Milieux de culture et

contrôle de la population microbienne

I- Milieu de culture
Milieu de culture : support qui permet la culture de cellules, de bactéries,
de levures, de moisissures afin de permettre leur étude.
Les cellules trouvent dans ce milieu les composants indispensables pour
leur multiplication en grand nombre et rapidement,
Parfois on trouve des éléments qui permettront de privilégier un genre de
bactérie ou une famille.
Donc, selon le but de la culture, il est possible de placer les microorganismes
dans des conditions optimales, ou défavorables
Besoins élémentaires :
- Source de carbone et d'énergie.
- Source d'azote et soufre
- Eléments minéraux : calcium, magnésium, phosphore, potassium, fer…
- Oligo-éléments : sels de Cu, Zn, Co, Ni, B, Ti…
- Eau : on utilise l'eau distillée (stérile)
- Tampon pH : permet de maintenir un pH correct voire optimum
pour éviter les variations importantes du pH
- Température
On classe les milieux de culture :
I . Selon la consistance :
1- Milieu liquide : ne contenant pas l’agar agar
Ex : bouillon nutritif BN, Bouillon trypticase soja (TSB), Brain-Heart Infusion
Broth BHIB ect… (la croissance se traduit par un trouble ou des dépôts et
des voiles superficiels)
2- Milieu solide : milieu liquide en lui ajoutant un agent gélifiant
Le gélifiant le plus utilisé est l’agar-agar ou gélose : il a la propriété de passer à
l'état :
- Liquide par ébullition
- Solide à une température inférieure de 45°C.
D’autre part, très peu de micro-organismes sont capables d’hydrolyser l’agar. Les
milieux solides contenant généralement 1.5-2% (15-20 g/l) d’agar agar;
ils peuvent s’utiliser de plusieurs façons :
- Gélose inclinée en tubes à essai, culot en tube droit
- couche mince en boites de pétri.
Agar-agar
Additif alimentaire gélifiant E406
extraite de certaines algues rouges (famille des rhodophycées).
Elle est contenue dans la paroi cellulaire de ces végétaux aquatiques
En contact de l’eau, il se gonfle et libère ses propriétés visqueuses
Milieu liquide
Tous les composants sans agar-agar comme les bouillons
Milieu solide
Tous les composants plus agar-agar comme les géloses
Milieu de culture liquide en agitation
Milieu solide contenant des colonies
II . Selon leur composition :
1- Milieux complexes ou empiriques (naturels) :
De composition complexe, mal définie, ils peuvent être :
- d'origine animale : lait, sérum, bouillon et gélose nutritive, gélatine, etc.
- d’origine végétale : peptone de soja, pomme de terre, etc. comme :
Chocolat, Gélose au sang, Gassner, Tryptycase soja, Gélose au, etc.
Milieu cœur-cervelle
Contient : l'eau, l'agar-agar, l'hydrolysat de cœur cervelle sans que l'on en
connaisse les aspects qualitatifs et quantitatifs.
Utilisé uniquement pour la croissance des bactéries.
Il n'a pas d'effet sélectif.
Embryon de poulet (œuf de poule embryonné)
Utilisé (depuis 1930) pour les recherches sur :
- virus, comme la variole, l'herpès, la grippe, les oreillons, la rage, etc. 
- bactéries intracellulaires
L'agent à multiplier est inoculé dans les membranes amniotique ou allantoïque.
2 - Milieux synthétiques ou définis (minimum) :
Tous les composants sont connus qualitativement et quantitativement.
Sont surtout utilisés pour l’étude des bactéries autotrophes (non exigeantes) ou
pour étudier les besoins nutritifs d’un germe.
Ils sont rarement utilisés en routine à l’exception de quelques-uns :
- Citrate de Simons,
- Citrate de Christensen,
- Urée-Tryptophane
- Composition on trouve source de :
- Carbone et d'énergie, généralement le glucose.
- Potassium et de phosphore: K2HPO4
- Azote et de soufre : (NH4)2SO4
- Magnésium : MgCl2
- Calcium : CaCl2
- Fer : citrate de fer (pour maintenir le fer en solution)
- Oligo-éléments : sels de Cu, Zn, Co, Ni, B, Ti
- Eau, indispensable à toute forme de vie: on utilise l'eau distillée (stérile)
- Tampon pH : permet de maintenir un pH correct voire optimum :
(KH2PO4)

En l'absence de l'un de ces composants, les bactéries ne se développent pas, car

elles ne peuvent pas synthétiser ces produits
III - Selon leur utilisation :
En général on distingue :
1- Milieux ordinaire (de-base ou usuels non sélectifs) :
- Permet la culture des bactéries qui n'ont pas d'exigence nutritive particulière,

(bactéries non exigeantes)

- ne contient aucune molécule inhibitrice.
- de préparation assez simple et généralement peu coûteuse,
- Contient une base nutritive constituée de molécules azotées (acides aminés,
molécules organiques diverses…) provenant de l’hydrolyse de produit
d’origine vivante (animale, végétale, mycélienne) comme les peptones, les
extraits de viande ou de levure
Ex : Gélose nutritive et Bouillon nutritif,
Gélose et Bouillon Muller-Hinton
Eau peptonée
2- Milieux d'isolement
Suivant les techniques envisagées et les bactéries en cause on trouvent :
Milieux enrichis (non sélectifs)
Obtenus en incorporant à un milieu de base adéquat des liquides ou suspensions
riches en molécules organiques diverses (sang, sérum, jaune d’œuf liquide
d’ascite, extrait globulaire, suppléments polyvitaminiques… )
La qualité nutritive peut être améliorée par dénaturation thermique des
constituants, en particulier pour le sang.
Ils permettent la pousse de nombreux germes exigeants ou très exigeants comme :
- Géloses au sang frais ou au sang cuit,
- Gélose chocolat.
Ex : Géloses au sang frais et chocolat, (addition de sang au milieu de base peut
apporter des facteurs de croissance nécessaire au microorganisme étudié)
Milieux sélectifs
Permet uniquement la culture de certains genres de micro-organismes.
Pour cela on ajoute des éléments qui inhibent la croissance des micro-organismes
indésirables comme :
- chlorure de sodium à forte concentration,
- thiosulfate de sodium,
- cristal violet...
Les éléments ajoutés sont sélectionnés selon les caractéristiques du microorganisme
recherché.
Ces milieux sont utilisés pour l'analyse d'un prélèvement polybactérien.
Exemples :
- Milieu S-S : ne permet la croissance que des Salmonelles et des Shigella 
- Milieu de Sabouraud : permet la pousse des champignons 
- Gélose Kanamycine, Vancomycine, (Kana-Vanco" ou KV) : empêche la pousse
des bactéries à Gram+ (action de la vancomycine) et de la plupart des
entérobactéries (action de la Kanamycine).
Sur ce milieu, poussent préférentiellement des bactéries anaérobies strictes. 
Milieux différentiels: (indicateur)
Permet de distinguer deux types de microorganismes se développant dans un
même milieu.
Ce type de milieu met en évidence certaines caractéristiques biochimiques des
microorganismes (principalement l'aptitude à dégrader un substrat) en présence
d'indicateur(s) de la réaction chimique qui se colore comme :
- Rouge neutre, 
- Rouge de phénol,
- Eosine
- Bleu de méthylène
Exemple
- Géloses CLED et BCP et qui différencient la dégradation du lactose, ainsi que
la dénomination indirecte d’E.coli qui sont des entérobactéries hyper-résistantes.
- Gélose Éosine Bleu de Méthylène (EMB), qui différencie la fermentation
du lactose de celle du saccharose
- Gélose MacConkey (MCK), qui différencie la fermentation du lactose.
De plus, cette gélose est sélective (voir plus haut) dans la mesure où elle ne
permet que la croissance;des bacilles GRAM négatif.
La gélose Drigalski possède les mêmes propriétés.
- Gélose Chapman (MSA), milieu sélectif des staphylocoques qui différencie
la fermentation du mannitol permettant une orientation entre autres vers
Staphylococcus aureus.
- Géloses SS, XLD, DCL, TCBS sont aussi des milieux différentiels
couramment utilisés.
- Milieu viande foie : semi-solide, utilisé dans longs tubes fins « tube de
prévôt » pour la détermination du type respiratoire des microorganismes,
mais aussi pour la culture de germes anaérobies stricts telles que les
Clostridium).
- Mannitol-Mobilité-Nitrate : semi-solide, caractérisé par l'utilisation de
mannitol et de Nitrate et permet la mise en évidence (ou non) de la
mobilité bactérienne.
Milieux chromogènes ou discriminants (identification)
Peut être sélectif ou non.
Trop utilisés pour la mise en évidence d'activités enzymatiques par l'apparition
d'une coloration spécifique
Principe : la dégradation par l'enzyme d'un substrat dit chromogène produit
une molécule colorée c’est le chromophore qui est directement lisible.
Exemple
- Gélose MRSA-ID : permet de détecter directement les souches de
Staphylococccus aureus résistantes à la méticilline.
- Milieu SM2 : sélectif des bactéries à Gram- qui permet la mise en
évidence de Salmonella dans les selles grâce à la révélation d'une activité
estérase spécifique des salmonelles
- Milieu CAN2 : sélectif des levures qui permet la mise en évidence de Candida
albicans par la mise en évidence de l'activité hexosaminidase.
- Milieu CPS : adapté au diagnostic des infections urinaires, par la mise en
évidence d'une activité β-glucuronidase, qui permet l’identification directe
d’Escherichia coli 
 Principaux ingrédients des milieux de cultures
Constituants Caractéristiques
Extraits de A partir de tissus animaux sélectionnés (à froid :
viandes. macération; à chaud: infusion, extraits de viandes).
Peptone Résultats d’action d’enzymes protéolytiques
(pancréatine, pepsine, trypsine, papaïne) sur des
matières protéiques (viande, caséine, soja,
gélatine…)
Fonction
Source de protéines peu dégradées,
glucides, sels minéraux, vitamines
hydrosoluble. (vitamine B).
Source d‘acides aminés et des
oligopeptides.

Hydrolysats Action d’acide chlorhydriques sur des Source d’acides aminés et des ions
protéines. minéraux.
Agar-agar ou Extrait d’algue rouge. Mélange de 2 groupes de Solidifier cultures. les milieux de
gélose polysaccharides (agarose 70% et agaropectine cultures
30%). A 90°C se dissout dans l’eau, à 45°C reste en
surfusion et à basse température elle forme un gel
transparent +/- solide.

Produits Sang, sérum, lait, gélatine, pomme de terre, etc. molécules diverses organiques
biologiques
Base minérale Macroéléments ioniques (Na+ , K+ , Mg2+ , Ca2+ , Apportent l’équilibre électrique,
Cl- , PO4 -2 , SO4 -2 , HCO3 -…). Microéléments l’équilibre osmotique,
ioniques ou oligoéléments (Fe, Co, Ti, Zn, Cu, B, fonctionnement enzymatique.
Se, Mo, V, W, Mn.)
Eau distillée.
IV/ CONDITIONS DE CULTURE
Solution tampon est une solution qui maintient approximativement le même pH
malgré l'addition de petites quantités d'un acide ou d'une base, ou d’une dilution
On utilise un couple acido/basique dont le pKa est le plus proche du pH du tampon.
Ex : pour un tampon de pH neutre, on peut utiliser un mélange de
NaH2PO4 et Na2HPO4 ou K2HPO4 et KH2PO4

Contrôle du pH des milieux de culture :

Le (K2HPO4 et KH2PO4) en solution équimoléculaire est le plus utilisé pH=6,8
• Si on ajoute un acide fort, la réaction est :
KH2PO4 + HCl KH2PO4 + KCl
• Si on ajoute une base forte, la réaction est :
KH2PO4 + KOH K2HPO4 + H2O
L’effet tampon est satisfaisant entre pH 6,4 et 7,2
Carbonates alcalins :
CO3- - → HCO3 - → H2CO3 → CO2 + H2O
H+ H+
Les carbonates neutralisent les acides au fur et à mesure de leur formation.
Comment observer les bactéries?
- microscopie optique (G 1000 -1500 fois)
- microscopie électronique (G >10 000 fois)

Microscopie optique
1. Etat frais

E. coli
2.Fixation
+ Coloration
Bleu de méthylène

bactéries d’un frottis de yaourt

Encre de chine

Acinetobacter (cocci isolés ou en chaîne entourés d’une capsule )

 Microscopie électronique

Microscopie électronique à balayage Microscopie électronique à transmission

E. coli x30 000 E. coli
 Identification de bactéries

Echantillon Isolement Identification

- Biologique (sang, urines...) enrichissement (culture pure)
- Eaux
- Aliments
- Environnement

Classification d’après des critères fondamentaux :

- Forme et taille des cellules
- Coloration GRAM
- Quelques caractères biochimiques simples d’orientation
- Mode respiratoire
- Mobilité
- Morphologie des colonies
caractères physiologiques et métaboliques
caractéristiques moléculaires :
- composition en bases des AN (GC%)
- amplification-séquençage gène codant ARN16S
- comparaison de protéines (séquençage, Ac)
Forme et taille de la cellule
Coloration GRAM
Morphologie des colonies
 Quelques caractères biochimiques simples d’orientation
Escherichia coli

Klebsiella pneumoniae

Etude du métabolisme glucidique des deux bacteries : E coli (en haut) et K pneumoniae (en bas)
- Si la bactérie peut métaboliser le glucide présent, la cupule devient jaune
- Si elle ne peut pas utiliser le sucre testé comme source de carbone, la cupule reste bleue
Klebsiella pneumoniae est capable de métaboliser l’ensemble des huit glucides :
- Mannitol, Inositol, Sorbitol, Rhamnose, Saccharose, Melibiose, Amygdaline et Arabinose.
Escherichia coli ne peut en utiliser que quatre :
- Mannitol, Sorbitol, Rhamnose et Melibiose
2- milieux différentiels : distinction de différents groupes de bactéries
(caractéristiques biologiques) = Identification
Mettre en évidence des propriétés biochimiques d'une bactérie pour commencer à
l'identifier : étude du métabolisme respiratoire, des glucides, des protéines, des lipides....
Milieu Mac Conkey
Utilisation du Lactose
(indicateur coloré : rouge neutre)

Lac+ (colonies rouges) Lac- (colonies incolores)

Effet de l’oxygène : mode respiratoire
TECHNIQUES TRADITIONNELLES D'IDENTIFICATION
Pour identifier une bactérie dans un prélèvement il faut :
- Avoir une culture pure (l'isoler des autres germes éventuellement
présents dans le prélèvement),
- Détermination de certains de ses caractères morphologiques, biochimiques,
antigéniques et culturaux.
Les techniques traditionnelles d'identification des bactéries souffrent de
certaines limitations :
- existence de bactéries non cultivables de façon traditionnelle au laboratoire
- importants délais (parfois plusieurs jours) imposés par la culture des
microorganismes 
- nécessité d'un personnel spécialisé, elles sont difficilement automatisables.
Dans certains cas elles sont avantageusement remplacées et/ou complétées
par la PCR
PCR dans le diagnostic bactériologique
La technique de PCR :
- Très sensible
- Très rapide
- Automatisable
- Démarche orientée
- Dans certains cas s'applique directement à l'échantillon à analyser,
supprimant ainsi les délais de mise en culture et les problèmes liés aux
germes non cultivables très spécifique
- Disponible pour le moment vers un nombre restreint de microorganismes
Orientation final
Consiste à donner la position taxonomique de la bactérie.
Un médecin s'intéresse plus au potentiel pathogène d'une bactérie ( facteurs de
virulences, résistance à des antibiotiques).
Ces informations, leur fiabilité ainsi que le délai nécessaire pour les obtenir sont
aussi des critères importants pour évaluer.
 EXERCICE TD1

Exercice
I/ Proteus vulgaris est repiqué sur différents milieux de culture liquides
M1, M2, M3 et M4 dont la composition est la suivante :

Ingrédients communs
NH4CL-------------------- 1 g
K2HPO4 ------------------ 1 g
MgSO4 7H2O ----------- 200 mg
FeSO4 7H2O ------------- 10 mg
CaCL2 --------------------- 10 mg
Oligo-éléments ---------- 0,15 mg
Eau ------------------------- 1000 ml
Ingrédients ajoutés
Milieu M1 : aucun
Milieu M2 : glucose (5 g)
Milieu M3 : glucose (5 g), acide nicotinique (0,1 mg)
Milieu M4 : glucose (5 g), extrait de levure (5 g)
Au bout de 24 heures d’incubation, on observe :
- culture sur M3 et M4 mais
- rien sur M1et M2.
1/ A quels types de milieux appartiennent M1, M2, M3 et M4 ?
2/ Précisez le ou les rôle(s) des constituants de ces milieux.
3/ Donnez la définition, la nature chimique et les propriétés des
substances jouant le même rôle que l’acide nicotinique.
4/ Quel est le rôle joué par l’extrait de levure dans M4 ?
CORRECTION EXERCICE I

I/-1 M1, M2 et M3 sont des milieux synthétiques

M4 est un milieu semi-synthétique
-2 NH4Cl : source d’azote  pour synthétiser les protéines
K2HPO4………….CACL2 : sont des sels minéraux
Soufre est présent dans certains AA et donc dans les protéines sous formes
de groupements thiols (-SH)
Phosphore fait partie des : acides nucléiques, nombreuses coenzymes et ATP.
Sodium, potassium, magnésium et chlore jouent un rôle dans l’équilibre
physico-chimique de la cellule.
Oligo-éléments : Jouent un rôle de cofacteurs ou d’activateurs
enzymatiques.
Glucose  : Source de carbone et source d’énergie.
Acide nicotinique : Facteur de croissance (besoins spécifiques)
Extrait de levure : facteurs d’enrichissement des milieux de cultures
3- Définition : Substance organique indispensable à la croissance
bactérienne et que la bactérie est incapable de la synthétisé.
Nature chimique : Acides aminés, bases puriques et pyrimidiques ou
vitamines.
Propriétés : action à des concentrations minimes et étroite spécificité

4- Rôle de l’extrait de levure : Apport de l’acide nicotinique ou facteur de

croissance.
 Techniques de stérilisation et
agents antimicrobiennes

I - Définitions
Un antimicrobien est une famille de substances qui :
- tuent (microbicide)
- ralentissent (microbiostatique) la croissance des microbes tels que :
- Bactéries (activité antibactérienne),
- Mycètes (activité antimycosique),
- Virus (activité antivirale), ou
- Parasites (activité antiparasitaire).
 Techniques de stérilisation et
agents antimicrobiennes

Les microorganismes peuvent causer des pertes économiques énormes dans divers domaines comme
l’agro-alimentaire et la santé.
D’où nécessité de contrôler leur développement.
Moyens  :
- Agents de destruction
- Agents microbiostatiques (arrête la multiplication des microorganismes) :
le froid, la dessiccation, la pression osmotique et certains produits chimiques
- Elimination des microorganismes du milieu où ils se trouvent  :
- filtration
- centrifugation
Modes d’action par:
- Altération irréversible de la membrane cytoplasmique des microorganismes
- Inhibition de certaines enzymes essentielles à la vie de ces derniers
- Dénaturation des protéines et de l’ADN
Sont utilisés (antimicrobiennes) dans :
- Bio-industries pour conserver les produits alimentaires, les cosmétiques
- Désinfection du matériel et des surfaces partout dans les laboratoires,
l’agroalimentaire, le pharmaceutique
- Médical pour traiter les plaies, lutter contre les maladies infectieuses
Il existe différents classes d’agents antimicrobiens
- Physiques : températures, rayonnements
- Chimiques : alcool, iode, eau de javel
- Chimiothérapeutique : antibiotiques
 Quelques définitions importantes

Stérilisation Opération visant à éliminer de façon durable, tous les microorganismes

vivants d’un objet ou d’un produit
  Opération au résultat momentané permettant d’éliminer les micro-
Désinfection organismes portés sur des milieux inertes contaminés (surfaces, objets…)
Désinfectant Agent capable de détruire les micro-organismes (ou d’arrêter leur action)
sur une surface inerte
Opération au résultat momentané permettant d’éliminer les micro-
Décontamination organismes au moment où l’on effectue l’opération
Septique Qualificatif d’un milieu contenant des micro-organismes
Aseptique Qualificatif d’un milieu ne contenant pas de micro-organismes
Antiseptique Agent capable de détruire les micro-organismes (ou d’arrêter leur action)
sur un tissu vivant
Asepsie Ensemble de mesures permettant d’empêcher tout apport extérieur de
micro-organismes
Bactéricide Se dit d’un agent antimicrobien qui détruit les bactéries

Fongicide Se dit d’un agent antimicrobien qui détruit les champignons (levures,
moisissures)
Virucide Se dit d’un agent antimicrobien qui détruit les virus
II AGENTS PHYSIQUES
II-1 Températures élevées
II-1-1 Chaleur humide
Détruit les microorganismes par :
- Coagulation de leurs protéines,
- Dégradation de leurs acides nucléiques,
- Détérioration de leurs membranes cellulaires.
L’autoclave
Stérilisation :
Se fait par l’autoclave ou sterilisateur généralement à 121°C pd 15 à 20 min.

Certains milieux ou certaines substances ne peuvent pas supporter un tel

traitement grâce au risque d’altération (thermosensibles) on utilise alors :
Tyndallisation ou stérilisation discontinue :
consiste en une série de 3 pasteurisations de 1h. à 70 - 80°C, séparées par un
intervalle de 24 heures à température ambiante, ce qui permet la germination
et la destruction des spores et donc la destruction de tous les microorganismes,
sans l'emploi d'une température excessive.
Cette méthode est utilisée pour les milieux fragiles contenant sérum, œuf ou
toute substance thermosensible de forte viscosité qui ne peut être stérilisée par
filtration.
Pasteurisation :
Se fait par un pasteurisateur généralement entre 65 et 100°C pd 15 à 30 min
Appliquer à certaines denrées alimentaires (lait, crème, jus, vin …) pour assurer
momentanément leur conservation sans altérer leurs caractères organoleptiques
(couleur, odeur, saveur)
Elle permet l’inactivation des microorganismes pathogènes même les plus
résistants comme Mycobacterim tuberculosis,
On trouve plusieurs types de pasteurisations :
- Pasteurisation basse continue  : à 60-65°C pendant 30 min
- Pasteurisation ultra haute température (UHT) : à140°C quelques sec puis on

refroidit brutalement = appliquée (lait, jus de fruit) pour longue conservation.

Seules quelques spores thermophiles peuvent rester viables;
la conservation au froid ne permet pas leur germination.
- Ebullition peut être considérer comme une forme très courante de pasteurisation
.
II-1-2 Chaleur sèche
Provoque :
- Oxydation des constituants cellulaires
- Dénaturation des protéines
les germes sont plus résistants en milieu déshydraté qu’en milieu
aqueux.
Ex : Poupinel : La stérilisation se fait à :
. 160°C pendant 2h
. 180°C pendant 1h.
II-2 Températures Basses.
Positives
Les températures basses conservent les microorganismes
Réfrigération (0 à 7°C) :
- Conserve des cultures vis a vis de certains microorganismes
- Inhibe la multiplication des microorganismes thermophiles et mésophiles
- Inhibe pas les microorganismes psychrophiles et psychrotrophes.
Les réactions biologiques sont ralenties mais de nombreux mécanismes de
dégradation restent possibles
Négatives
Températures < 0°C
Surgélation – 18°C
II-3 Les radiations
processus qui va venir dénaturer les molécules des micro-organismes et germes
pathogènes présents sur et à l'intérieur des produits pour les stériliser, il est en
fonction du :
- nombre initial de microorganisme
- dose de radiation appliquée.
et dénature :
- acide nucléiques
- protéines
Comme :
- UV (15 à 390 nm)
Les   265 nm sont les plus bactéricides
les lampes germicides de 260 à 270 nm, diminuent les populations dans :
- salles d’opération
- chambre des industries pharmaceutiques, alimentaires, surfaces de travail
Une exposition de 30 à 60 min suffit pour détruire les germes exposés directement.
Leur pénétration est arrêtée par la moindre particule de matière
Restent les plus utilisées malgré leur faible rendement.
II- 4 Pression osmotique
Ultrapression (coûteuse)
- non utilisé en industrie
- utilisée en recherche pour faire éclater les cellules par pression osmotique
élevée : ajout du sel, ajout du sucre.
II.5 Elimination Mécanique :
Filtration :
Procédé de choix pour stériliser les solutions renfermant des substances
thermolabiles (sensible à la température) ne contenant pas de particules
en suspension et de faible viscosité (sérum, certaines vitamines, des huiles,)
Il y a 2 types de filtres :
- Filtres épais
constitués de matières fibreuses où granulaires fixées sur une couche
épaisse contenant des canaux tortueux de faible diamètre,
Les microorganismes sont arrêtés par un piégeage physique et par adsorption.
ils sont formés de :
- terre de diatomées (filtre de Berkefield) ou
- porcelaine mate (filtre de Chamberlain),
- verre fritté (agglomération de particules de verre pour devenir un solide
perméable aux liquides et aux gaz réutilisable et chimiquement résistant)
Plus récemment on a mis au point des membranes filtrantes d’acétate ou
de nitrate de cellulose de porosité graduée variant de 0,01 à 10 m
0,45m  bactéries.
Les plus utilisés en bactériologie  pores de 0,2m
III - AGENTS CHIMIQUES
III - 1 Antiseptiques et Désinfectants Liquides
Désinfectants : utilisés sur les matières inertes (sol, surface de travail, mobilier,
instruments et matériel médical, eau...).
Antiseptiques : utilisés sur les tissus vivants (peau saine, muqueuses et plaies).
1 Antiseptiques (oxydants)
- Eau oxygénée
(principe actif : H2O2 )  nettoyage des plaies
(3% en solution aqueuse, se décompose rapidement en contact des tissus)
Tous les composés susceptibles de donner H2O2 .
Ex : perborate de sodium utilisé en hygiène dentaire
- Dérivés chlorés :
(principe actifs MnO4- et CLO- )
- Eau de javel (hypochlorite de Na : NaClO) = dioxyde de chlore pour
rendre l’eau potable, utiliser pour le traitement des eaux de piscines,
et les eaux polluées …
- soluté de dakin  nettoyage des fils de chirurgie
- Dérivés iodés :
(Principe actif : le diiode I2)
la solution alcoolique iodo-iodurée  désinfection de la peau
- Alcools
Ces agents oxydants oxydent les groupements ― SH libres
des enzymes et les altèrent irréversiblement
Ex  : NaClO + H2O  ClOH + NaOH
↓ ↓
O HCl
oxygène naissant ayant un pouvoir bactéricide très puissant,
oxyde les SH libres des enzymes fongicide pas les spores
Autre halogène
Fluor  prévient la carie dentaire
2- Les alcools
Composés organiques dont l'un des atomes de carbone est lié à un groupe
hydroxyle (-OH).
L’alcool éthylique (Europe) et l’isopropanol (Etats unis)
- Alcool éthylique est un liquide incolore, inflammable et volatil obtenu
par distillation après fermentation de végétaux ou par synthèse dont la
formule chimique est C2H5OH.
Il est le principal ingrédient des boissons alcoolisées
- Alcool isopropylique est le nom commun pour le propan-2-ol,
composé chimique sans couleur et inflammable dont la formule
chimique est C₃H8O. C'est l'un des deux isomères du propanol
Action optimale  70%
Désinfection cutanée et superficielle
Agissent en :
- coagulant les protéines,
- endommagent la membrane cellulaire (car solvants des lipides)
3 Les métaux lourds et leurs sels
Sels (argent, mercure, cuivre, zinc, arsenic etc.) inactivent la cellule :
- en précipitant les enzymes
- en se combinant avec les groupements ―SH
Ils ont une toxicité sur les cellules bactériennes et sur les cellules de l’hôte
- Mercurochrome (Mercryl)  peau, muqueuse
- Nitrate d’argent en solution aqueuse 1% → ophtalmie (inflammation de
l’œil) néonatale du nouveau-né
4 Les phénols et composés phénoliques
Composés chimiques aromatiques, certains phénols ont des fonctions de
défense contre les microbes et champignons chez les végétaux notamment
chez certaines espèces.
Sont toxiques, voire hautement toxiques pour l'homme et d'autres espèces

- Bactéricide, fongicide,
- peu actifs sur les spores et les virus
- Dénaturent les protéines
- endommagent les membranes cellulaires
- Utilisé en hygiène et en médecine
5- Savons et détergents synthétiques

Le savon est un produit liquide ou solide composé de molécules amphiphiles

obtenues par réaction chimique entre un corps gras  et une base forte,
spécifiquement l'hydroxyde de sodium pour le savon ou l'hydroxyde de
potassium pour le savon noir
- Action mécanique
- Hydrosolubles et liposolubles, se fixent sur la membrane lipidique de la
bactérie et les milieux aqueux environnants d’où dénaturation de la
membrane
6- Les colorants
A usage local.
Quelques uns seulement par voie digestive
Ex :
- Bleu de méthylène (colorant et médicament) → peau, muqueuses
- Vert malachite, vert brillant → plaies superficielles
- Violet de méthyle → antiseptique urinaire
7- Les conservateurs alimentaires
- sel, sucre,
- des acides organiques comme :
- a. citrique
- a. acétique
- a. lactique
- a. benzoïque,
- a. salicylique,
- a. sorbique,
- composés phénolés : molécules organiques largement présente dans le règne
végétal. utilisés comme additifs pour les industries agroalimentaires,
pharmaceutiques et cosmétiques
III-2- Stérilisation par les gaz
consiste à exposer des articles à un stérilisant chimique en phase gazeuse d'une
manière contrôlée comme :
- oxyde d'éthylène (OE),
- fomol gazeux,
- peroxyde d’hydrogène
leurs application a un effet létal prédéterminé pour éliminer la contamination
microbienne pouvant être présente avant le traitement et assurer une marge de sécurité.
C’est un procédé élégant permet la stérilisation des :
- Produits instables à la chaleur (xplosifs, corrosifs ou oxydants)
- Locaux (chambres de malades…)
- Objets en plastiques
1 Formaldéhyde
On stérilise :
- matière plastique,
- caoutchouc,
- produits chimiques
2 Ozone O3
Stérilise :
- eau
- détruit les substances qui colorent l’eau ou qui sont
génératrices de mauvais goût
3 Oxyde d’éthylène
- Entre en contact avec divers produits.
- Pouvoir sporicide prononcé
4 β Propiolactone
 composé organique de la famille des lactones. C'est un liquide clair et
incolore, à odeur légèrement sucrée, très soluble dans l'eau et miscible avec
l'éthanol, l'acétone, l'éther
- 25 fois plus actif que le formol,
- 4000 fois plus actif que l’oxyde d’éthylène
- Bactéricide, sporicide, virucide et fongicide.
Son action est pénétrante, son élimination rapide.
Stérilise :
- Objets (matériel chirurgical, catguts, compresse…)
- Stérilisation des milieux de culture
- Désinfection des locaux
5 Essences volatiles (huiles essentielles)
Pouvoir bactéricide ou bactériostatique.
- Essence d’Eucalyptus → antiseptique des voies respiratoires.
- Essence de Girofle → désinfectant et cautérisant en chirurgie dentaire

- Essence de Niaouli → désinfectant des plaies, brûlures, antiseptique

respiratoire
- Essence de thym → antiseptique intestinal et respiratoire
- Essence de santal → antiseptique des voies urinaires
Ces huiles essentielles sont également utilisées comme conservateurs
alimentaires.
Sont remplacées par leurs principes actifs : Eucalyptol, Eugénol,
Goménol et thymol.
FIN