Nicolas Abou Jamra Nutrition

Rebecca Lahoud

TP Biochimie Structurale (5)
Dosages colorimétriques des lipides

Objectif : Préparer deux échantillons mères de H2SO4 avec un étalon de cholestérol

(concentration connue) et H2SO4 avec un échantillon de cholestérol (concentration
inconnue) afin d’établir une courbe d’étalonnage et déduire la concentration en cholestérol
de l’échantillon.

Matériels utilisés :
 Becher
 Support
 Pipette jaugée
 Récipient (Bain-Marie)
 Spectrophotomètre

Mode opératoire :

 Mettre dans 2 tubes a essaies :

1. Tube 1  : étalon (0,2 ml)  ; H2SO4 (6 ml)
2. Tube 2  : échantillon (0,1 ml)  ; H2SO4 (3ml)
 Agiter et laisser 10 minutes au bain marie bouillant.
 Refroidir les tubes et préparer 7 autres tubes à partir de ces 2 déjà préparés suivant
le tableau ci-dessous.
 Agiter les tubes et laisser reposer 30 minutes à l’obscurité.
La couleur varie du plus claire au plus foncé. Le plus concentré est le plus foncé.
De plus, plus il est concentré, plus il absorbe, plus la valeur de A est élevée.
 Lire l’absorbance à l’aide d’un spectrophotomètre réglé à 530 nm.
 Régler au 0 avec le blanc, puis mettre chaque solution et lire son absorbance.

Blanc Etalon 1 Etalon 2 Etalon 3 Etalon 4 Etalon 5 Echantillon

Etalon H2SO4 - 0.1 ml 0.3 ml 0.5 ml 0.8 ml 1 ml -
Echantillon
---- --- --- --- --- --- 0.5 ml
H2SO4
H2SO4 0.1 ml --- --- --- --- --- ---
Réactifs
3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3ml
(Vanilline)
D.O à 530 nm 0 0.215 0.633 1.032 1.620 1.854 1.268

 Calcul de la concentration des lipides dans l’échantillon :

C = A échantillon / A étalon 3 × 8
C= 1,268 / 1,032 × 8 = 9,83 g/ L
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Courbe d’étalonnage :

 Trouver premièrement les concentrations de chaque solution étalon :

Dans la solution étalon mère :
On a 0.2 ml d’étalon : 8 g  1 L
X  0.2 ml
X = m lipide = 0,2 x 10-3 x 8 = 1,6.10-3 g de lipides dans la solution
mère
Cm = m/V = 1,6.10-3 / 6,2.10-3 = 0,258 g/L

1. Dans la solution étalon 1 :

On a: 0,258 g  1 L
X1  0,1 ml
X1 = 0,1 x 10-3 x 0,258 = 2,58.10-5 g
Cm1 = m/V = 2,58.10-5 / 3,1.10-3 = 8,32.10-3 g/L

2. Dans la solution étalon 2 :

On a: 0,258 g  1 L
X2  0,3 ml
X2 = 0,3 x 10-3 x 0,258 = 7,74.10-5 g
Cm2 = m/V = 7,74.10-5 / 3,3.10-3 = 0,023 g/L

3. Dans la solution étalon 3 :

On a: 0,258 g  1 L
X3  0,5 ml
X3 = 0,5 x 10-3 x 0,258 = 1,29.10-4 g
Cm3 = m/V = 1,29.10-4 / 3,5.10-3 = 0,036 g/L

4. Dans la solution étalon 4 :

On a : 0,258 g  1 L
X4  0,8 ml
X4 = 0,8 x 10-3 x 0,258 = 2,064.10-4 g
Cm4 = m/V = 2,064.10-4 / 3,8.10-3 = 0,054 g/L

5. Dans la solution étalon 5 :

On a : 0,258 g  1 L
X5  1 ml
X5 = 1 x 10-3 x 0,258 = 2,58.10-4 g
Cm5 = m / V = 2,58.10-4 / 4.10-3 = 0,064 g/L
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1.8 f(x) = 29.62 x − 0.02

R² = 1
1.6

1.4

1.2
Densité optique

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07
Concentration

Graphe montrant la variation de D.O en fonction de la concentration dans les 5 tubes

On remarque que : Y= 29.619 x – 0.0224 est l’équation de la droite

Or pour A= 1,268  C = 0,043 g/L
Donc Cm= 0,043 = m / V
m = 0.043 x 3.5.10-3 = 1,505.10-4 g dans l’échantillon dilué
Or m  0.5 ml d’échantillon dilué
X  0.1 ml dans l’échantillon initial

Alors X = 0,1 x 1,505.10-4 / 0,5 = 3,01.10-5 g

C = m / V = 3,01.10-5 / 3,1.10-3 = 9,7.10-3 g/L dans l’échantillon initial