IUT GB BMB R3.

12-BIOCHIMIE MEDICALE
TD n°2
Dysfonctionnement du métabolisme des glucides : le
diabète

A- DETERMINATION DE LA GLYCEMIE

Le glucose plasmatique est dosé par méthode enzymatique en point final utilisant les réactifs suivants :
• glucose oxydase ≥ 15 000 U.L-1
• peroxydase ≥ 300 U.L-1
• chromogène
• tampon phosphate pH 7,5

Le dosage est réalisé à température ambiante.

1. Écrire les équations de réaction du dosage (formules chimiques non exigées).

Préciser la réaction principale, la réaction indicatrice. Justifier.

2. Quelles sont les conditions expérimentales à respecter pour ce type de dosage ?

3. Sur le document ci-dessous, situer le temps t à partir duquel peut être réalisée la lecture au
spectrophotomètre.

Que devient ce temps t pour un dosage effectué à 37 °C ? Justifier.

4. Une solution de contrôle est préparée. Quel est l'intérêt de cette solution pour le dosage ?

5. Soient Aessai = 0,585 et Aétalon =0,450 es absorbances respectives de l'essai et de l'étalon.

Calculer la glycémie et conclure.

 Données :
• Concentration massique de l'étalon en glucose : ρétalon = 1 g.L-1
• Valeurs de la glycémie :

B- DIAGNOSTIC DU DIABETE GESTATIONNEL

Le test O’Sullivan, épreuve d’hyperglycémie, souvent pratiquée au 6ème mois de grossesse, permet le
dépistage du diabète gestationnel. Une glycémie supérieure à 1,40 g.L-1 une heure après ingestion de
50 g de glucose, permet de suspecter un diabète.
C’est le cas de Mme X.

Une HGPO (hyperglycémie provoquée par voie orale) est alors pratiquée par ingestion de 100 g de
glucose. On détermine la glycémie à jeun, puis une, deux et trois heures après ingestion.
Le tableau ci-dessous présente les résultats de l’HGPO de Mme X.

Les prélèvements sanguins dans le cadre de cet examen sont effectués sur fluorure de sodium.

1. Justifier cette précaution.

Au cours de la grossesse, le Tm ou taux maximal de réabsorption du glucose est modifié.

2. Définir le taux maximal de réabsorption d’une substance par le rein.

3. Interpréter les résultats de la glycémie de Mme X. Conclure.

4. Proposer une explication rendant compte de la glycosurie de Mme X.

5. Conclure sur la suspicion de diabète de Mme X.

 Données : Test HGPO chez la femme enceinte :

- si deux valeurs de la glycémie sont supérieures aux valeurs de référence, il y a diabète gestationnel.
- si une seule valeur est supérieure aux valeurs de référence, on parle d’intolérance au glucose.

C- EXPLORATION GLUCIDIQUE : DOSAGE DE L’HB GLYQUEE

• Principe
L’hémoglobine glyquée (Hb A1c) est séparée de l’hémoglobine non glyquée par chromatographie
d’affinité sur une colonne d’agarose contenant un ligand. Ce ligand fixe spécifiquement
l’hémoglobine glyquée.
Préparation de la colonne
Introduire le tampon de lavage. Le laisser s’écouler et jeter le liquide obtenu.
Préparation de l’échantillon
Ajouter au sang total du réactif d’hémolyse. Après 5 minutes, l’hémolysat est prêt.

• Dosage
→ 1er temps : placer un tube collecteur sous la colonne, introduire dans la colonne :
- 0,05 mL d’hémolysat
- 0,50 mL de tampon de lavage
Laisser s’imprégner au moins 5 min
→ 2ème temps :
- Ajouter 5 mL de tampon de lavage, laisser s’écouler et récupérer le volume de liquide
équivalent à la totalité des volumes introduits (fraction 1).
→ 3ème temps :
- Changer le tube collecteur, introduire 3 mL d’un nouveau tampon (tampon d’élution) ;
récupérer l’éluat qui correspond à la fraction 2.

• Résultat
Mesurer les absorbances à 405 nm :
- A1 pour la fraction 1
- A2 pour la fraction 2.

1. Qu’appelle-t-on hémoglobine glyquée ? Peut-on parler d’hémoglobine glycosylée ?

2. Dans quel cas voit-on une augmentation du taux d’hémoglobine glyquée ? Pourquoi ?

3. Préciser le type de liaison entre ligand et support, d’une part, et entre ligand et hémoglobine
glyquée, d’autre part.

4. A quoi correspondent les 3 temps du dosage ? Que recueille-t-on dans les fractions 1 et 2 ?

5. Que peut contenir le tampon d’élution qui le différencie du tampon de lavage ?

6. Donner l’expression littérale permettant de calculer le pourcentage d’hémoglobine glyquée par

rapport à l’hémoglobine totale à partir des absorbances A1 et A2.

7. Les valeurs pour un patient diabétique sont pour A1= 1,9 et A2= 0,4. Conclure sur le résultat obtenu.

 Données :
• Le taux normal est de 4 à 6%.
• Toute variation de 1 % de l’HbA1c correspond à une variation de 0,35 g/L ou 2 mmol/L de la glycémie
moyenne.

CORRÉLATION ENTRE LES GLYCÉMIES MOYENNES ET L’HbA1C

HbA1c (%) Glycémie plasmatique moyenne (g/L) Glycémie plasmatique moyenne (mmol/L)
6 1,35 7,5
7 1,70 9,5
8 2,05 11,5
9 2,40 13,5
10 2,75 15,5
11 3,10 17,5
12 3,45 19,5