TD

LES MILIEUX DE CULTURE

Mm BOURIOUNE-BOUMAZA S
M1 PCPC 2021-2022
1-Rappel sur les besoins nutritionnels des
microorganismes

Les microorganismes

substances minérales substances organiques

Synthèse des des

constituants cellulaires

Multiplication des microrganismes

Les microorganismes trouvent dans leur
environnement, qui’il soit naturel ou artificiel,
des :

-Aliments constitutifs (eau, C, N, Minnéraux)

-Sources d’NRG
-Nutriments spécifiques (facteurs de
croissance)

Ces apports doivent etre fournis dans des

conditions physicochimiques particulières et
adaptées à l’espèce consernée (T°,
oxygénation, pression osmotique, humidité, ou
activité de l’eau)
1-1-Les besoins élémentaires
A- source d’énergie : (en fonction de la source ou
de la nature de l’énergie, on distingue des
microorganismes :

Photolithotrophes (sources
Phototrophes (NRG des d’électrons d’origine minérale)
radiations lumineuses
et solaires) Photoorganotrophes (sources
d’électrons d’origine
organique)
chimiolithotrophes (sources
chimiotrophes (NRG de d’électrons d’origine minérale)
l’oxydation des produits
chimiques) chimioorganotrophes
(sources d’électrons d’origine
organique)
Il existe aussi des microorganismes
PARATROPHES tels que les chlamydies et les
rickettsies qui puisent leur NRG en parasitant
un HOTE.
B- source de carbone :

c’est le constituant majoritaire dans la

composition des cellules microbiennes (45 à 50
%). On distingue les microorganismes :

- Autotrophes : utilisent le C inorganique contenu

dans le CO2.

- Hétérotrophes : ce sont les plus fréquents car

utilisent le carbone organique provenant notamment
des glucides (=source d’NRG).
C- source d’azote : élément indisponsable pour
la synthèse des protéines (10 à 15%du poids
sec).

Il peut etre d’origine minérale (N2 atmosphérique

ou moléculaire, nitrates et nitrites) ou organique
(groupement aminé des composés azotés
comme les acides aminés ou les protéines).
D- Les éléments minéraux:

comme le soufre et le phosphore.

Le phosphore est important pour la synthèse des

acides nucléiques, des phospholipides
membranaires et des molécules d’ATP.

Alors que le soufre est important pour la

synthèse des acides aminés soufrés et dans la
constitution des protéines (ponts S-S).
D’autres éléments minéraux sont nécéssaires à
de faibles concentrations = les microéléments et
oligoéléments.

Ils peuvent avoir un role dans l’équilibre

physicochimique de la cellule (Na, K, Mg, Cl),
dans la constitution des enzymes, ou encore de
cofacteurs ou d’activateurs enzymatiques).
1-2-Les besoins spécifiques - facteurs de
croissance
Le Facteur de croissance = substance organique
indisponsable à la croissance et que le
microorganisme ne peut pas synthétiser.
Les Facteurs de croissance se caractérisent par :
1- Leur spécificité de structure par rapport à
l’espèce.

Exemple : Proteus vulgaris

Bonne structure 2 Structures inefficaces

de nicotinamide de nicotinamide
2- Le fait qu’il agissent à de très faibles
concentrations
3- Leurs natures diverses : acides aminés
indisponsables à la synthèse protéique (besoins
de l’ordre de 25mg/l); bases puriques et
pyrimidiques pour la synthèse des acides
nucléiques (besoin de l’ordre de 10mg/l);
vitamines qui sont des coenzymes ou des
précurseurs de coenzymes (besoins de l’ordre de
1 à 24 µg/l).
Autres facteurs :

- Le métabolite essentiel : composé organique

strictement nécessaire au developpement du
microorganisme et synthétisé par ce meme
microorganisme.
Autres facteurs :

- Le facteur stimulant : favorise la croissance

microbienne sans pour autant etre
indisponsable à son déclenchement.
Autres facteurs :

- Le facteur de départ : favorise le redémarrage

de la croissance après repiquage.
Les bactéries qui nécessitent la présence d’un
facteur de croissance = AUXOTROPHES.

Les bactéries qui ne nécessitent pas la présence

d’un facteur de croissance = PROTOTROPHES.
2-Les milieux se culture
2-1-Généralités

Les milieux de cutlture permettent :

- Le développement,
- L’isolement,
- La sélection,
- La conservation des microorganismes.

La composition des milieux de cutlture varie

suivant l’espèce et le but.
Les milieux de cutlture peuvent etre :

- Liquide :
Sont des solutions d’éléments nutritifs et de
minéraux appelés bouillons de culture.

La croissance s’y traduit par un changement de

couleur ou trouble du milieu qui se positionne
différemment suivant le type respiratoire de
l’espèce.

Anaérobies stricts aérobies stricts Aéro-anaérobies

- Solide :

Contenant, en plus de ce q’a été cité, de l’agar-

agar qui est un polysacaride complexe extrait
d’une algue du genre gelideum. Il est à ajouté à
une concentration variant de 0,5 à 4% selon la
consistance désirée. il n’est pas dégradé par les
microorganismes.

Un milieu gélosé fond à 100°C, reste en surfusion

jusqu’à 40°C et se resolidifie à température
ambiante.
Un milieu solide peut s’utiliser de différentes
manières :

- En gélose inclinée ou semi-inclinée

- En culot, en tube

- En couche mince sur boite de Pétri (12 à 15ml)

Le développement microbien sur milieu gélosé
peut se présenter suivant le genre microbien et
l’intensité de l’inoculation sous forme d’une
nappe confluente ou de colonies distinctes dont
l’aspect, la dimension, le contour, la couleur.....
Sont des critères caractérisant une espèce.
 2-2- composition des milieux de culture
A – M. Naturels (lait, eau, terre) ou
- M. complexes ou empiriques (bouillon nutritif)

sont des milieux riches, contenant des produits naturels

et/ou des extraits de tissus animaux ou végétaux tels que :
 L’extrait de viande : riche en glucides, composés azotés,
vitamines et sels minéraux

 Peptones : contenant des polypeptides et des

oligopeptides résultant d’une digestion enzymatique des
viandes, des caséines ou de gélatine. Ex : Peptones
Trypsique, papainique...

 l’extrait de levure : source d’acides aminés et de

vitamines.
B- M. Synthétiques (milieu de Fouad)

Sont des solutions de composés chimiques bien définis

et de concentration très présise.

La délicatesse de leur préparation et leur cout élevé en

font des milieux utilisés dans l’évaluation des besoins
nutritionnels des bactéries ou pour le dosage des
facteurs de croissance.
C- M. Semi-synthétiques (milieu de Drigalski)

Contiennent aussi bien des composants connus de

concentrations précises que des composants mal définis.
2-3- utilisation des milieux de culture
2-3-1- milieux d’isolement et d’identification
- Les milieux d’isolement sont généralement solides, de
composition simple et permettant le développement de
nombreuses espèces.
Ex : la gélose nutritive.

- Les milieux d’identification sont le plus souvent liquides

et contiennent des composants permettant de mettre en
évidence une propriété caractéristique de l’espèce
étudiée relative par exemple à la fermentation des sucres,
la production de gaz, la formation d’indole....
2-3-2- milieux d’enrichissement
Sont des milieux qui favorisent la multiplication du germe
recherché au détriment des autres et ce soit par la
présence d’agents inhibiteur, soit par l’action d’agents
réduisant sensiblement la vitesse spécifique de la
croissance.

Ex : milieu de Muller-Kaufmann pour la recherche des

salmonelles en coproculture.
2-3-3- milieux sélectifs
Ils permettent la croissance de la bactérie recherchée
avec inhibition des autres germes. Ils contiennent donc
des agents sélectifs ou des agents inhibiteurs tels que
les colorants (vert brillant, cristal violet), des sels
bilaires, des antibiotiques ou parfois simplement la
concentration d’une substance.

Ex : milieu de Brigalski (l’inhibiteur est le cristal violet).

milieu de Chapman (concentration du NaCl = 75g/l.
2-4- préparation du milieu de culture

- Lire la formule et calculer les mesures à peser pour le

volume final de milieu désiré
- Peser les différents constituants
- Dissoudre les différents constituants dans l’ordre et
dans un peu d’eau distillée.
- Le chauffage si nécessaire
- Ajuster l’eau au volume final désiré, puis le pH avec
une solution d’acide ou de base.
- Répartir en tubes ou en flacons fermés avec du coton
cardé ou des capsules métalliques (bouchons à vis).
- Stériliser par autoclavage ou par filtration selon la
sensibilité des composants du milieu.