ARTICLE
LES DIFFICULTÉS D’INTERPRÉTATION DU DOSAGE DE L’HÉMOGLOBINE A1C
Nathalie Mario, Elisabeth Lasnier
Service de biochimie A
Hôpital Saint- Antoine (AP-HP)
184, rue du Faubourg Saint-Antoine
75571 Paris cedex 12
Correspondance : nathalie.mario@sat.aphp.fr
Article paru dans la Revue Francophone des Laboratoires (RFL, no 382, mai 2006, p. 39-43) et reproduit avec la permission de la
rédactrice en chef, madame Martine Tirouche, et du président du Conseil scientifique de la RFL, professeur Paul Lafargue.
RÉSUMÉ
Les hémoglobines (Hb) glyquées et plus spécifiquement l’HbA1c
sont utilisées pour l’évaluation rétrospective de l’équilibre
glycémique au long cours. Les réactifs commercialisés pour le
dosage de l’HbA1c utilisent des méthodes de chromatographie
d’échange d’ions, d’immunoagglutination ou d’affinité et
mesurent des dérivés glyqués de l’Hb différents. L’existence
de variants génétiques de l’Hb et de dérivés modifiés post-
traductionnellement de l’Hb affectent différemment ces métho-
des. De plus, certaines situations pathologiques diminuant la
durée de vie des globules rouges rendent ininterprétables
les dosages. La connaissance de l’ensemble des facteurs
influençant le dosage de l’HbA1c est essentielle pour une prise
en charge optimale des patients diabétiques.
SUMMARY
Glycohemoglobins and especially hemoglobin (Hb) A1c are used
to assess long-term glycemic control in individuals with diabetes
mellitus. Commercially available methods for HbA1c determina-
tion include ion-exchange chromatography, immunologic and
affinity assays which measure different amounts of glycohemo-
globins. Genetic variants and chemically modified derivatives of
Hb can affect the accuracy of HbA1c measurement and is
method dependent. Moreover, pathologic conditions affecting
erythrocytes lifespan makes measurements uninterpretable.
Knowledge of all these factors influencing HbA1c determination
is essential to prevent mismanagement in diabetic patients.
INTRODUCTION
Le diabète sucré est défini par une glycémie à jeun supérieure
à 7 mmol/L à deux reprises ou par une glycémie, quel que soit
le moment du prélèvement, supérieure à 11 mmol/L (1). La
prévalence en France métropolitaine est de 3 % et va
augmenter dans les années à venir en raison du vieillissement
de la population et de l’augmentation de l’obésité. Les
complications du diabète sont graves et responsables de
séquelles lourdes et invalidantes, en particulier les complica-
tions microvasculaires qui sont très liées à la durée d’évolution
du diabète et au contrôle glycémique. Le dosage de l’hémo-
globine A1c chez les patients diabétiques est reconnu comme
marqueur d’évaluation de l’équilibre glycémique au long cours
et la Haute Autorité de Santé française recommande de le
pratiquer tous les 3-4 mois chez les diabétiques de type 2. Les
méthodes disponibles pour le dosage de l’HbA1c sont basées
sur ses propriétés physicochimiques ou sur la reconnaissance
par un anticorps spécifique. Malgré des progrès dans la qualité
et la standardisation de ces méthodes, des interférences
analytiques dues à des mutants de l’hémoglobine (Hb) ou à
l’existence d’autres dérivés de l’Hb existent. De plus, l’interpré-
tation des seuils de suivi du diabète n’est possible que lorsque
diverses conditions physiologiques sont respectées. La mécon-
naissance de ces facteurs peut conduire à l’interprétation
erronée des dosages d’HbA1c .
Hb GLYQUÉES ET HbA1c
Les hémoglobines glyquées correspondent à l’ensemble des
molécules d’hémoglobines modifiées par fixation non
enzymatique d’oses sur les fonctions aminées libres de la
globine. La glycation est un phénomène physiologique lent dont
la première étape réversible correspond à la formation d’une
base de Schiff ou Hb glyquée labile. Le nombre de fonctions
susceptibles de fixer un ose et le fait que d’autres oses que le
glucose peuvent se fixer génèrent une multitude de formes
glyquées de l’Hb. Le site principal de glycation de l’hémoglobine
majoritaire de l’adulte, l’HbA constituée de 2 chaînes α et 2
chaînes ß de globine, se situe sur la valine N-terminale de la
chaîne ß. Les autres sites de glycation correspondent aux
lysines non terminales des chaînes α et ß et à la valine N-
terminale de la chaîne α (Tableau 1). La glycation sur l’extrémité
N-terminale modifie significativement les propriétés physico-
chimiques de la molécule et conduit à la formation d’Hb dites
rapides dont l’élution est plus précoce en chromatographie
d’échange cationique faible que celle de l’HbA non modifiée ou
HbA0 . Ces fractions rapides sont appelées HbA1 et ont été
désignées, en fonction de leur ordre d’élution, par une lettre
minuscule (HbA1a , A1b et HbA1c ). La molécule fixée par ces Hb
est le glucose pour l’HbA1c (4-6 % de l’Hb totale), le pyruvate
pour l’HbA1b (0,8 % de l’Hb totale) et le fructose 1-6 diphosphate
ou le glucose 6 phosphate pour l’HbA1a (0,5 % de l’Hb totale).
L’HbA1c est elle-même hétérogène et la forme la plus répandue
est celle où une seule chaîne ß a fixé du glucose sur son
extrémité N-terminale (17).
Il est évident que toutes les formes d’Hb, et pas seulement
l’HbA, sont glyquées. Les Hb mineures (HbA2 et HbF) ainsi que
les variants éventuels existent aussi sous forme glyquée.
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Tableau 1
Sites de glycation de l’HbA
Sites de glycation % de glycation
Val ß N-terminale (ßVal 146) 60
Lys non terminale
(αLys 16, ßLys 66, ßLys 17, ßLys 7 et 34
ßLys 120)
Val α N-terminale (αVal 141)
6
DOSAGE DE L’HbA1c
 Principes des méthodes de dosage
Les techniques permettant le dosage spécifique de l’HbA1c
exploitent soit les caractéristiques physico-chimiques (chroma-
tographie d’échange ionique, électrophorèse), soit immuno-
logiques de la molécule. Les techniques de chromatographie
d’échange cationique faible sont les techniques « historiques »
d’étude de l’HbA1c , ayant permis son isolement et sa caractéri-
sation. Elles sont basées sur la plus grande électronégativité
des Hb glyquées sur l’extrémité N-terminale des chaînes ß. Le
terme générique chromatographie d’échange ionique recouvre
des techniques très différentes allant des colonnes de chroma-
tographie basse pression (CLBP) aux automates de chromato-
graphie haute performance (CLHP) très résolutifs. Leurs pro-
priétés analytiques varient et le pic « HbA1c » ne contient pas
toujours les mêmes constituants. Les techniques électrophoré-
tiques, réalisées le plus souvent en gel d’agarose, mettent en jeu
les mêmes propriétés de l’HbA1c . Les anticorps utilisés dans les
méthodes immunologiques reconnaissent le peptide N-terminal
des chaînes ß modifiées par la fixation de glucose. Il s’agit d’un
court peptide, de longueur variable selon les fabricants.
Les techniques dosant l’Hb glyquée totale reposent sur l’affinité
des Hb glyquées pour les dérivés des acides boronique et
phénylboronique, qui forment des complexes avec les groupe-
ments 1-2-cis diol engendrés par la fixation des molécules
d’hexoses sur l’Hb. Un calcul de corrélation par rapport à une
méthode de référence permet une conversion des valeurs en
HbA1c.
 Standardisation des méthodes
À l’origine de ces discussions, se trouvent les études épidémio-
logiques à grande échelle du Diabetes Control and Complication
Trial (DCCT) et de l’United Kingdom Prospective Diabetes Study,
qui ont établi de façon certaine une relation entre l’équilibre
glycémique objectivé par l’HbA1c et les complications dégénéra-
tives du diabète, de type micro et macroangiopathiques. Des
valeurs thérapeutiques décisionnelles ont alors été fixées : 7 %
pour le diabète de type 1 et 6,5 % pour le diabète de type 2. Ces
seuils ont été définis après mesure de l’HbA1c par la seule
technique de standardisation disponible au moment des études,
soit celle du programme américain National Glycohemoglobin
Standardization Program (NGSP). Le dosage par CLHP sur le
system BioRex 70 avec calibration sur un hémolysat avait été
choisi comme méthode de référence (5).
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Parallèlement, des travaux de standardisation avec une
méthode de dosage plus spécifique de l’HbA1c ont été réalisés
par l’International Federation of Clinical Chemistry (IFCC). Une
méthode de référence en CLHP couplée à la spectrométrie de
masse ou l’électrophorèse capillaire après protéolyse enzyma-
tique de l’hémoglobine, calibrée avec de HbA1c purifiée a été
décrite (9). Cependant, cette méthode fournit des valeurs
d’HbA1c de 1 à 2 % plus basses que celles obtenues avec la
standardisation NGSP. Ceci est essentiellement dû au fait que le
pic chromatographique obtenu avec la méthode de référence
NGSP n’est pas pur à 100 % (15). Un groupe d’experts
internationaux a travaillé sur la reproductibilité et la transféra-
bilité de cette méthode. Une fois ses qualités analytiques
établies, il convenait en effet de faire le lien entre les deux
programmes de standardisation, NGSP/DCCT et IFCC. Après
plusieurs échanges au sein des laboratoires du groupe d’experts
de l’IFCC et du NGSP, la relation entre les deux méthodes a été
récemment décrite (7). La relation entre les deux méthodes
est : NGSP = (0,915 x IFCC) + 2,15. Une équation existe donc
entre les deux types de standardisation, et les membres des
deux groupes ont mis en place une organisation permettant de
surveiller l’absence de dérive ultérieure entre les résultats. De
plus, des études de cohortes à grande échelle sont nécessaires
pour fixer de nouveaux seuils décisionnels si la standardisation
IFFC devient la nouvelle référence (12-14).
 Techniques utilisées en France
L’Agence française de sécurité sanitaire des produits de santé
(AFSSAPS) a réalisé en 2002 une réévaluation des réactifs de
dosage de l’HbA1c destinés au suivi biologique du diabète par
l’étude des notices d’utilisation des 36 réactifs alors disponibles
en France. Les items retenus concernaient l’intitulé (HbA1c par
dosage direct ou algorithme à partir de l’Hb glyquée), l’intérêt
clinique (suivi du diabète), l’imprécision (répétabilité < 3 % et
reproductibilité < 5 %), les interférences spécifiques (variants
de l’hémoglobine et HbA1c labile) et l’intervalle de référence
conforme à la standardisation (NGSP ou IFCC). Les réactifs
dosant l’HbA1 ou l’Hb glyquée totale sans fournir de calcul
validé du pourcentage d’HbA1c ont été exclus. Au final, 16
réactifs répondaient aux items du cahier des charges et 5 y
répondaient partiellement ; l’AFSSAPS avait proposé aux
fabricants de ces derniers de revoir leurs notices en
conséquence. Les listes de réactifs sont disponibles sur le site
Internet de l’AFSSAPS (8). Le Tableau 2 présente la plupart de
ces réactifs, classés par méthode d’analyse, et leurs
caractéristiques colligées à partir des notices d’utilisation.
Les enquêtes nationales menées sur l’utilisation des différentes
méthodes de dosage de l’HbA1c , au cours d’opérations de
contrôle de qualité, ont permis de mettre en évidence une
évolution dans l’utilisation des techniques au sein des
laboratoires français entre 1999 et 2003. L’utilisation des
techniques de chromatographie d’échange d’ions est en forte
progression (28 % en 1999 vs 44 % en 2003). En particulier,
l’utilisation des techniques de CLHP a plus que doublé en raison
d’une automatisation complète et de la grande précision des
nouveaux systèmes (14 % en 1999 vs 31 % en 2003). À
l’inverse, l’utilisation des microcolonnes longues et délicates à
mettre en oeuvre est en forte décroissance (7 % en 1999 vs 1 %
en 2003). Les techniques d’électrophorèse sont marginales
(2 % en 1999 vs 1 % en 2003). Les techniques par chroma-
tographie d’affinité sont de moins en moins utilisées en raison
du retrait de nombreuses trousses de réactifs basées sur ce
principe (12 % en 1999 vs 5 % en 2003). Les techniques
immunologiques restent majoritaires car elles sont utilisables sur
la plupart des automates de biochimie et ne nécessitent donc
Tableau 2
Principaux réactifs disponibles pour le dosage de l’HbA1c en France

Méthode Fabricant (gamme) Certification Mode de calcul Interférences décrites dans les notices

Chromatographie
d’échange d’ions

Bio-Rad (Varian, D10) Séparation et donc pas d’interférence avec

HbA1c / HbA1c labile, HbF, variants de l’Hb de charges
CLHP Tosoh Bioscience (G7) NGSP
ensemble HbA différentes de l’HbA0 et de l’HbA1c (dont Hb S,
Ménarini (HA) C, D et E).

Protocole d’hémolyse adapté pour éviter

l’interférence de l’HbA1c labile (comigration).
Bio-Rad (Diastat) NGSP
Mauvaise séparation de l’HbF. Séparation des
CLBP Hb S et C.

Bayer Diagnostics
Notice non communiquée par le fabricant.
(Glycomat)

Microcolonne Bio-Rad

Electrophorèse Sebia Non précisée HbA1/ Hb totale Comigration HbA1c et HbF.

Hb glyquées/
Chromatographie Progen (Nycocard) Non précisée Hb non glyquées Pas de description des interférences.
d’affinité calcul HbA1c

ABX Pentra NGSP Augmentation de la valeur d’HbA1c en

présence d’Hb S et C. Résultat d’HbA1c <
Roche Diagnostics résultat attendu en présence d’HbF > 10 %.
(Tina-Quant, Integra) IFCC Pas d’interférence de l’HbA1c labile.
Formule pour
NGSP
Beckman Coulter HbA1c/ Hb totale Pas d’effet de l’Hb glyquée labile,
Méthode
(Synchron) de l’HbF < 10 %, des Hb S et C.
immunologique :
inhibition
d’agglutination Reconnaissance par l’anticorps de nombreuses
Dade Behring
NGSP Hb anormales glyquées (S, C, E, G, H).
(Dimension)
Résultat inexact si taux élevé d’Hb F.

Résultat d’HbA1c < résultat attendu en

Bayer Diagnostics présence d’Hb S ou C (diminution durée de vie
NGSP
(DCA 200) des hématies) ou d’HbF > 10 %.

pas d’investissement spécifique (40 % en 1999 vs 49 % en Prélèvement

2003). Au cours de cette période, l’utilisation de techniques
certifiées NGSP/DCCT a également fortement augmenté pour
atteindre 97,3 % des laboratoires en 2003 (6).
PRÉCAUTIONS D’INTERPRÉTATION ET CAS
PARTICULIERS
Les résultats de dosages d’HbA1c doivent être examinés à la
lueur des données cliniques et biologiques et ne peuvent jamais
être considérés de façon isolée, en faisant abstraction des
autres paramètres d’évaluation de l’équilibre glycémique. Si le
résultat est concordant, l’interprétation est aisée. S’il existe une
discordance, il faut en analyser les causes après avoir éliminé
un problème d’ordre méthodologique.
Le sang peut être prélevé indifféremment au pli du coude sur
héparine, fluorure, EDTA ou ACD. Un prélèvement de sang
capillaire est également possible. Le stockage du sang total à
+ 4°C pendant 2 jours ne semble pas modifier les résultats
obtenus par les différentes techniques.
Variations physiopathologiques
Les valeurs d’HbA1c sont indépendantes du régime alimentaire
et de l’exercice physique, ainsi que de l’état de jeûne. Les
variations physiologiques interindividuelles de l’HbA1c sont
faibles (16). La valeur sémiologique de l’HbA 1c comme
marqueur rétrospectif et cumulatif de l’équilibre glycémique au
cours des 6 à 8 semaines précédant le prélèvement chez les

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Figure 1
Représentation schématique des chromatogrammes pour la
mesure de l’HbA1c
patients diabétiques est conditionnée par une durée de vie
normale des hématies (120 jours) et une synthèse normale de
l’Hb avec 97 à 99 % d’HbA (4). Si l’un de ces deux paramètres
est modifié, l’interprétation du dosage d’HbA1c devient délicate,
voire impossible. La glycation de l’Hb se produit dès les stades
érythropoïétiques, puis tout au long de la présence des globules
rouges dans le courant circulatoire. Le processus est cumulatif
et le taux d’HbA1c augmente avec l’âge des globules rouges.
La mesure effectuée sur un échantillon tient compte du
renouvellement équilibré des globules rouges. Toute
modification de la durée de vie des hématies entraîne donc une
perturbation de cet équilibre, et la destruction prématurée des
érythrocytes les plus âgés diminue les valeurs d’HbA1c . Les
hémolyses, quelle que soit leur origine, les hémorragies ou
spoliations sanguines importantes et les traitements stimulant
l’érythropoïèse (érythropoïétine) entraînent un rajeunissement
global de la population érythrocytaire en quelques jours et
rendent ininterprétable les dosages d’HbA1c . De la même façon,
les antécédents transfusionnels récents altèrent les taux
d’HbA1c . Ces situations sont fréquentes en milieu hospitalier et
leurs conséquences sur les dosages d’HbA1c sont souvent
méconnues des cliniciens.
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Présence d’une hémoglobinopathie
 Conséquences physiologiques
L’hémolyse liée à l’hémoglobinopathie est souvent difficile à
évaluer et peut fausser le résultat d’HbA1c . De plus, sur le plan
métabolique, il n’existe pas de preuve expérimentale permettant
d’affirmer que la cinétique de glycation de tous les variants soit
identique à celle de l’HbA. Les conclusions établies à propos de
l’HbA1c ne sont probablement pas transposables aux formes
glyquées des variants, et l’on sait peu de choses d’une possible
compétition entre les différentes formes d’Hb pour la glycation.
 Interférences analytiques des variants de l’Hb
La présence d’une Hb anormale ne peut être évoquée que
lorsque la technique de dosage de l’HbA1c met en évidence
l’anomalie qualitative (chromatographie d’échange ionique haute
performance). Avec les autres méthodes de dosage, la
présence d’un variant passe inaperçue alors que l’interférence
analytique est très variable selon le type d’anomalie de l’Hb et la
méthode utilisée. Idéalement, il faudrait d’abord détecter la
présence de l’Hb anormale pour décider s’il est légitime
d’interpréter ou non les résultats.
Les résultats d’HbA1c mesurée par chromatographie seront
inexacts lorsque le variant de l’Hb ou son dérivé glyqué ne pour-
ront être séparés de l’HbA ou de HbA1c (2). La Figure 1
présente les situations observables en CLHP et leurs
conséquences sur le dosage d’HbA1c . Parmi les variants de l’Hb
les plus fréquemment rencontrés en France, les Hb S, C, E et la
plupart des Hb du groupe D sont dans le cas représentés sur
la Figure 1B et le dosage de l’HbA1c est exact chez les
hétérozygotes. L’interprétation du résultat reste posée car il
existe une hémolyse chronique générée par l’anomalie. Si on
considère que l’hémolyse est constante, que la présence du
variant ne modifie pas la cinétique de glycation de l’HbA0 , et que
sa propre glycation est comparable, alors les résultats d’HbA1c
toujours obtenus avec la même méthode de dosage peuvent
être comparés d’une fois sur l’autre pour un patient donné.
Cependant, le chiffre d’HbA 1c ne reflète plus la période
habituellement explorée mais une période plus courte spécifique
à chaque patient. Les chiffres habituellement considérés comme
critères d’interprétation de l’équilibre glycémique ne peuvent
plus être retenus (18). Les résultats d’HbA1c obtenus dans les
cas représentés sur la Figure 1C, 1D et 1E ne doivent pas être
rendus car ils sont ininterprétables. L’Hb Hope dont la
prévalence est relativement importante dans certaines
populations africaines est dans le cas 1C et conduit à des taux
d’HbA1c supérieurs à 30 %. En pratique, des valeurs d’HbA1c
supérieures à 15 % conduisent à la recherche plus approfondie
d’un variant de l’Hb. Des taux particulièrement bas d’HbA1c
(inférieurs à 3,5 %) conduisent également à la recherche d’un
variant de l’Hb en raison du risque de se trouver dans la situa-
tion 1E. De la même façon, des taux d’HbA1c situés dans
l’intervalle de l’objectif thérapeutique mais en désaccord avec le
cahier d’autocontrôle ou le fichier extrait du lecteur de glycémie
capillaire d’un patient doit faire suspecter un variant de l’Hb.
Cette dernière situation ne peut être mise en évidence que si le
dialogue clinico-biologique est satisfaisant.
Les méthodes immunologiques ne permettent pas de détecter la
présence d’un variant de l’Hb. Elles mesurent l’HbA1c à l’aide
d’un anticorps reconnaissant un peptide de 4 à 10 acides
aminés dans la région N-terminale de la chaîne ß de l’Hb. Tous
les variants pour lesquels la mutation se trouve sur la chaîne α
ou en amont de cette zone sur la chaîne ß seront, sous forme
glyquée, reconnus par l’anticorps et comptabilisés dans l’HbA1c .
Tous les variants précités pour les techniques chromatogra-
phiques sont dans ce cas. Le taux d’HbA1c rendu correspond en
fait à un taux de « HbA1c + HbX1c » rapporté en pourcentage à
l’Hb totale. En se référant au Tableau 2, il est étonnant
d’observer que l’interprétation de cet état de fait dans les notices
des fabricants est très variable et souvent inexacte. La plupart
des variants de l’Hb interfèrent bel et bien dans les dosages
d’HbA1c par méthode immunologique. L’interprétation de ce taux
de « HbA1c + HbX1c » comme s’il s’agissait d’un taux d’HbA1c
présuppose que les glycations du variant et de l’HbA sont iden-
tiques et se font sans compétition. De plus, l’hémolyse induite
par le variant diminue la demi-vie des globules rouges avec les
conséquences précédemment décrites sur les taux d’HbA1c .
L’utilisation des taux de « HbA1c + HbX1c » pour le suivi d’un
patient toujours avec la même technique immunologique, en
appliquant les précautions décrites pour les méthodes chroma-
tographiques, ne peut être proposée que si l’hémoglobinopathie
a été détectée. La recherche d’une hémoglobinopathie chez
tout patient avant dosage d’HbA1c par méthode immunologique
constitue donc une précaution utile en particulier pour les sujets
issus de populations où la prévalence des hémoglobinopathies
est élevée.
Les méthodes d’affinité mesurent l’ensemble des hémoglobines
glyquées et l’interprétation des résultats présuppose que l’ano-
malie soit connue pour appliquer les restrictions précédemment
décrites.
 Interférences analytiques des anomalies quantitatives
de l’Hb
Les méthodes chromatographiques modernes détectent
aisément les élévations d’HbF. En cas de persistance hérédi-
taire de l’HbF, la durée de vie des globules rouges n’est pas
affectée et les taux d’HbA1c obtenus par chromatographie sont
interprétables. Les anticorps utilisés dans les méthodes
immunologiques ne reconnaissent pas les chaînes γ de l’HbF et
mesurent strictement l’HbA1c mais rapporté à l’Hb totale. Les
valeurs d’HbA1c mesurées par méthode immunologique sont
ainsi sous-estimées et ininterprétables.
Les ß-thalassémies sont caractérisées par une augmentation
des taux d’HbF et d’HbA2 circulantes et par une hémolyse
chronique qui croît avec la gravité de la maladie. La mesure de
l’HbA2 n’est en général pas possible par les méthodes chro-
matographiques de dosage de l’HbA1c . La recherche d’une ß-
thalassémie chez un patient issu d’une population à risque peut
s’avérer utile pour interpréter correctement ses taux d’HbA1c .
Lors de l’association d’une HbS avec une ß-thalassémie, la
durée de vie des globules rouges est très diminuée et les taux
d’HbA1c très sous-évalués par rapport à l‘équilibre glycémique
(11).
Modifications post-traductionnelles de l’Hb
 Hb glyquée labile
L’Hb glyquée labile ou pré-A1c est la base de Schiff formée dans
la première étape réversible de la glycation de l’Hb dont la
quantité est fonction de la glycémie récente et non le reflet d’une
glycation cumulative. En raison d’un point isoélectrique proche
de celui de l’HbA1c , elle n’est pas séparée de cette dernière par
les méthodes peu résolutives basées sur la différence de
charge (électrophorèse, CLBP, certaines CLHP). Les coffrets
réactifs sensibles à cette interférence sont commercialisés avec
un agent d’hémolyse qui permet d’éliminer la fraction labile. Les
durées d’incubation préconisées avant analyse doivent être
strictement respectées pour s’affranchir de l’interférence. Les
méthodes de dosage immunologique ou par affinité ne sont pas
sensibles à l’Hb glyquée labile (17).
 Hb carbamylée et insuffisance rénale
L’urée se dissocie spontanément in vivo en ammoniaque et
cyanate. Le cyanate se protone pour former de l’acide
isocyanique qui se fixe sur les groupements aminés des
protéines par carbamylation. La valine N-terminale des chaînes
ß de l’Hb est particulièrement réactive avec l’acide isocyanique,
conduisant à la formation d’Hb carbamylée. In vivo, 1 mmol/L
d’urée est associée à la formation de 0,063 % d’Hb carbamylée
(19). Les patients atteints d’insuffisance rénale sévère peuvent
avoir des taux d’Hb carbamylée de l’ordre de 3 %. Le point
isoélectrique de l’HbA carbamylée est identique à celui de
l’HbA1c et peut potentiellement interférer dans les méthodes
basées sur la différence de charge. La carbamylation in vitro de
l’Hb augmente artificiellement, dans des proportions variables
selon les études (+0,02 % à +1 %), les taux d’HbA1c mesurés
par CLHP tandis que les méthodes immunologiques ne sont pas
affectées (2,3).
De plus, chez les insuffisants rénaux sévères, l’interprétation
des dosages d’HbA1c est rendu délicate par l’existence d’une
anémie et d’une diminution de la durée de vie des globules
rouges en cas d’hémodialyse. Cependant, chez des patients
diabétiques hémodialysés, il semblerait que des taux d’HbA1c
compris entre 6 et 7 % reflètent le contrôle glycémique de la
même façon que chez les sujets non insuffisants rénaux tandis
que des taux supérieurs à 7,5 % surestiment l’hyperglycémie
chronique (10).
 Hb acétylée
In vitro, l’incubation d’Hb normale avec de l’aspirine conduit à la
formation d’Hb acétylée dont le point isoélectrique est proche de
celui de l’HbA1c . L’Hb acétylée est séparée de l’HbA1c par les
techniques modernes de chromatographie et n’interfère pas
avec les techniques immunologiques. De plus, chez des patients
consommant chroniquement jusqu’à 1 g d’aspirine par jour, l’Hb
acétylée reste indétectable (19). L’interférence de l’Hb acétylée,
quelle que soit la méthode de dosage, semble donc peu
probable.
CONCLUSION
Le dosage d’HbA1c pour le suivi du diabète est largement
répandu dans les laboratoires français et les résultats doivent
être interprétés avec prudence en fonction de la méthode
utilisée et du contexte clinico-biologique. Les réactifs actuelle-
ment commercialisés en France sont tous standardisés, ce qui
réduit la variabilité interlaboratoires mais les interférences
analytiques propres à chaque méthode sont souvent sous-
estimées. De plus, les variations physiologiques induites par les
hémoglobinopathies, fréquentes dans certaines populations, et
l’insuffisance rénale, aujourd’hui fréquente chez les diabétiques,
imposent de nombreuses restrictions dans l’interprétation des
résultats d’HbA1c .
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RÉFÉRENCES ABRÉVIATIONS

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