TRAVAUX PRATIQUES-ENZYMOLOGIE ET METABOLISME

UE BCH 3045
Corrigé Compte Rendu TP N°4

1- Titre (0,5 pt)

2- But: Doser l’urée pour explorer le métabolisme protéique (0,5 pt)
3- Objectifs (1 pt):
- Doser l’urée dans urinaire par la méthode de Berthelot,
- Corréler aux troubles du métabolisme protéique.
4- Principe (3 pts)
En milieu alcalin, les ions ammonium produits par l'action de l'uréase, réagissent avec
l'hypochlorite de Na, en présence de nitroprussiate de Na, pour former une monochloramine qui
dans un 2ème temps réagit avec deux phénols pour former un indophénol responsable du
développement de la coloration verte mesurée à 580nm.

Uréase
Urée + 2H2O 2NH4+ +CO32-

5- Matériel et réactifs (2 pts)

 Matériel: Spectrophotomètre, tubes à essai, pipettes, béchers
 Réactifs: Eau distillée, solution étalon d’urée à X g/L, étalon contrôle d’urée à Y mmol/L,
échantillon d’urine à doser
 Réactif 1: Nitroprussiate de sodium 32mmol/l, uréase 30000 U/l
 Réactif 2: Hypochlorite de Na : 40mmol/l, NaOH 40mmol/l

6- Mode opératoire (2 pts)

1
 BLANC ETALON CONTROLES ESSAIS
N° de tube 0 1 2 2’ 3 3’
Eau distillée (mL) 0,1
Solution étalon d’urée à X g/L (mL) 0,1
Etalon à Y mmol/L (mL) 0,1 0,1
Echantillon d’urine diluée à doser (mL) 0,1 0,1
Réactif 1 (mL)
Mélanger et incuber 5 minutes à température ambiante
Réactif 2 (mL) 1 1 1 1 1 1
Mélanger et incuber 20 minutes à température ambiante puis lire la DO à λ=580 nm
Absorbances à 580 nm 1 1 1 1 1 1
Avec X= 0,75g/L et Y= 0,5g/L
7- Résultats (7 pts)
N° de tube 0 1 2 2’ 3 3’
DO 0,069 0,072 0,071 0,070 0,070 0,070
DO réelles 0,000 0,003 0,002 0,001 0,001 0,001

a- Donner la formule littérale pour déterminer la concentration de l’urée dans

l’échantillon à doser en mg/L. [Essai]= (DOEssai/DOétalon) × [Etalon] (0,5 pt)

b- Déterminer la concentration de l’urée dans cet échantillon (en g/L) et convertir la valeur
obtenue en concentration d'azote uréique exprimée en g/L/24h.
[Essai]= (0,001/0,003) × [0,75]= 0,25g/L or l’échantillon a été dilué 3 fois donc [Essai]=
0,25g/L×3= 0,75g/L (1 pt)
Dans l’urée, il y a 2 moles d’azote donc pourcentage d’azote= 28/60×100=46,6%
Donc concentration azote uréique=46,6%×0,75g/L=0,35g/L (1 pt)

c- Calculer la concentration en quantité d’urée dans l’étalon de contrôle C, en mol/L ;

MMUrée= 60g/L doù Cm= Cp/MM N : Cm= 0,75g/L/60= 12,5.10-3 M (1 pt)

d- Vérifier l’exactitude de la concentration molaire en urée de la solution contrôle en

calculant le coefficient de variation tout en le comparant avec les données.
[Contrôle 1]= (0,001/0,003) × [0,75]= 0,25g/L
[Contrôle 2]= (0,002/0,003) × [0,75]= 0,50g/L
Moyenne= (0,25+0,50)/2= 0,38 g/L (0,5 pt)
Écart-type= 0,177

2
CV= (Écart-type/moyenne) ×100=46,6% >2% trop élevé donc pas bon résultats. (0,5 pt)
e- Vérifier l’acceptabilité de mesure à l’aide de l’étalon de contrôle selon l’intervalle

d’acceptabilité des mesures du contrôle: [3,8⋅10 -3mol.L-1 ; 5,0⋅10-3 mol.L-1]

Moyenne= (0,25+0,50)/2= 0,38 g/L/60= 6,3.10-3 M (0,5 pt) cette valeur est supérieure à la limite
supérieure de l’intervalle d’acceptabilité donc résultats pas acceptés.

f- Valider ou non l’exécution de la procédure dans les conditions opératoires du jour: la

méthode est validée par un résultat compris entre la valeur cible moins 2 sr et la valeur
cible plus 2 sr.
Sr= (CV× valeur cible contrôle)/100 AN : Sr=(2 %×0,5)/100=0,0001 (0,5 pt)
Intervalle de validation= [0,5-00,01 ; 0,5+0,0001]= [499.10-3 M ; 500.10-3 M] (0,5 pt)
La procédure est validée car les résultats correspondent à l’intervalle de validation.

g- Comparer les résultats obtenus aux valeurs normales d’urée urinaire (les valeurs
normales comprises entre 300 et 500 mmol/24 h (soit 18 à 30 g/24 h).
[Essai]= 0,75g/L, les valeurs obtenues sont très inférieures aux valeurs normales. (1 pt)
Données: le coefficient de variation (C.V.) de la méthode est de 2 % ; C.V. = sr x 100 /
valeur cible du contrôle ; (sr = écart type de reproductibilité) ;

8- Interprétation et discussion (3 pts)

9- Conclusion (1 pt)