INTRODUCTION

Le cholestérol est un lipide appartenant à la famille des stérols, spécifiquement

retrouvé chez les eucaryotes. Il est composé d'un noyau stéroïde (quatre cycles
carbonés A, B, C et D, de 6 atomes de carbones pour les trois premiers et de 5
atomes de carbone pour le cycle D). Il porte un groupe alcool (-OH) sur le
troisième carbone, auquel un acide gras peut être estérifié (ester de cholestérol) et
joue un rôle central dans de nombreux processus biochimiques. Notre
manipulation a consisté à l’extraction du cholestérol du jaune d’œuf de poule et à
son dosage par la réaction de LIEBERMAN BURCHARDT qui s’effectue dans un
extrait chloroformique auquel on ajoute de l’anhydride et de l’acide sulfurique.

MATERIELS ET METHODES
Nous avons pesé 4 g de jaune d’œuf que nous avons mis dans un petit bécher.
Nous avons ajouté un volume d’acétone, laissé décanter puis nous avons filtré à
l’aide d’un papier Whatman dans un ballon jaugé de 100 ml. Nous avons repris le
résidu du bécher par l’acétone, puis répété l’extraction et la filtration 5 fois jusqu’à
décoloration de la lécithine. Nous avons complété le filtrat avec de l’acétone
jusqu’au trait de jauge pour obtenir 100 ml de filtrat cétonique, prélevé 20 ml que
nous avons fait chauffé pour évaporer l’acétone. Nous avons obtenu un liquide
huileux jaune (Cholestérol à 99%) qui fut repris avec du chloroforme et amené à
50 ml dans un ballon jaugé. Nous avons prélevé 5 ml de cette solution
chloroformique pour le dosage, et ce avec l’aide de l’assistance.

A partir de la solution mère de 100 mg % de cholestérol dans le chloroforme, nous

avons préparé par dilution la gamme suivante :

10 mg 15 mg 20 mg 25 mg
Tubes Témoin 5 mg %
% % % %
Solution mère à 100
0 0,25 0,50 0,75 1 1,25
mg % (ml)
Volume de
5 4,75 4,50 4,25 4 3,75
Chloroforme (ml)
Volume total (ml) 5 5 5 5 5 5

Nous avons eu en plus de ces 6 tubes, deux autres tubes dont l’un contenait une
solution inconnue (X1) et l’autre l’extrait de jaune d’œuf (J). Nous avons ajouté
ensuite 2 ml d’anhydride acétique et 5 gouttes d’acide sulfurique à chaque tube
puis les avons homogénéise en tapotant. Après 30 minutes à l’obscurité, nous
somme passé à la lecture des densités optiques (DO) au spectrophotomètre à 680
nm.

RESULTATS
 Après l’ajout de l’acide sulfurique, on observe l’apparition de coloration verte dans
les tubes sauf le témoin qui reste incolore. L’intensité de la coloration croit du tube
5 mg % au tube 25mg%. De même, la coloration du tube J est plus intense que
celle du tube X1. Les valeurs des DO sont consignées dans le tableau suivant :

Tubes et Témoin
concentration (0) 5 10 15 20 25 X1 J
(mg %)
Densités
0 0,117 0,224 0,338 0,459 0,562 0,410 0,473
optiques

La courbe d’étalonnage des densités optiques en fonction de la concentration : <<La

courbe d’étalonnage est construite sur la page agrafée page 4>>
Par projection des valeurs des DO des solutions inconnues sur la courbe d’étalonnage, les
valeurs des concentrations sont : [X1] = 18,2 mg % et [JO] = 20,9 mg %
Connaissant la concentration en cholestérol de JO dans 5ml donc celle de JO dans les 50ml
chloroformique et 20ml est égale à 20,9 mg% : [JO] 5ml = [JO] 50ml = [JO] 20ml =
20,9mg%
 Calcul de la masse du cholestérol dans les 5ml de solution chloroformique (JO).
Soit Cm= la concentration massique.
Cm = m = Cm x V
AN : m = 20,9 x 5 m = 104,5mg
La masse du cholestérol dans 5ml est égale à celle contenue dans 20ml de solution
acétonique et 50ml de solution chloroformique : m = 104,5mg
 La masse du cholestérol contenue dans les 100ml de solution de cholestérol
chloroformique (M) :
M = 5 x masse dans 20 ml
AN : M = 5 x 104,5 M = 522,5mg
 La masse du cholestérol contenue dans 1g de jaune d’œuf (m’)
La masse de cholestérol contenue dans 100ml est égale à la masse du cholestérol contenue
dans 4g de jaune d’œuf : M = masse dans 4g de jaune d’œuf = 522,5 mg.

4g 522,5mg m’ =
1g ? m’ m’ = 130,6mg

DISCUSSION
L’acétone utilisée a servi à extraire en séparant les lipides des protéines (car le cholestérol
contenu dans le jaune d’œuf est lié aux protéines qui sont des lipoprotéines) ce qui a entrainé
l’eau, les matières grasses et le cholestérol solubles laissant la lécithine et la céphaline
insolubles dans l’acétone. Le chloroforme a servi à dissoudre le cholestérol et à le rendre
dosable.
L’Anhydride acétique ajouté a permis de protéger le groupement hydroxyle du cholestérol et
a favorisé la formation de deux molécules d’acide acétique par déshydratation. L’acide
sulfurique, lui a conduit à la formation d’un composé sulfonique (cholestahexaène) par la
réaction de désaturation et de sulfations du cholestérol, responsable de la coloration verte et
du dégagement de dihydrogène. C’est la réaction de LIEBERMANN BURCHARDT qui
s’effectue selon l’équation bilan suivante :

+ + 5 H2
+ H2SO4 +2
Cholestérol Anhydride Acide Acide sulfonique Acide acétique
Acétique sulfurique cholestahexaène
(Couleur verte)
L’intensité de coloration verte est proportionnelle à la concentration du cholestérol
contenue dans chaque tube. Les solutions sont placées à l’obscurité pour éviter
l’accélération de la réaction qui entrainerait la destruction du cholestérol par la lumière,
étant donné qu’en présence de la lumière, la structure chimique du noyau du cholestérol
se transforme en un compose aromatiques dépourvus de couleur verte.

CONCLUSION

Cette manipulation basée sur la réaction de LIEBERMAN BURCHARDT nous a

permis de faire l’extraction du cholestérol présent dans le jaune d’œuf, de remarquer les
différents aspects de cet opération ; de procédé au dosage de ce cholestérol extrait, de
déterminer sa concentration grâce à une courbe d’étalonnage tracé avec les valeurs des
densités optiques obtenues à 680 nm