Compte rendu TP Biochimie

I Dosage Acide-base

1 Objectif :
Nous allons déterminer la quantité d’acide Dornic dans du lait par dosage volumétrique.

2 Contexte :
Il n’y a pas d’acide lactique dans du lait frais. Les bactéries lactiques dégradent le lactose du
lait au fur et à mesure.

Ainsi, plus le lait est vieux, plus il contient d’acide lactique. La détermination de la quantité
d’acide lactique permet d’évaluer la fraicheur du lait. Si trop d’acide est présent, les protéines du lait
précipitent : le lait « caille ».

Le niveau d’acidité du lait est caractérisé par les degrés Dornic (°D). Un degré dornic est égal à
0,1g d’acide lactique par litre de lait (même si l’acide lactique n’est pas le seul acide présent).

Valeurs de référence pour l’acidité dans le lait :

Acidité Dornique (D) Fraîcheur du lait

D < 18 Lait frais

D > 18 Lait caillé

On va réaliser un dosage acide-base. On a un acide faible (l’acide lactique) par une base forte
(soude). A l’équivalence, le volume de soude nécessaire provoque le virage de l’indicateur coloré.

3 L’échantillon :
Une brique de lait est analysée, on cherche l’acide lactique.

4 Le mode opératoire :
Je réalise un témoin négatif en remplaçant le volume de lait par de l’eau distillée.
Dans un erlenmeyer, introduire :
- 10 ml de lait à l’aide d’une pipette jaugée (ou d’eau distillée pour le témoin).
- 3 gouttes d’indicateur coloré TA.

De la soude est mise dans une burette (NaOH = 0,111 mol/L) et versée dans lait jusqu’à atteindre le
virage de couleur de l’indicateur coloré.
5 Expression des résultats :

Témoin négatif : 0,01mL de soude avant virage de coloration.

Essai 1 : 2,5mL de soude avant virage de coloration, c’est le volume équivalent.

Dans 2,5mL de soude, il y a 2,775.10−4Moles de NaOH.

On sait que par équivalence, n NaOH = n Acide lactique. On a donc 2,775.10−4 Moles d’acide lactique
dans 10mL de lait.

La concentration molaire en acide lactique dans le lait est de Cmol = 2,775.10−2/L

On cherche maintenant la concentration massique pour la comparer au degré d’acidité dornic.

m=Mxn ϕ=mxV

m = 90 x 2,775.10-4 ϕ = 0,025 / 0,010

m = 0,025g ϕ = 2,5g/L

Un degré dornic équivaut à 0,1g/L d’acide. On à 2,5g/L dans le lait.

1x2,5/0,1 = 25

Il y a 25 degrés dornic dans le lait.

6 Conclusion :
Selon le tableau décrit plus haut, D > 18 = Lait caillé. Or, 25 > 18, j’en conclue donc que le lait est
caillé.
II Préparation solution de glucose
(Pour dosage colorimétrique par spectrométrie)

Objectif :
On cherche à obtenir une solution liquide contenant une quantité précise de glucose. On va donc
réaliser une pesée et une dissolution de glucose en poudre dans de l’eau distillée.

Mode opératoire :

À partir de glucose en poudre, préparer une solution de concentration massique (Cmas) 5g/L et de
volume (V) 50 ml

- Calculer la masse (m en g) de glucose à peser pour préparer 50 ml de glucose à 5 g/L.

Cmas = m (en g) / V (en L)

m = Cmas x V

m = 5 x 0,050 = 0,25g

- Réaliser la pesée de la masse précise de glucose en suivant le protocole et les mesures

préconisées.

0,2530g

Après avoir dissous le glucose dans 50mL d’eau distillée, on obtient une solution à 0,506% de glucose.

0,2530g x 100 / 50 = 0,506

Nous allons maintenant réaliser un dosage colorimétrique par spectrographie pour créer notre
gamme étalon.
III Dosage colorimétrique par spectrographie

Gamme étalon Echantillon

Tube à essai 0 1 2 3 4 5 E1 E2
Concentration 0 1 2 3 4 5 ? ?
finale dans les
tubes (g/L)
Absorbances 0 0,062 0,226 0,266 0,388 0,389 0,297 0,335
mesurées à
540 nm

Droite étalon
Absorbance = f([glucose])
0.45
0.4 f(x) = 0.0874363636363637 x
R² = 0.9834880695121
0.35
Absorbance (540nm)

0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6
Concentration Glucose g/L

Absorbance en fonction de la concentration en glucose

Pour rappel : E1 = 0,297 et E2 = 0,335

Nous avons pour équation de droite : y= 0,0874x.
Y correspond à l’absorbance et X à la concentration en glucose.
On cherche la concentration en glucose d’E1 et E2, donc :
E1 : 0,297=0,0874x = 3,398 arrondi au centième

E2 : 0,335=0,0874x = 3,833 arrondi au centième

En faisant la moyenne des deux essais, nous obtenons une concentration de 3,615g/L de glucose.

Je remarque que les deux essais ont des résultats différents alors qu’ils proviennent de la même
solution mère. Je suppose qu’il s’agit un manque d’homogénéité au moment du prélèvement de la
solution.
IV Questions annexes au TP

1. Virage net avec la même couleur et au même pH que ce soit le TA ou la phénolphtaléine. Le

virage est incolore < 8,2 - 9,8 > rose violet

2. Indicateur TA : Liquide inflammable, provoque irritation oculaire.

Phénolphtaléine : Mutagénicité sur cellules germinales, Cancérogénicité, Toxicité pour la
reproduction.

3.
Les Pictogrammes présentés, les mentions de danger en fonction de l’indicateur coloré :

Indicateur Mentions de Conseils de prudence Pictogrammes

danger
Indicateur TA Tenir à l’écart de la chaleur,
Inflammable dans un endroit frais et
ventilé
Irritations oculaire

Phénolphtaléine Ne pas manipuler avant

Mutagénicité sur d'avoir lu et compris toutes
cellules germinales les précautions de sécurité.
Porter des gants de
Cancérogénicité protection.
EN CAS d'exposition
Toxicité pour la prouvée ou suspectée:
reproduction consulter un médecin.

4.
Le TA et la phénolphtaléine ont les mêmes propriétés en tant qu’indicateur, mais le TA est plus facile à
utiliser car il impose moins de restrictions par rapport à la sécurité. Il menace bien moins la santé des
techniciens.