réductrice.
Le sang débarrassé des matrices albuminoïdes (défécation à l’acide picrique) est soumis à une
distillation. L’alcool, éventuellement présent dans le distillat, est oxydé en acide acétique à
froid au moyen d’une liqueur nitrochromique titrée, utilisée en quantité exactement mesurée.
L’excès de liqueur nitrochromique est déterminé par iodometrie :

-2 +
2Cr2 O7 + 3CH 3CH 2OH + 16 H 4Cr +3 + 3CH 3 COOH + 11H 2 O

Addition d’iodure de potassium (KI):

Cr2 O7-2 + 6 I - + 14 H + 2Cr +3 + 3I 2 + 7 H 2O
Dosage de l’iode libéré par une solution titrée de thiosulfate de sodium :
2 S 2 O3-2 + I 2 -2 -
S 4 O6 + 2I
II. MODE OPERATOIRE
ETAPE 1 : DISTILLATION
1. Introduire dans le ballon de l'appareil 60 ml d'acide picrique saturé.
2. Ajouter 5 ml de sang.
3. Trois fragments de pierre ponce pour régulariser l'ébullition.
4. Disposer à l'extrémité du réfrigérateur, un Becher dans lequel on aura préalablement
introduit 2 ml d'eau distillée.
5. Adapter le raccord de verre.
6. Chauffer et maintenir une ébullition douce (afin d’éviter toute entraînement d’acide
picrique) jusqu’ à obtention de 40 ml environ du distillat.
ETAPE 2 : DOSAGE
1. Dans la fiole du dosage, mettre 5 ml de distillat ;
2. Ajouter 10 ml de la solution Nitro-chromique (N/20).
3. Agiter et laisser à l’obscurité pendant 10 mn ; puis ajouter 100 ml d’eau distillée et 10
ml d’iodure de potassium KI (N/20).
4. Titrer avec le thiosulfate de Na (N/20). La coloration initialement brune, passe au jaune
puis au vert pale.
5. Le point équivalent est atteint lors du virage de la coloration du brun à l’incolore.
6. Dans la fiole témoin, mettre 5 ml d’eau distillée au lieu de 5 ml du distillat, ensuite
procéder de la même façon que pour la fiole du dosage.
III. RESULTATS
A (g/l)= (V1-V2)X 0,575 X 8
Prise d’essais (5ml)
- A : taux d’alcool en g/l ;
- V1 : Volume de chute de burette de thiosulfate de Na du témoin (ml) ;
- V2 : Volume de chute de burette de thiosulfate de Na de l’échantillon (ml).
Ø Normes législatives en Algérie :< 0,2 g/l

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 DOSAGE DES BENZODIAZEPINES (TRANXENE®)
I. PRINCIPE
L'hydrolyse acide à chaud des dérivés de la benzodiazépine, conduit à l'obtention d'une amine
aromatique primaire qu'il est possible de caractériser et de doser par spectrophotométrie
après diazocopulation avec le chlorhydrate de naphtyle éthylène diamine.

II. MODE OPERATOIRE

Étape 1 : REACTION D'HYDROLYSE : Dans deux tubes, Mettre :
DOSAGE ETALON
ECHANTILLON 5 mL /
SOLUTION ETALON à 100 mg/l / 5 ml
HCl Concentré 1 ml 1 ml

Ø Placer les tubes dans le bain-marie à 100 °C pendant 30 minutes.

Ø Après refroidissement, effectuer une extraction liquide-liquide dans une ampoule à
décanter en utilisant 10 ml d'éther diéthylique après alcalinisation (à pH=10) de
l’échantillon avec de la soude.
Ø Transférer la phase organique (partie supérieure) dans une capsule en porcelaine.
Ø Évaporer complètement l'éther.
Ø Reprendre le résidu sec avec 5 ml de HCl 6N.

Étape 2 : REACTION DE COLORATION :

BLANC ECHANTILLON
Extrait d'échantillon - 1.5ml
HCl (6N) 1,5ml -

H2O Distillée 0,5ml 0.5ml

SoL de NaNO2 0,5ml 0,5
Agiter et attendre 3mn
Sol. de sulfamate d'NH4 0,5ml 0,5ml

Agiter et attendre 10 ml
Naphlyl-Ethyl Diamine (NED) 1ml 1ml
Agiter, mettre pendant 5 mn au bain marie 60°C, lire à 550 nm.
III. RESULTATS
Les résultats sont exprimés en concentration en mg/L, suite à extrapolation sur la courbe
d’étalonnage préétablie.

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 `DOSAGE DES NITRITES DANS L’EAU
I. PRINCIPE
En milieu acide, l’acide nitreux se combine avec la sulfanilamide pour former un sel de
diazonium qui réagit quantitativement avec le N-(I-naphtyl) Ethylène Diamine dihydrochloride
et forme un complexe coloré en rose évalué à 520nm dont l’intensité est proportionnelle à la
concentration (même principe de diazocopulation).

II. MODE OPERATOIRE

A partir d’une solution étalon à la concentration de 1 mg/L en ion nitrite (NO2-), préparer une
gamme étalon

Concentrations Blanc 0,2 mg/L 0,4 mg/L 0,6 mg/L 0,8 mg/L X
Étalon 2 mg/L - 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml

Eau distillée 2 ml / / / / /
Réactif de 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml
GRIESS

Ø Homogénéiser et attendre 10min (complexe coloré rose stable) ;

Ø Lire Les absorbances à 520 nm ;
Ø Tracer la courbe d’étalonnage.
III. RESULTATS
La concentration est déterminée par extrapolation sur la courbe d’étalonnage.
Normes de l’eau potable (OMS) : 0,2 mg/L

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 DOSAGE DU FLUOR
Méthode de BELCHER WEST
I. PRINCIPE
En présence d’Alizarine complexone, le nitrate de lanthane donne une coloration rouge en
milieu aqueux, en présence des anions F-, il se forme un complexe de coloration bleue plus
stable que le chélate organométallique (décoloration). Le nouveau complexe ainsi formé est
soluble dans l’acétone, et pourra être directement dosé par spectrophotométrie à 618 nm, la
concentration pouvant être alors calculée par analyse par rapport à la courbe d’étalonnage

II. MODE OPERATOIRE

Dans des tubes mettre successivement :

Ø Laisser reposer 10 mn,

Ø Lire au spectrophotomètre à 618 nm contre le blanc.
II. RESULTATS
La concentration est déterminée par extrapolation sur une courbe d’étalonnage.
Normes de l’eau potable (OMS) : 1,5 mg/L

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 ANNEXE
RISQUES CHIMIQUES ET SECURITÉ AU LABORATOIRE

Les travaux pratiques de toxicologie impliquent l’utilisation des produits chimiques qui
certainement ne sont pas démunis de toute toxicité. Une fausse manipulation peut être à
l’origine de dommages physiques et/ou organiques, immédiats ou retardés. De ce fait, il faut
faire preuve de prudence et de bon jugement.

Règles de sécurité :
• Suivez toutes les instructions données par l'enseignant
• Dis à ton professeur de problèmes de santé et des allergies
• Pas de nourriture ou de boissons au poste de travail
• Attachez les cheveux longs
• Ne pas porter de lentilles de contact
• Rester à votre poste de travail
• Toujours suivre les procédures décrites exactement
• Ne jamais faire une expérience non autorisée
• Ne laissez pas les expériences sans surveillance
• Travailler tranquillement et soigneusement
• Ne jamais aspirer les produits !
• Verser les produits chimiques correctement et en toute sécurité
•Ne jamais verser de l’eau ou une solution aqueuse dans l’acide sulfurique concentré
(réaction exothermique violente et projections).
•Procédez inversement pour éviter les projections d’acide sulfurique.

• Toujours garder l'extrémité ouverte des récipients des réactifs loin des visages
• Ne laissez jamais un récipient bouillir à sec
• Ne regardez jamais dans un récipient que vous chauffer
• Laissez-les brûleurs et les plaques chauffantes refroidir avant de les toucher
• Ne jamais laisser sans surveillance une source de chaleur
• Utilisez les bons produits chimiques et en bonne quantité
• Ne jamais mélanger des produits chimiques hors indication des modes opératoires
• Gardez les couvercles sur les contenants de produits chimiques lorsqu'ils ne sont pas
utilisés
• Considérez tous les produits chimiques come dangereux
• Signaler tout déversement de produits ou cassures de verrerie à l'enseignant
immédiatement

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• Ne jamais toucher tout équipement, produits chimiques ou d'autres matériaux avant d'y
avoir permission
• Nettoyer la zone de travail complètement quand vous avez fini et ranger tous le matériel
tel que trouvés au début de la séance de TP
• Éliminer les déchets conformément aux instructions.
En cas d’accident :
• Prévenez immédiatement l'enseignant au sujet de tout accident (peu importe la gravité)
ou des zones dangereuses
• Rincez immédiatement les substances entrant en contact avec la peau ou les vêtements
• Se laver les mains avant de quitter le laboratoire
• Traiter les brûlures avec de l'eau froide ou de glace
• Si des produits chimiques entrent en contact avec les yeux, rincer les yeux immédiatement
et abondamment avec de l'eau pendant plusieurs minutes.

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LES PICTOGRAMMES DE DANGER

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12
13