Exploration 1 de La Glycoregulation

EXPLORATION DU METABOLISME
GLUCIDIQUE
Rappel sur le métabolisme des glucides
Ala Arg
Cys His
Gly Glu Gln
Ser Isocitrate Pro
Thr
Alpha-K-G
Citrate
Pyruvate Thr
Ile*
Succinyl-CoA
Met
Acétyl-CoA Val
OA
Fumarate
PEP
Malate Tyr*
Asp Phe*
GLUCOSE Asn
CH2OH CH2OH CH2OH

ATP ADP NAD+ NADH2
CHOH CHOH C=O
CH2OH CH2O-P CH2O-P

Di-OH-acétone-P
Glycérol Glycérol-3-P
CHO
Glucose F 1,6-bisP
CHOH
CH2O-P
EXPLORATION DE LA GLYCOREGULATION
Importance en clinique :
• Dépistage
• Diagnostic
• Evolution et suivi des complications du diabète sucré
Le diabète résulte d’une hyperglycémie chronique

liée à un défaut de sécrétion ou d’action de l’insuline
ou des deux anomalies associées.
En effet, c’est un trouble de l’assimilation, de

l’utilisation et du stockage des glucides apportés par
l’alimentation.
Classification du diabète selon ADA
 Diabète de type 1 (ex DID)

o Auto-immun
o Idiopathique
 Diabète de type II (ex DNID)
 Isulino résistance prédominante
 Insulinopénie prédominante
 Autres diabètes spécifiques (diabètes secondaires)
 Dysfonctionnement d’origine génétique des cellules beta
o MODY 1 par anomalie du chromosome 20: MODY ( Maturity- Onset Diabetes of the Young)
o MODY 2 par anomalie de chromosome 7
o MODY 3 par anomalie du chromosome 12
o MODY 4, 5,6 autres mutations
o Diabète mitochondriale
Classification du diabète selon ADA
Anomalies génétiques impliquant l’action de l’insuline

Pathologie du pancréas
o Hémochromatose
o Pancréatites chronique/Pancréatectomie
o Pancréatite fibrocalculeuse
o Cancer ou tumeur endocrine
Endocrinopathie
Diabètes induits par médicaments ou des toxiques
D’autres maladies génétiques parfois associées au diabète
Diabète gestationnel
1. LA GLYCOSURIE
 Mécanisme
Le glucose est filtré au niveau du glomérule rénal mais entièrement
réabsorbé au niveau du tubule proximal
Seuil rénal de glucose+++ (1,80 g/l)
 Prélèvement
Urines fraichement émises
En cas d'analyse différée, il est recommandé de conserver les urines au
réfrigérateur afin d’éviter une consommation du glucose par les
éventuelles bactéries.
1. LA GLYCOSURIE
 Méthodes
• Chimiques (liqueur de Fehling)
• Enzymatiques (bandelettes réactives imprégnées de glucose oxydase)
1. LA GLYCOSURIE
 Les risques d’erreurs

- Mise en évidence d’autres sucres réducteurs: galactose,
fructose….
- Bandelettes périmées ou des traces d’eau de javel peuvent
donner des réactions faussement positives
- Des médicaments (isoniazide) ou la vitamine C ……
réactions faussement négatives
1. LA GLYCOSURIE
 Les risques d’erreurs
-Une cétonurie importante peut diminuer l’intensité de

la réaction de mesure de la glucosurie
-Le diabète rénal et la grossesse sont des causes
d’abaissement du seuil rénal du glucose
2. LA GLYCEMIE A jeun
 Prélèvement
- Sang veineux recueilli sur tube avec anti glycolytique

(fluorure de Na, iodoacétate)
- Action antiglycolytique ne se manifeste qu’après la première heure
- Plasma +++ après centrifugation dans l’heure qui suit
 Prélèvement
Sang capillaire
2. LA GLYCEMIE
 Méthodes
Principe de base: les différentes méthodes ont pour propriété de

transformer le glucose invisible par des enzymes spécifiques puis
de quantifier les produits obtenus visibles (colorés). La
concentration du produit coloré obtenu est proportionnelle à
celle du glucose
2. LA GLYCEMIE
 Méthode à la Glucose oxydase
Elle est la plus utilisée, le glucose est converti en acide gluconique et

de l’eau oxygénée est formée. Cette dernière oxyde un substrat
incolore en produit coloré qui est mesuré au spectrophotomètre.
glucose oxydase peroxydase

Glucose H2O2 complexe coloré
On mesure l’intensité de la coloration à 525 nm

2. LA GLYCEMIE
 Méthodes
• Hexokinase (méthode de référence)
Hexokinase G6PDH
Glucose G6P 6 phosphogluconate

NADP+ NADPH
En présence d’ATP et de Mg2+; la variation d’absorbance à 340 nm en

cinétique du NADPH, H+ produit est proportionnelle à la glycémie.
2. La Glycémie Post – Prandiale
- Chez le non diabétique, l’augmentation de la glycémie post

prandiale est limitée dans le temps (2H)
- Sa mesure permet de vérifier que la montée glycémique est
sous contrôle
- Stimulation de la sécrétion insulinique et réduction de la
glucagonémie (hormones gastrointestinales, les incrétines:
GLP1)
2. LA GLYCEMIE
 Variations physiologiques
• Age : valeur glycémie plus faible chez
l’enfant
plus élevée après 60 ans
• Grossesse: valeur est abaissée
• Alcool, cigarette, stress ou froid ….. Élevation
de la glycémie
2. LA GLYCEMIE
 résultats
• Glycémie à jeun : 3,8 à 5,1 mmol/l (0,7 à
0,9g/l)
• Glycémie post prandiale (< 1,40g/l)
3. EPREUVES DYNAMIQUES
a. Épreuves d’hyperglycémie provoquée
 HGPO
• Protocole
-sujet à jeun depuis 12h
- Repos de 30 mn avant début épreuve
-administration de 75g de glucose dans 200ml d’eau (adulte)
- Charge orale en glucose est de 1,75g/Kg chez l’enfant
-doser la glycémie à T0, puis toutes les 30mn pendant 3 à 4h
-rechercher la glycosurie
- mesurer l’insuline et /ou le peptide C
Protocole du test d’hyperglycémie provoquée par voie orale (OMS)
diabète gestationnel
A T0 un 1er prélèvement est effectué sur tube fluoré avant ingestion de la

solution glucosée
Immédiatement après le prélèvement sanguin, les sujets ingèrent la

solution glucosée en maximum 5mn.
L’heure est notée et le chronomètre enclenché au début de l’ingestion
A T60 un 2ème prélèvement est effectué
A T120 un 2ème prélèvement est effectué
Ensuite, les échantillons sont centrifugés et le plasma est séparé du culot

globulaire.
 HGPO
• Résultats pathologiques
-Intolérance au glucose
Courbe tarde à revenir à la normale au bout de deux
heures et reste au dessus de la valeur seuil (1,4 -
2 g/l)
-Diabète confirmé
courbe largement au dessus de la valeur seuil > 2g/l
 HGPO
• Résultat normal
-augmentation de la glycémie entre 30 et 60 mn
jusqu’à un maximum puis retour à son niveau
initial au bout de 2H
-onde d’hypoglycémie
-glycosurie nulle
Critères récents utilisés par les différentes associations pour
le diagnostic du diabète gestationnel
Critères OMS modifiés 1999 ACOG IADPSG NICE 2015

2001 OMS 2013
ADA 2014
HGPO 75g HGPO 100g HGPO 75g HGPO 75g
1 valeur pathologique 2 valeurs 1 valeur 1 valeur

pathologiques pathologique pathologique
HGPO 0’ ≥110 mg/dl ≥95 mg/dl ≥92 mg/dl ≥101 mg/dl
HGPO 1h ≥180 mg/dl ≥180 mg/dl
HGPO 2h ≥140 mg/dl ≥155 mg/dl ≥153 mg/dl ≥140 mg/dl

Diabète gestationnel
-trouble de la tolérance glucidique conduisant à une hyperglycémie de
sévérité variable débutant ou diagnostiqué pour la première fois
pendant la grossesse quels que soient le traitement nécessaire et
l’évolution dans le post partum
(diabète patent préexistant à la grossesse et découverte à l’occasion de
celle-ci et qui va persister après accouchement /
anomalie de la tolérance glucidique apparue au cours de la grossesse (2°
ou 3° trimestre et disparaissant en post-partum)
 HGPV
-injection 25g de glucose
-doser glycémie toutes les 10mn pendant 90mn
4. Dosages complémentaires
a. Insuline
 Méthodes
-radio-immunologiques
-immunoenzymatiques
b. Peptide C et Test au glucagon
-lorsque dosage insuline impossible
-injection IV de glucagon et dosage peptide C
c. hémoglobine glyquée
Etude de l’équilibre glycémique sur 3 mois
Résulte de la fixation de glucose ou de dérivés
phosphorylés du glucose sur la fonction NH2 du
résidu valine à l’extrémité N-terminale des deux
chaînes β de l’hémoglobine
 Méthodes
-Chromatographies échangeuses d’ions
- Isofocalisation
- Radioimmunologiques
- HPLC
d. Fructosamines
Etude de l’équilibre glycémique sur 2 à 3 semaines
L’hémoglobine glyquée est séparée de l’hémoglobine non glyquée par

chromatographie d’affinité sur une colonne d’agarose contenant un
ligand.
Ce ligand fixe spécifiquement l’hémoglobine glyquée.
Le système chromatographique
(HPLC) comporte une colonne
échangeuse de cations, trois tampons
d’élution (pH acide décroissant et
force ionique croissante) et un
détecteur photométrique.
Intervalle de référence HbA1c: 4 – 6%

La fructosamine désigne l'ensemble des protéines glyquées présentes

dans le sérum, en particulier l'albumine glyquée (80 %).
La concentration de ces protéines est proportionnelle au taux du glucose

dans le sang, mais leur renouvellement est beaucoup plus rapide que
celui de l’HbA1C.
Ainsi la fructosamine est un témoin du niveau moyen du glucose sanguin

sur une période courte de deux à trois semaines. (200 -290 µmol/l)
Ses indications sont:

- Hémoglobinopathies : thalassémies, drépanocytoses
- Evaluation d'un changement thérapeutique antidiabétique
- Au cours de la grossesse
e. corps cétoniques
Au cours du diabète sucré, les altérations métaboliques

observées rappellent celles du jeune prolongé.
Le déficit en insuline entraîne une lipolyse accrue avec
production excessive de corps cétoniques.
Leur concentration importante dans le plasma peut

entraîner un coma acido-cétosique
f. corps cétoniques
Méthodes
•Bandelettes réactives
Situations
-diabète décompensé
-cétose de jeûne
g. Lactate
h. Bilan lipidique
i. Bilan rénal
e. Les auto-anticorps
- Diabète de type I: destruction progressive des
cellules Béta pancréatiques entrainant une
insulinopénie
- Type I A le plus fréquent autoimmun
- Type I B idiopathique
- Forme Typique I A le plus fréquent : autoimmun
- carence absolue en insuline avec lipolyse et cétogenèse
réactionnelle
- Diabète du sujet jeune mince
- Avant âge de 20 ans ( 4 – 6 ans)/ (12- 15 ans)
- Début est brutal avec un syndrome cardinal
- Carence en insuline; cétonurie franche, glycosurie
- Découverte sur acidocétose aigue parfois même coma
- Forme typique I A le plus fréquent : autoimmun
Les auto-anticorps: présence d’un ou de plusieurs marqueurs
- anticorps anti-îlots de Langerhans (ICA)
- anticorps anti-insuline (IAA)
- anticorps anti-IA2 (Insulinoma associated protein 2) dirigés contre une
tyrosine phosphatase membranaire
- anticorps anti-GAD65 ( GAD 65 reconnus par les ICA)
Décarboxylase de l’acide glutamique (GAD) catalyse la synthèse de la GABA
- Marqueurs de prédisposition génétique, typage HLA
- Gènes DQ (DQA et DQB) et DR ( DRA et DRB1) système HLA
- Possibilité d’association avec d’autres maladies autoimmunes
- Forme atypique rare de type IA
- Diabète d comme le diabète de type 2e début tardif et progressif
- Présence de marqueurs d’autoimmunité
- Sujet âgé de moins de 45 ans sans hérédité de diabète type 2
- Antécédents personnels ou familiaux de maladies autoimmunes
- Diabète de type 2
- Sujet de plus de 40 ans
- Obésité
- Sédentarité
- Asymtomatique d’où le retard diagnostique
- Marqueurs du syndrome métabolique
- Antécédents familiaux de 1° degré
FIN

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EXPLORATION DU METABOLISME

CH2OH CH2OH CH2OH

CH2OH CH2O-P CH2O-P

Le diabète résulte d’une hyperglycémie chronique

En effet, c’est un trouble de l’assimilation, de

 Diabète de type 1 (ex DID)

Anomalies génétiques impliquant l’action de l’insuline

 Les risques d’erreurs

 Les risques d’erreurs

-Une cétonurie importante peut diminuer l’intensité de

- Sang veineux recueilli sur tube avec anti glycolytique

Principe de base: les différentes méthodes ont pour propriété de

 Méthode à la Glucose oxydase

Elle est la plus utilisée, le glucose est converti en acide gluconique et

glucose oxydase peroxydase

On mesure l’intensité de la coloration à 525 nm

Glucose G6P 6 phosphogluconate

En présence d’ATP et de Mg2+; la variation d’absorbance à 340 nm en

2. La Glycémie Post – Prandiale

- Chez le non diabétique, l’augmentation de la glycémie post

A T0 un 1er prélèvement est effectué sur tube fluoré avant ingestion de la

Immédiatement après le prélèvement sanguin, les sujets ingèrent la

A T60 un 2ème prélèvement est effectué

A T120 un 2ème prélèvement est effectué

Ensuite, les échantillons sont centrifugés et le plasma est séparé du culot

Critères OMS modifiés 1999 ACOG IADPSG NICE 2015

HGPO 75g HGPO 100g HGPO 75g HGPO 75g

1 valeur pathologique 2 valeurs 1 valeur 1 valeur

HGPO 0’ ≥110 mg/dl ≥95 mg/dl ≥92 mg/dl ≥101 mg/dl

HGPO 1h ≥180 mg/dl ≥180 mg/dl

HGPO 2h ≥140 mg/dl ≥155 mg/dl ≥153 mg/dl ≥140 mg/dl

L’hémoglobine glyquée est séparée de l’hémoglobine non glyquée par

Intervalle de référence HbA1c: 4 – 6%

La fructosamine désigne l'ensemble des protéines glyquées présentes

La concentration de ces protéines est proportionnelle au taux du glucose

Ainsi la fructosamine est un témoin du niveau moyen du glucose sanguin

Ses indications sont:

Au cours du diabète sucré, les altérations métaboliques

Leur concentration importante dans le plasma peut

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