UNIVERSI TE DE LOME ANNEE ACADEMIQUE 2021 - 2022

F A C U L T E DES SCIEN CES DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE

UE : B C H 221 : TP DE B I OC H I MI E METABOLIQUE

RAPPORT DE TRAVA UX PRATIQUES

E XT R T I ET GE CH LE TER L

NOMS PRENOMS N° DE C A R T E PARCOURS

KOMBATE Damate 465345 BPA
KOMBATE Hamenibe 374822 BPA

Chargé de l’UE : Dr A K P A L O
I – INTRODUCTION
Le cholestérol est un type de lipide fabriqué par le foie et présent dans les aliments
que nous consommons tel que l’œuf. Notre organisme est capable non seulement de
le synthétiser, mais aussi de l’assimiler à partir de la nourriture. Notre manipulation
consiste à extraire et à doser le cholestérol du jaune de l’œuf par la réaction de
Lieberman Burchardt qui s’effectue sur un extrait chloroformique auquel on ajoute
de l’anhydride acétique et de l’acide sulfurique. Le but du TP est de déterminer la
masse du cholestérol par gramme de jaune de l’œuf.
I I – M A T E R I E L S E T ME T H ODOL OGI E
◼ Extraction du cholestérol du jaune d’œuf
Avec 4g de jaune d’œuf, nous avons procédé par extraction acétonique suivit de
l’extraction chloroformique. L’extraction chloroformique consiste à prélever environ
15 ml d’acétone que nous avons verser sur le jaune d’œuf, nous l’avons homogénéisé
puis laissé décanté pendant 1 minutes puis nous l’avons filtré à l’aide entonnoir et du
papier Wattman dans un ballon jaugé de 100 ml. Nous avons repris le résidu du
bécher en l’ajoutant encore de l’acétone et répéter l’extraction et la filtration à 5
reprises jusqu’à décoloration complète du jaune d’œuf. Ensuite nous avons complété
le filtrat acétonique avec de l’acétone jusqu’au trait de jauge. Pour l’extraction
chloroformique, nous avons prélevé 20 ml du filtrat homogénéisé que nous avons
chauffé pour évaporer de l’acétone et obtenir un liquide huileux jaune. Sur ce liquide
nous avons ajouté du chloroforme jusqu’à 50 ml dans un ballon jaugé puis nous
sommes passé au dosage de 5 ml de la solution chloroformique.
◼ Préparation de la gamme d’étalonnage
A partir d’une solution de 100 mg % de cholestérol dans le chloroforme nous avons
préparé par dilution notre gamme d’étalonnage de solution à 5 mg %, 10 mg %, 15
mg %, 20 mg % et 25 mg % dans 5 tubes ; un tube témoin (T 0 ) et deux tubes
contenant respectivement des solution inconnues X et J selon le tableau suivant :
𝐶 𝑓 𝑉𝑓
Le volume de l’étalon se calcul comme suit : C i V i = C f V f Vi =
𝑖

Avec C i = 100 mg% ; V f = 5ml ; C f = concentration pour chaque tube

Tubes T0 T5 T 10 T 15 T 20 T 25
Volume de la solution mère (ml) 0 0,25 0,50 0,75 1 1,25
Volume du chloroforme (ml) 5 4,75 4,50 4,25 4 3,75
Volume final (ml) 5 5 5 5 5 5
Dans chaque tube nous avons ajouté 2 ml d’anhydride acétique, puis 5 gouttes
d’acide acétique concentré. Ensuite nous avons homogénéisé le contenu de chaque
tube et laissé reposer 30 minutes à l’obscurité et en fin nous sommes passé à la lecture
des densités optiques à 680 nm.
I I I – R E S UL T A T S
Après ajout de l’acide sulfurique, nous avons observé une coloration verte qui
s’intensifie du tube T5 au tube T 25 et dans les tube X et J à l’exception du témoin T 0 .
Les résultats de la lecture des densités optiques sont consignés dans le tableau
suivant :
Tubes T0 T5 T 10 T 15 T 20 T 25 X J
Densité Optique (680 nm) 0,108 0,220 0,312 0,472 0,588 0,424 0,382

A partir des densités optiques nous avons tracé la courbe d’étalonnage (confère
papier millimétré)
Par projection graphique sur la courbe étalon des densités optiques des solution
inconnues X et J, nous obtenu leurs concentrations qui sont consignées dans le
tableau ci-après :
Tubes X1 J
Concentrations (mg%) 18,00 16,20

I V - DISCUSSION
Les lipides du jaune d’œuf se présentent sous forme liés à des protéines
(lipoprotéines), soit sous forme libre. L’acétone utilisé lors de l’extraction a permis
de séparer les lipides des protéines.
Les solutions placées à l’obscurité permettent d’éviter l’accélération de la réaction
qui entraîne la destruction du cholestérol par la lumière. En présence de la lumière,
la structure chimique du noyau stérol se transforme en stéroïde aromatique lesquels
sont dépourvus de couleur verte.
L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration du cholestérol dans
chaque tube ; plus la solution est concentrée, plus la coloration devient intense.
L’ajout de l’anhydride acétique permet de protéger le groupement hydroxyle du
cholestérol et favorise la formation de l’acide acétique par déshydratation. L’acide
 sulfurique concentré ajouté, conduit à la formation d’acide sulfonique
(cholestahexsaène) par la réaction de désaturation et de sulfations du cholestérol,
responsable de la coloration verte et du dégagement de dihydrogène suivant la
réaction de Lieberman Burchardt que voici :

+ + H2SO4 +2 + 5 H2

Acide Acide sulfonique holestahexaèn

Cholestérol Anhydride Acide acétique
sulfurique (couleur verte)
acétique

◼ Calcul de la masse de cholestérol du jaune d’œuf

- Dans 5 ml d’extrait chloroformique
m=C xV avec V = 5 ml et C = 16,20 mg % m = 16,20x5 m = 81 mg

- Dans 100 ml d’extrait acétonique

m’ = m x 5 m’ = 81 x 5 m’ = 405 mg
- Dans 1 g de jaune d’œuf
4g 405
1𝑔 𝑥 405𝑚𝑔
1g m‘‘ m‘‘ = m‘‘ = 101,21 mg

V – CONCLUSION
Cette manipulation nous a permis d’extraire et de doser le cholestérol par la
réaction de Lieberman Burchardt dans un premier temps et de calculer la quantité de
cholestérol contenu 1g de jaune d’œuf. A partir de ses données nous pouvons estimer
en moyenne la quantité de cholestérol alimentaire nécessaire à l’homme au quotidien.
Un œuf contenant en moyen 20 g de jaune d’œuf et que 1g contenant 101,21 mg de
cholestérol, nous pouvons estimer la consommation d’un œuf tous les 72h est
suffisant pour l’apport quotidien en cholestérol alimentaire pour un individu.