ANNEE ACADEMIQUE 2022-2023

FACULTE DES SCIENCES

DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE
UE BCH221 : TRAVAUX PRATIQUE DE BIOCHIMIE METABOLIQUE

Extraction et Dosage du Cholestérol

Noms Prénoms N° de carte Parcours

FIAGBEDJI Afi Constantine 485505 BPA

SETI Essobouyou 525310 BPV

 INTRODUCTION

Le cholestérol est un lipide de la famille des stérols qui joue un rôle central dans
de nombreux processus biochimiques, il se rencontre seulement dans la
membrane des eucaryotes. Etant un composant majeur des membranes
cellulaires animales, le cholestérol contribue à la stabilité et au maintien de la
membrane cellulaire. Notre manipulation a consisté à l’extraction du cholestérol
du jaune d’œuf et à son dosage par la réaction de LIEBERMAN BURCHARDT.
I. Protocole expérimentale
Nous avons pris 4 g de jaune d’œuf dans un petit bécher sur lequel on a eu à
ajouter un volume de 10 à 15 ml d’acétone, après décantation, on est passé à la
filtration à l’aide d’un papier Whatman N°1 dans un ballon jaugé de 100 ml. Nous
avons répété 5 fois l'extraction et la filtration pour la décoloration de la lécithine
puis nous avons complété le filtrat avec de l’acétone jusqu’au trait de jauge du
ballon. Nous avons prélevé 20 ml de l’extrait acétonique qu’on a chauffé pour
évaporer l’acétone. On a obtenu un liquide huileux jaune (Cholestérol) que nous
avons repris avec du chloroforme pour amener à 50 ml dans un ballon jaugé de
50ml. On a eu à prélever 5 ml de cette solution chloroformique pour le dosage
(notre solution J). A partir de la solution mère de 100 mg % de cholestérol dans le
chloroforme, Nous avons préparé par dilution la gamme suivante :
𝐶𝑓𝑉𝑓
𝐶 𝑖 𝑉𝑖 = 𝐶 𝑓 𝑉𝑓 → 𝑉𝑖 𝑜𝑟 𝑜𝑛 𝑠𝑎𝑖𝑡 𝑞𝑢𝑒: 𝐶𝑖 = 100𝑚𝑔% ; 𝑉𝑓 = 5𝑚𝐿 𝑒𝑡
𝐶
= 𝑖

𝐶𝑓 = {5𝑚𝑔%; 10𝑚𝑔%; 15𝑚𝑔%; 20𝑚𝑔%; 25𝑚𝑔%}

Tube Témoin 5mg% 10mg% 15mg% 20mg% 25mg%
Volume de Cholestérol 0 0,25 0,5 0,75 1 1,25
(en mg%)
Volume de 5 4,75 4,5 4,25 4 3,75
Chloroforme (en ml)
Volume totale (en ml) 5 5 5 5 5 5

On a ajouté à ces 6 tubes deux tubes dont l’un contient 5 ml d’une solution
inconnue (X) et l’autre 5 ml de l’extrait chloroformique (solution J). Nous avons
ajouté ensuite 2 ml d’anhydride acétique puis 5 gouttes d’acide sulfurique à
chaque tube et nous avons homogénéisé les contenus. Après avoir laissé les
tubes reposer pendant 30 minutes à l’obscurité, nous sommes passés à la
lecture des densités optiques (DO) au spectrophotomètre à 680 nm.
II. Résultats
 Après l’ajout de l’acide sulfurique, on observe l’apparition de coloration verte
dans les tubes sauf le témoin qui reste incolore. L’intensité de la coloration croit
du tube 5 mg % au tube 25mg %. De même, la coloration du tube J et X semble
être la même. Les valeurs des DO sont consignées dans le tableau suivant :
Tube Témoin 5mg% 10mg% 15mg% 20mg% 25mg% X J
Densité 0 0,173 0,317 0,475 0,608 0,741 0,303 0,353
optique (DO)
Courbe d’étalonnage de la densité optique en fonction de la concentration en
cholestérol (sur le papier millimétré)
Après projection à partir de leur densité optique, les concentrations des
inconnus 𝑋1 et J sont respectivement :
[𝑋] = 9,25𝑚𝑔% 𝑒𝑡 [ 𝐽 ] = 10,75𝑚𝑔%
 Masse du cholestérol dans les 50ml de solution chloroformique [ J ]
m
soit Cm la concentration massique du chloroforme: Cm = 𝑑𝑜𝑛𝑐
V
𝑚 = 𝐶𝑚 × 𝑉 𝑜𝑟 𝑉 = 50𝑚𝐿 𝑒𝑡 𝐶𝑚 = 10,75𝑚𝑔% 10,75𝑔
𝑜𝑢 100𝑚𝑙
50×10,75
d’où 𝑚 = 100
𝑚50 = 5,375𝑚𝑔

 Masse de Cholestérol dans 100 ml d’acétone

:
𝟓, 𝟑𝟕𝟓 × 𝟏𝟎𝟎
2Oml d’acétone 5,375mg 𝒎𝟏𝟎𝟎 =
𝟐𝟎
100ml d’acétone 𝑚100 ?
La masse de cholestérol dans 100ml d’acétone est :
𝑚100 = 26,875𝑚𝑔

 Masse de cholestérol pour un gramme de jaune d’œuf :

4g de jaune d’œuf 26,875mg
𝟏 × 𝟐𝟔, 𝟖𝟕𝟓
𝒎=
1g de jaune d’œuf m? 𝟒
𝑚 = 6,71875 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑐ℎ𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡é𝑟𝑜𝑙 𝑝𝑎𝑟 𝑔 𝑑𝑒 𝑗𝑎𝑢𝑛𝑒 𝑑′𝑜𝑒𝑢𝑓

III. Interprétation des résultats

 L’utilisation de l’acétone lors de l’extraction sert non seulement à séparer les
lipides des protéines mais aussi à entrainer l’eau des matières grasses et le
cholestérol qui sont des composés solubles dans l’acétone. Par contre les
composés comme les Céphaline et les Lécithines ne sont pas soluble dans ce
dernier. L’obtention du liquide jaune huileux est due à l’évaporation de l’acétone
des 20 ml d’extrait acétonique après chauffage. Le Chloroforme quant à lui
solubilise le Cholestérol. L’ajout de l’Anhydride acétique permet de protéger le
groupement hydroxyle du cholestérol et favorise la formation de l’acide acétique
par la déshydratation. L’acide sulfurique ajouté, conduit à la formation d’acide
sulfonique cholestahexaène par la réaction de désaturation et de sulfations du
cholestérol, responsable de la coloration verte et le dégagement du dihydrogène.
L’humidité provenant du chloroforme réduit l’attaque de la liaison C=C
(carbone=carbone) en réduisant la concentration modeste de SO3... C’est la
réaction de Liebermann Burchardt qui s’effectue selon l’équation suivante :

Les solutions sont placées à l’obscurité pour éviter l’accélération de la réaction qui
va entrainer la destruction du cholestérol par la lumière, étant donné qu’en
présence de la lumière, la structure chimique du noyau stérol se transforme
progressivement en stéroïdes aromatiques qui sont dépourvus de couleur verte.
L’intensité de coloration verte est proportionnelle à la concentration du
cholestérol contenue dans chaque tube.
Conclusion
L’extraction et dosage du cholestérol du jaune d’œuf par la réaction de
Liebermann Burchardt nous a permis de déterminer la masse de cholestérol par
gramme de jaune d’œuf suite à l’établissement de la courbe d’étalonnage à l’aide
des densités optiques ; cette réaction est utilisée dans le domaine nutritionnelle
pour connaitre la quantité de cholestérol présent dans nos aliments a fin de
prévenir des maladies lié à l’accumulation de cholestérol.