FACULTE DES SCIENCES

DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE

PARCOURS BIOLOGIE ET PHYSIOLOGIE

ANIMALE

UE BCH 221
AR
TRAVAUX PRATIQUES DE BIOCHIMIE METABOLIQUE

TP N°2

Extraction et dosage du cholestérol

Présenté par :

NOM PRENOMS N° DE CARTE PARCOURS

TOSSIM ESSOSOLAM SOLANGE 505946 BPA

WALLA TCHILALO 508884 BPA

ANNEE ACADEMIQUE 2022-2023

 INTRODUCTION

Le cholestérol est un corps gras retrouvé à peu près partout dans le corps des eucaryotes.IL est
fabriqué en grande quantité par le foie et aussi peut être apporté par l’alimentation, surtout
d’origine animale telle que la viande, les produits laitiers et les œufs. Etant la structure
fondamentale de la membrane des cellules, il est indispensable à la synthèse des hormones
sexuelles et surrénalienne et est aussi indispensable à la formation de la bile qui permet la
digestion des graisses alimentaires. Ainsi l’objet de notre manipulation a été l’extraction et le
dosage du cholestérol du jaune d’œuf par la réaction de LIEBERMAN BURCHARDT qui
constitue une réaction chimique principalement utilisée comme test révélateur du cholestérol.

I. METHODES ET MATERIELS
1. Extraction du cholestérol de jaune d’œuf

Avec 4g de jaune d’œuf, nous avons commencé l’extraction du cholestérol par ajout d’une
quantité suffisante d’acétone pour faire entrainer le cholestérol et laisser insoluble la
lécithine, ensuite on l’a laissé décanter et filtré. On a répété l’extraction(5fois) jusqu’à
décoloration de la lécithine et le filtrat acétonique obtenu est recueilli dans un ballon jaugé
de 100 ml puis complété avec de l’acétone. Des 100 ml de la solution acétonique, on a
prélevé 20 ml qu’on a chauffé pour faire évaporer l’acétone. Ainsi on obtient un liquide
huileux jaune. Sur ce dernier, on a ajouté du chloroforme qui est une condition sinéquanone
pour la réalisation de la réaction de LIEBERMAN BURCHARDT puis versé dans un ballon
jaugé de 50 ml.

2. Dosage du cholestérol par la réaction de LIEBERMAN

BURCHARDT

Nous avons préparé une dilution à partir d’une solution de cholestérol à 100mg% et du
chloroforme, une gamme de solution sur 5ml de solution chloroformique de concentration à
5mg%, 10mg%, 15mg%, 20mg% et à 25mg% dans 5 différents tubes, un témoin ne contenant
pas de cholestérol et les deux échantillons de solutions inconnues X et du Jaune d’œuf(J). Les
proportions (sauf pour les inconnus) de la composition de chaque tube sont consignées dans le
tableau suivant :

Jaune
Tubes Témoin T5mg% T10mg% T15mg% T20mg% T25mg% X
d’œuf

Volume cholestérol
0 0,25 0,5 0,75 1 1,25 - -
(ml)

Volume chloroforme
5 4,75 4,5 4,25 4 3,75 - -
(ml)

Volume total (ml) 5 5 5 5 5 5 5 5

 Après nous avons ajouté à chacun des tubes 2ml d’anhydride acétique puis 5 gouttes d’acide
sulfurique concentré (H2SO4). Nous avons ensuite homogénéisé le contenu de chaque tube puis
laissé à l’obscurité pendant 30minutes. Après les 30minutes, on a retiré les tubes pour enfin lire
au spectrophotomètre à 680nm la densité optique (DO) des solutions diluées, de la solution
inconnue et du jaune d’œuf (J), ce qui nous a permis de tracer la courbe d’étalonnage et de
déterminer à partir de leur densité optique la concentration de la solution inconnue et du jaune
d’œuf.

II. RESULTATS

Après les 30 min à l’obscurité, on observe une coloration verte dans chaque tube sauf dans le
témoin puis et après lecture au spectrophotomètre, on obtient les densités optiques consignées
dans le tableau ci-dessous avec les contractions en mg% à l’appui :

Tubes Témoin T5mg% T10mg% T15mg% T20mg% T25mg% X1 Jaune d’œuf

Colorati Légère Coloration Coloration Coloratio Coloration

Pas de Coloration Coloration
on coloration moins verte plus n moins plus moins
coloration verte vert foncé
observée verte verte foncée verte verte foncée

Densité
optique 0 0,222 0,415 0,679 0,743 0,894 0,351 0,479
(D.O)

Concent 0 5 10 15 20 25
rations
(en
mg%)

On peut donc après observation de la coloration de chaque tube situer la concentration de la

solution X1 entre T5mg% et T10mg% puis celle du jaune d’œuf entre T10mg% et T15mg%.

A. COURBE D’ETALONNAGE
La courbe d’étalonnage nous permet de déterminer la concentration des solutions inconnues X1
et du jaune(J)
Après projection sur la courbe d’étalonnage par rapport à leur densité optique, les
concentrations de solution inconnue X1 et du J sont respectivement : [X1] = 8,5mg% ; [ J ] =
11,75mg%.

B. Détermination de la masse de cholestérol par gramme de jaune d’œuf :

➢ Calcul de la masse du cholestérol dans 50ml (m).
m
C= V m=CxV AN: m = (11,75 x 50)/100 m = 5,87mg
➢ La masse du cholestérol contenue dans les 100ml(m’)
m’= m x 5 AN: m’= 5,87 x 5 m’= 29,35mg

➢ La masse du cholestérol contenue dans 1g de jaune d’œuf (m’’)

m’’=m’/4
AN: m’’= 29,35/4 m’’= 7,33mg m’’= 0,00733g

III. DISCUSSION
La coloration verte observée dans les tubes après passage à l’obscurité est due à l’action de
l’acide sulfurique sur le cholestérol plus de l’anhydride acétique, le témoin ne contenant pas de
cholestérol reste incolore. La variation de la coloration dans les tubes s’explique par les
différentes concentrations de cholestérol dans chaque tube, ainsi donc la quantité de cholestérol
est proportionnelle à l’intensité de la couleur verte observée.
Lors du dosage, l’anhydride acétique utilisé a pour rôle de protéger le groupement hydroxyle
du cholestérol de l’action de l’acide sulfurique. Ce dernier est responsable de la formation d’un
dérivé d’acide sulfonique cholestahexaène par la réaction de désaturation et de sulfations du
cholestérol ; l’acide sulfonique de cholestahexaène qui lui est responsable de la formation de la
coloration verte et de deux molécules d’acide acétique suivant l’équation :

Le composé d’acide sulfonique cholestahexaéne à double liaison conjugué est instable à la

lumière d’où la nécessité de garder les tubes à l’obscurité pendant le développement de la teinte
verte.
A travers la courbe d’étalonnage, nous pouvons confirmer que la concentration en cholestérol
augmente proportionnellement à la densité optique et donc à l’intensité de la coloration. En
effet plus une solution est colorée, plus la lumière a du mal à la traverser, donc plus la DO de
la solution augmente.

CONCLUSION

Tout au long de la manipulation nous avons eu à extraire le cholestérol du jaune d’œuf et le

doser par la méthode de LIEBERMAN BURCHARDT. En effet tout être humain a besoin du
cholestérol dans son alimentation pour une être en bonne santé car il assure plusieurs fonctions
essentielles pour l’organisme. Par ailleurs l’excès du cholestérol dans le sang peut être un facteur de
risque causant ainsi des maladies telles que les infarctus, les accidents cardiovasculaires.