Physiologie Bactrienne

Nutrition Mtabolisme Croissance

Dr.A.BENSLIMANI Cours de Rsidanat de Microbiologie 1re Anne de Microbiologie et 3me Anne de Biologie Clinique 8 et 11 /11/2006

La physiologie bactrienne consiste tudier: La Nutrition Le Mtabolisme La croissance des bactries en fonction des variations (naturelles ou contrles) du milieu dans lequel elles vivent.

DEFINITIONS
Nutrition bactrienne : cest l'analyse des besoins lmentaires , nergtiques et spcifiques ncessaires au fonctionnement et la croissance de la bactrie , ainsi que des facteurs physico-chimiques susceptibles de les influencer . Mtabolisme biochimique bactrien : Cest lensemble des transformations chimiques ( anabolisme ou biosynthse et catabolisme ou dgradation) qui assurent llaboration des constituants bactriens et leur fonctionnement . Croissance bactrienne : Cest l'accroissement ordonn de tous les composants de la bactrie. Elle se manifeste par une augmentation numrique des cellules bactriennes et non pas une augmentation de taille comme chez les organismes suprieurs ( homme, animal, plante).

NUTRITION BACTERIENNE

NUTRIMENTS (substances alimentaires)

lments simples (N,C,Minraux)

nergie

Constituants cellulaires (structure, enzymes)

Besoins nutritifs communs

Eau Source dnergie Source de Carbone Source dAzote lments minraux

Composition Chimique de la Bactrie

- H2O : 75 90 % de son poids total - Matire sche : 50 % de Carbone 20 % dOxygne 8 15 % dAzote 10 % dHydrogne 1 6 % de Phosphore 0,1 1 % de Soufre Autres : Potassium , Calcium, Magnsium, Chlore, Sodium, Zinc, Cobalt , Manganse .. : 0,3 % (traces)

1.Besoins lmentaires:
Leau En grande quantit : l'oxygne, l'hydrogne ,l'azote, le carbone le phosphore et le soufre, En quantit plus faible: des ions minraux (Mg,K,Cl,Fe,Co...) Sous forme de traces: des oligolments (Cu,Zn,Mn,...).

H20
Besoin majeur , il entre dans la composition de tous les milieux de culture . Cest une source dH2 et dO2.

A fournir en grandes quantits

Carbone Azote

, Phosphore , Soufre

Le Carbone : un des lments les plus abondants de la bactrie Le plus simple des composs carbons est le CO2 On distingue les bactries en 2 catgories : - capacit de dveloppement en milieu inorganique contenant le CO2 comme seule source de Carbone : Bactries AUTOTROPHES (Stricte/ CO2 obligatoire , Facultatif /CO2 ou compos organique) ex. bactries photosynthtiques - Exigence en composs organiques comme source de carbone : bactries HETEROTROPHES ( capacit de dgrader une panoplie de substances hydrocarbones : Alcool , acide actique , acide lactique (molcules simples) , polysaccharides (complexes). LAzote : entrent dans la composition des protines bactriennes. Lazote peut tre fix par la bactrie : z sous forme dazote molculaire ex. les Rhizobium Azotobacter et certains Clostridiums. z Sous forme de composs inorganiques : ex. NO2- par les Nitrobacter z Sous forme de composs organiques R-NH2 dont les groupements amins reprsentent la source dazote . Phosphore : Il entre dans la composition des acides nucliques , de nombreux coenzymes et de lATP . Il est incorpor dans la bactrie sous forme de Phosphate inorganique . Il permet la rcupration , laccumulation et la distribution de lnergie dans la cellule . Soufre : Il entre dans la composition des acides amins , des protines ( groupement thiol ) . Il est incorpor dans la cellule sous forme de sulfate , de composs soufrs organiques , rarement sous forme de soufre rduit.

En plus faible quantit sont apports les lments minraux :

certains interviennent dans lquilibre physico-chimique de la cellule : Na ,K , Mg et Cl. Dautres constituent les enzymes ou les coenzymes : Fer des cytochromes .

A ltat de traces , souvent apports par leau :on les appelle

les oligo-lments car ils sont indispensables en quantit infime : Ce sont Ca , Mg , Co , Cu , Mn.
NB : De nombreux ions mtalliques peuvent tre toxiques pour certaines cellules ex : les sels de cuivre , Par contre, dautres ions sont indispensables des concentrations prcises , soit pour la synthse dun mtabolite : ex : 0.14 mg de Fer/l pour la synthse de la toxine diphtrique , soit pour la synthse de pigment : ex : Fer+Magnsium pour la production de Prodigiosine chez Serratia marcescens.

2.Besoins nergtiques
Ils couvrent les dpenses engages dans les processus catabolisme et de biosynthse . Les bactries peuvent utiliser comme source d'nergie soit l'nergie lumineuse (bactries Phototrophes), soit l'nergie fournie par les processus d'oxydo-rduction (bactries Chimiotrophes).

Les bactries Phototrophes font appel des composs minraux ou organiques comme sources d'lectrons. Si le substrat oxydable est minral, la bactrie est dite Photolithotrophe :elle est capable de se dvelopper dans un milieu purement minral comme le font les vgtaux :exemple les bactries sulfureuses pourpres ou vertes. Si le substrat oxydable est organique, la bactrie est dite Photoorganotrophe :exemple les bactries pourpres non sulfureuses.

Dans les ractions REDOX, les bactries Chimiotrophes utilisent des composs minraux ou organiques comme "donneurs ou "accepteurs d'lectrons". Si le donneur dlectrons est un corps minral, la bactrie est dite Chimiolithotrophe, ex. bactrie oxydant lhydrogne . Si le compos est organique , la bactrie est dite Chimioorganotrophe ( bactries pathognes dintrt mdical, de contamination alimentaire, d'usage industriel )

3. Substances spcifiques:
Ce sont des mtabolites essentiels dont certaines bactries ont besoin et qu'elles sont incapables de synthtiser par dfaut enzymatique. On les appelle Facteurs de croissance. Ils peuvent appartenir la classe des Acides amins ,des bases puriques et pyrimidiques ou des vitamines. Les besoins quantitatifs sont de l'ordre de 10 microgrammes pour la 1re et la 2me classe et de l'ordre de 1 microgramme pour la 3me classe. Les facteurs de croissance prsentent des caractres communs: - ils sont actifs concentration infime - ils sont troitement spcifiques

Les bactries exigeant des facteurs de croissance sont appeles : Bactries Auxotrophes . Les bactries non exigeantes sont dites : Bactries Prototrophes. Exemples : E.Coli est une bactrie prototrophe : n'exigeant aucun facteur de croissance, elle se multiplie sur milieu minimum. Haemophilus influenzae est une bactrie auxotrophe. Elle ne peut cultiver dans un milieu minimum car il lui manque dans son systme enzymatique les enzymes ncessaires la synthse du facteur V (coenzyme I et II) et du facteur X (Hmine).

Culture dEscherichia coli

Culture dHaemophilus influenzae et test du satellitisme

4- Facteurs influenant la croissance

Les facteurs physiques
: Ils interviennent de faon primordiale dans lobtention dune culture optimale .En effet les nutriments doivent tre apports la bactrie dans les conditions denvironnement qui lui conviennent , sinon , ils peuvent linhiber.

La Temprature : Selon le comportement de la bactrie vis vis de la temprature , on distingue :

les bactries msophiles : T Optimale de croissance= 20C -40C ( 30C pour les msophiles saprophytes , 37C pour les msophiles pathognes ). La majorit des microorganismes de lhomme et de lanimal sont des msophiles : Bactries pathognes , bactries des cavits naturelles ou du revtement cutano-muqueux humain . z Les bactries thermophiles : T Optimale de croissance=45C -65C , gnralement 55C. Ce sont les bactries des sources thermales .ex. Bacillus et Clostridium. z Les bactries psychrophiles : T Optimale de croissance= 0C. T de rfrigration mais multiplication abondante 10C ou 20C.Ces bactries contaminent souvent les produits laitiers , de mme que les produits biologiques (sang ou drivs sanguins) conservs basse temprature .ex .Pseudomonas , Acinetobacter, Aeromonas. z Les bactries cryophiles : T Optimale de croissance infrieure 0C :Ce sont les bactries des ocans et des glaciers.
z

ETUVE BACTERIOLOGIQUE

Le pH
Les bactries prfrent un pH neutre ou lgrement alcalin (7 7.5). Exemples : E.coli cultive entre pH 4.4 et pH8 Lactobacillus acidophilus cultive mieux pH 6 Vibrio cholerae se multiplie au pH optimal de 9 Solutions Tampons : Ils sont inclus dans les milieux de culture bactriologiques afin dviter les brusques variations de pH dues aux modifications chimiques qui rsultent de la dgradation de substrats. Les tampons phosphates (K2HPO4 et KH2PO4) sont les plus utiliss parce quils permettent de garder le pH dans une large zone autour de 7 , parce quils ne sont pas toxiques et quils reprsentent une source de phosphore.

La Pression Osmotique
Grce une paroi spcifique des procaryotes ( Murine) qui leur confre une rigidit et une rsistance aux chocs , les bactries tolrent des variations de concentrations ioniques . Certaines bactries tolrent des concentrations salines importantes ex. Enterococcus (6.5% Nacl) Staphylococcus aureus ( 7.5%Nacl)

La Pression partielle dOxygne

1 Bactrie arobie stricte : ex : Pseudomonas aeruginosa 2- Bactrie Microarophile : ex: Campylobacter jejuni 3- Bactrie arobie-anarobie facultative : ex. les Entrobactries 4- Bactrie anarobie stricte : ex.Bacteroides fragilis

Glose VF (Viande-Foie)
1 2 3 4

Arobie Stricte

MicroArophile

ArobieAnarobie facultative

Anarobie Stricte

5- Gnralits sur les Milieux de culture

Connaissant lensemble des besoins nutritifs de la bactrie, nous pouvons introduire la notion de culture bactrienne. La culture bactrienne a donn un essor considrable ltude des bactries puisque nous sommes pass, grce aux milieux de culture, du simple examen microscopique lisolement, et de l, lidentification des bactries. Pour cela, des milieux de culture ont t mis au point.

Dfinition :
Le milieu de culture doit apporter la bactrie un mlange quilibr de tous les nutriments ncessaires, des concentrations qui permettent une croissance optimale, cest dire : ni trop faible, sinon le milieu sappauvrit vite et la bactrie cultive mal ; ni trop forte sinon le milieu devient vite toxique. La composition du milieu de culture varie linfini. Elle est choisie en fonction du but atteindre et des besoins requis par la bactrie. Le milieu peut tre liquide ou solidifi par addition dAgar : Cest une substance extraite dalgues marines et qui possde la proprit de fixer une grande quantit deau do glification.

CRITERES de Classification
Composition chimique

Naturels ou Complexes Semisynthtiques

-Extraits

Synthtiques
Composition chimique bien dfinie Exemple :Citrate de Simmons

de Matire Organique + Glucose -Exemples : Glose nutritive -Types : Extraits de Levure Peptones pepsiques Peptones trypsiques Peptones pancratiques

Milieu synthtique + Extrait de Levure

Exemple : Citrate de Kristensen

Consistance
z milieu z milieu

liquide (ex. bouillon de Clark Lubs) solide ou glos (ex. glose

Chapman)
z milieu

semi-liquide ou faiblement glos

(ex. milieu Mannitol-mobilit).

Utilisation
les milieux usuels ou de base (ex. glose nutritive , bouillon nutritif) z les milieux enrichis (ex. glose au sang , Bouillon pour Hmoculture ) z les milieux slectifs ou lectifs (ex. glose Hektoen) z les milieux didentification (ex. milieu TSI) z les milieux de conservation z les milieux de transport (milieu T.G.V.)
z

Ensemencement Incubation ltuve

Incubation sous jarre

CROISSANCE BACTERIENNE

1- Dfinition
Cest laccroissement ordonn de tous les composants dun organisme. Chez les bactries (organismes unicellulaires), elle aboutit une augmentation du nombre dindividus . Il y a multiplication dune bactrie, donnant naissance par scissiparit , 2 nouvelles bactries identiques . On dfinit le Temps de gnration comme le temps requis pour un ddoublement du nombre de bactries. ex. E.coli :TG= 20mn M.tuberculosis : TG= 20 h On dfinit le Taux de croissance comme le nombre de divisions par unit de temps (ex. 3 pour E.coli). Au cours de la croissance, le milieu sappauvrit en lments nutritifs disponibles et senrichit en produits du catabolisme, souvent toxiques . Des modifications touchent le pH, le potentiel Redox , la pression osmotique

2- Techniques de mesure de la croissance bactrienne :

a- Dnombrement direct des bactries :
Examen au microscope laide dune cellule hmatimtrique

a-1- Numration totale :

Mesure automatise avec un compteur de particules , des bactries en suspension dans une solution dlectrolyte Mthode dpifluorescence ( Acridine Orange)

a-2- Numration des cellules viables :

Les bactries cultivables forment des colonies sur un milieu de culture appropri : on utilise la culture en botes de Ptri ou Plate Count.

Inconvnient : - Plusieurs cellules agglomres peuvent ne donner quune seule colonie. - De nombreuses cellules isoles ne forment pas ncessairement de colonie.

b- Mesure de la biomasse : b-1- dtermination du poids sec :

Inconvnient : toute la masse cellulaire est mesure . De plus , cest une technique longue et dlicate.

b-2- Mesure de la Densit optique (DO) : On value la DO du milieu de croissance en fonction du temps , une longueur donde donne . La mesure de la D.O. se fait une longueur d'onde allant de 450 550nm et les cultures bactriennes sont dilues de faon obtenir des D.O. infrieures 0,4 ( les DO voluent linairement la concentration cellulaire).

b-3- Technique de la Cytomtrie en flux :

Elle consiste mesurer un ou plusieurs paramtres spcifiques dune cellule isole , entrane par un flux liquide . Cette technique est couramment applique en hmatologie . Elle est encore en cours dvaluation en microbiologie.

c- Marqueurs chimiques :
Il sagit de dosage des protines , DNA , ATP, peptidoglycane ..

3- Cintique de la croissance bactrienne :

L'tude de la croissance bactrienne dans le temps ou cintique de la croissance peut tre reprsent sur un graphique en portant: - en ordonne, les valeurs des log de la D.O du milieu de culture; - en abscisse, le temps.

L'utilisation des log de base 2 facilite cette reprsentation: La courbe de croissance obtenue montre alors 6 phases:

Phase A: Phase de latence Phase B : Phase d'acclration Phase C: Phase de croissance exponentielle : Le taux de croissance atteint la valeur maximale . Phase D: Phase de ralentissement Phase E: Phase stationnaire: La masse bactrienne est maximale . Phase F: Phase de dclin: La masse bactrienne dcrot du fait de la lyse acclre des bactries.

4- modifications de la courbe de croissance :

a- Croissance continue : utilises dans l'industrie pour obtenir des corps bactriens de mme ge (prparation de vaccins bactriens), ou des mtabolites bactriens (vitamines ) ,des toxines bactriennes (prparation d'anatoxines) en grande quantit. b- La diauxie : on fournit la bactrie 2 sources de carbone et dnergie.

METABOLISME BIOCHIMIQUE BACTERIEN

1- Dfinition :
Il est dfini comme l'ensemble des transformations chimiques (ractions de biosynthse et de dgradation), qui assurent l'laboration des constituants bactriens et leur fonctionnement. Grce un quipement enzymatique trs complet, toutes les ractions chimiques du mtabolisme bactrien sont catalyses par des enzymes spcifiques. L'tude du mtabolisme bactrien permet de dfinir des caractres d'identification biochimique qui reprsentent des critres essentiels dans la classification (ou Taxonomie) bactrienne.

Les ractions cataboliques permettent la bactrie de convertir les aliments mis sa disposition ( Protines , Lipides , Polysaccharides) en molcules organiques simples ou en mtabolites intermdiaires , avec production dnergie sous forme de liaison phosphate ADP Pi . Les liaisons anaboliques sont les voies de biosynthse que la bactrie emprunte partir de ces molcules simples pour synthtiser des macromolcules intervenant dans la structure et le fonctionnement bactrien . Lnergie utilise dans ces biosynthses provient du catabolisme .

2- Mtabolisme nergtique : 2-1- Gnralits

- La bactrie produit de lnergie au cours du catabolisme par le biais de ractions EXERGONIQUES . Pour viter toute perte sous forme de chaleur , ces ractions exergoniques (productrices dnergie) sont couples des ractions dites ENDERGONIQUES (absorbent lnergie). Lnergie est ainsi emmagasine dans des molcules dATP ou immdiatement consomme dans une raction qui ncessite de lATP.. - Chez les bactries dintrt mdical , les ractions exergoniques sont des ractions doxydorduction dun compos organique. A partir dun substrat SH2 , la raction doxydation ou DESHYDROGENATION fait perdre 2lectrons et 2 protons au substrat qui est oxyd. Ne pouvant rester libres , ces derniers sont jects puis capts par un accepteur dlectrons A qui est ainsi rduit en AH2 .

Le mtabolisme nergtique dune bactrie chimioorganotrophe est constitu dune suite de ractions REDOX avec libration dnergie , partant dun substrat organique . Le compos organique peut tre : un hydrate de carbone ( surtout le glucose) source la plus importante dnergie un acide amin un acide gras un alcane une base purique ou pyrimidique

Les ractions redox productrices dnergie sont intgres dans 2 types de processus nergtiques : La Fermentation et la Respiration

La fermentation a t dfinie par Pasteur comme la vie sans air . Cest une oxydation biologique au cours de laquelle laccepteur final dH2 et d est un compos organique. Ce compos peut tre prsent dans le milieu ou provenir de la dgradation dun substrat oxydable . Les voies fermentaires se droulent au sein du cytoplasme bactrien. Lnergie est produite par Phosphorylation au niveau du substrat. Le bilan nergtique est rduit.

La Respiration est lensemble des voies mtaboliques au cours desquelles loxygne molculaire ou des composs oxygns inorganiques ou ioniques jouent le rle daccepteur dlectrons et dH2 dans les ractions redox. Ces voies sont lies la membrane cytoplasmique de la bactrie. Lnergie est produite par phosphorylation dite oxydative et libre par paliers via une chane de transfert dlectrons ; Le bilan nergtique est lev.

2-2- Voies du Mtabolisme intermdiaire

On distingue 3 principales voies enzymatiques , localisation cytoplasmique , qui oxydent le glucose en acide pyruvique , vritable plaque tournante du mtabolisme et situ au carrefour du mtabolisme intermdiaire : La voie dembden-Meyerhof ou voie des HexosesDiphosphates , voie comparable la voie de la glycolyse des tres suprieurs .Elle aboutit la production de 2 moles dATP par mole de glucose. La voie des Hexoses-Monophosphates ou voie des Pentoses-Phosphates ou Shunt oxydatif ou cycle de Dickens-Horecker .Elle produit 1 mole dATP par mole de glucose. La voie du 2-cto-3-doxy-gluconate ou voie dEntnerDoudoroff est assez propre aux microorganismes . Elle ne produit pas dATP.

2-3- La respiration :

Le Pyruvate est le point daboutissement oblig de toutes les voies de dgradation du Glucose et des voies doxydation de nombreux acides amins. Il est transform en Acetyl~CoA par dcarboxylation oxydative.

2-3-1- Le cycle de Krebs :

LAcetyl~CoA ragit avec lacide oxaloactique pour former de lacide citrique . Il sen suit une succession de ractions doxydation et de dcarboxylation , avec rductions de NAD en NADH2 couples aux ractions doxydation .Du point de vue nergtique , chaque tour de cycle de Krebs gnre 4 ractions de dshydrognation donc un bilan nergtique de 12 ATP.

2-3-2- La chane respiratoire :

Cest la chane cytochromique de transfert des lectrons , laquelle sont associs des phosphorylations oxydatives . Ses composants sont disposs de faon squentielle en fonction de leur potentiel redox. Le mouvement des lectrons ou des protons le long de la chane seffectue graduellement partir des constituants les plus lectrongatifs pour aller vers le constituant le plus lectropositif (O2). Ces composants sont des enzymes associs des groupements prosthtiques et qui agissent comme transporteurs dlectrons.

ADP

ATP

ADP

ATP

ADP

ATP

* NAD : Nicotinamide Adnine Dinuclotide ou Coenzyme I : Coenzyme fonctionnant comme transporteur dhydrogne dans de nombreuses ractions redox. La molcule dH2 est porte sur le rsidu Nicotinamide. Forme oxyde :NAD+ Forme rduite : NADH + H+ (N.B. NADP= Coenzyme II) * FP : Ce sont des protines de haut poids molculaire contenant des flavines comme groupement prosthtique . Appartiennent aux FP la Flavine mononuclotide (FMN) et Flavine Adnine dinuclotide (FAD). Ces flavoprotines ont pour fonction daccepter lH2 qui provient du NADH. * Ubiquinone ou Coenzyme Q : transporteur dhydrogne , non li une protine.

* Cytochromes : Systmes redox qui transfrent des lectrons et ne sont pas capables de transporter de lhydrogne. Ce sont des protines dont le groupement prosthtique est une protoporphirine portant un atome de fer central qui participe au transport lectronique. Cette protoporphirine sappelle Hme quand le fer est ltat Fe++ (ferreux) et Hmine lorsque le fer est ltat Fe+++ (oxyd ou ferrique). De nombreux cytochromes ont t dcrits chez les bactries : a , a3 , b, c , o. Le cytochrome terminal qui joue le rle daccepteur final dlectron est appel Cytochrome Oxydase. Au cours de la respiration , il y a dgagement important dnergie puisquil y a oxydation du substrat jusquau stade H20+C02 . De ce fait , lnergie , trop importante pour tre libre dun seul coup, est libre par palier au cours dune succession de ractions redox allant de la rduction du NAD puis dune flavoprotine et dune ubiquinone avec transfert dlectrons et de protons jusqu laccepteur final , les lectrons tant transfrs seuls par les cytochromes .

La respiration se fait donc en 2 tapes : 1) Le cycle tricarboxylique de Krebs , avec libration de CO2 par oxydation couple la rduction de 3 NAD+ et de 1 FAD+ par tour de cycle . 2) La chane respiratoire avec coenzymes de dshydrognases , Quinones et Cytochromes .

Selon laccepteur final dlectrons et dH2 , on peut distinguer : 1) Dans la respiration arobie , laccepteur final est lO2 2) Dans la respiration anarobie , laccepteur final est un compos inorganique ou ionique (NO3fumarate)

2-4- Fermentation du Glucose :

La premire tape comporte les diffrents voies du mtabolisme intermdiaire qui aboutissent au Pyruvate . Puis viennent les ractions de rduction du Pyruvate qui diffrentient les bactries fermentaires car elles conduisent des produits finals divers , soit uniques , soit plus souvent mlanges . On distingue , selon la nature des produits finals de fermentation :

* la fermentation Acides complexes

C'est le type de fermentation le plus rpandu chez les bactries. Elle peut se prsenter sous 2 formes possibles:
- fermentation Acide Mixte :caractristique des Enterobactries VP(-) - fermentation butandiolique : Les Enterobacteries VP+ , Listeria monocytogenes,la plupart des Vibrio et Aeromonas

L'accumulation d'Acides dans le milieu de culture aboutit un PH final bas.

Les Enterobacteries VP+ , Listeria monocytogenes,la plupart des Vibrio et Aeromonas possdent , ct du mode de fermentation Acides Mixtes, une voie fermentaire particulire, dite Butandiolique ou Butylne glycolique. Cette voie aboutit la libration d'un produit neutre: Le 2,3 Butylne Glycol.

Fermentation lactique :
On distingue 3 modles: - Fermentation Homolactique : retrouve chez les Streptocoques : C'est une fermentation sans production de gaz et s'accompagnant d'une diminution importante du PH du milieu. - Fermentation Htrolactique: retrouve chez les Lactobacilles, Comprend une production importante de CO2 et un PH bas. - Fermentation Aceto-lactique: retrouve chez des bactries du genre Bifidobacterium , s'accompagne de la production d'un mlange d'acide lactique et actique.

* Fermentation Alcoolique:
C'est une fermentation retrouve chez les champignons et les cellules vgtales.

* Fermentation Butyrique :
Elle aboutit l'Acetate , le Butyrate, H2 et CO2 et qui est retrouve chez les Clostridies dits Saccharolytiques

2-5- Tests dexploration du mtabolisme nergtique :

2-5-1- preuve de HUGH et LEIFSON : Milieu dEtude de la Voie dAttaque des Glucides (M.E.V.A.G) : Gloses molles , faiblement peptone , additionnes de glucose 1%, coules en culot , fondues au moment de lemploi .Lensemencement se fait par piqre centrale de 2 tubes de milieu , partir dune suspension riche du germe tudier. Un tube est laiss ouvert O , lautre est ferm par une couche de vaseline F .

2-5-3- Recherche de la catalase : on met en prsence une colonie microbienne et une goutte deau oxygn sur une lame . Lapparition de bulles dair signe la prsence dune catalase . Attention : ne pas prlever la culture partir dune glose au sang.

Catalase -

Catalase +

GN non ensemence

Staphy.aureus

Enterococcus faecalis

Culture sur Glose au sang

2-5-4- Test de GRIESS-ILOSWAY : Bouillon Nitrate 1%o KNO3 ensemenc partir de la souche tudier Ractifs de rvlation : Acide Sulfanilique et alpha-naphtylamine Poudre de Zinc

2-5-4- Etude de la voie fermentaire des Acides complexes: Bouillon CLARK et LUBS
Bouillon CLARK et LUBS inocul par une goutte dune suspension trouble de bactries. Aprs 18h 37C, on divise le bouillon dans 2 tubes striles. Chaque tube sert rvler une des 2 voies : - Voie des Acides mixtes : Addition dune goutte de ROUGE de METHYL (test au RM) - Voie Butylne-Glycolique : Addition de 2 gouttes de KOH 10% et dAlpha-naphtol ( Raction de VOGES-PROSKAUER)

2-5-5- Utilisation du Citrate comme seule source de Carbone : Milieu au Citrate de SIMMONS ou au Citrate de KRISTENSEN

Milieu au Citrate de SIMMONS

Test ngatif

Test positif

3- Mtabolisme Glucidique :
3-1- LAuxanogramme : Etude dune gamme de sucres dgradables par la bactrie (en milieu liquide ou solide) 3-2- Ltude de lattaque des sucre en :
- Milieux glucidiques gloss simples : glose + sucre + indicateur de pH (exemple : le milieu Mannitol-mobilit-nitrate ) - Milieux gloss glucidiques complexes : TSI (Tri-Sugar-Iron ) et KIA (Kligler-Iron-agar) Ce sont des gloses inclines avec pente +culot : 1%o Glucose et 10%o Lactose et Saccharose Lindicateur de pH est le Rouge de Phnol

Galerie API 20E (identification des Enterobactries)

Mannitol-Mobilit

Exemples de Milieux Glucidiques simples

T.S.I.

Avant ensemencement

Shigella sonnei

Enterobacter sp. Proteus sp.

Pseudomonas sp.

3-3- Rvlation denzymes du mtabolisme glucidique: glucidique

on dtecte essentiellement la Bta galactosidase , enzyme qui dgrade le lactose en glucose et galactose. Cette enzyme a 2 caractristiques : 1) elle est intra-cellulaire 2) elle est inductible Il faut donc une permase pour faire passer quelques molcules de lactose en intra-cellulaire et induire la synthse de lenzyme.

Le test de laboratoire est appel test ONPG

3-4- Etude de la voie nergtique dattaque dun sucre :

Milieu utilis : MEVAG SANS SUCRE + sucre tudier (1%)

4- Mtabolisme Protidique :

4-1- Mtabolisme des Acides Amins soufrs (Cystine, Mthionine): H2S R SH

TEST :On utilise le milieu TSI ou KIA (milieux glucidiques gloss complexes) qui contiennent Thiosulfate de sodium (liaison thiol)

+ sulfate de Fer = Sulfure de fer RNH2

NH2

H2S +

4-2- Mtabolisme de lure et du Tryptophane

Indole -

Indole +

Ure +

Ure -

4-3- Catabolisme des Acides Amins:

Le test des dcarboxylases :

Au laboratoire , on met en vidence les dcarboxylases sur milieu de MOELLER-FALKOW : (sucre=Glucose , Indicateur=Pourpre de Bromocrsol

1er temps : Au dpart, tous les tubes sont couleur violette

2me temps : Acidification de tous les tubes par attaque du glucose: Tous les tubes virent au jaune

3me temps : Dcarboxylation et libration de catabolites alcalins do virage au bleu violacle tube tmoin reste jaune Lecture : tube jaune : ngatif tube violet : positif

5- Mtabolisme lipidique :
Lipase : enzyme qui hydrolyse les esters dacide gras longue chane carbone.
Test de laboratoire : Technique de SIERRA : Comme ester dacide gras utilis au laboratoire , on distingue les TWEEN qui sont des Esters de Sorbitol et dAcide gras.

enzymes qui hydrolysent les Lcithines

Test de Laboratoire : on utilise communment la Lcithine du jaune duf incorpor 10 % dans la glose (mulsion dans de leau physiologique) .

APPLICATIONS DE LA PHYSIOLOGIE BACTERIENNE

1-Le diagnostic bactriologique: culture et identification des germes partir du prlvement pathologique (urine , selle , sang , LCR)

2- L'Antibiothrapie: Les modifications de la courbe de croissance permettent de mesurer l'activit anti-bactrienne d'un nouvel antibiotique sur une bactrie donne. 3- Lefficacit de la strilisation: L'tude de la courbe de croissance permet de vrifier la vitesse de destruction des bactries par la chaleur , les UV, ou d'autres agents physiques ou chimiques. 4- L'industrie: -Dosage microbiologique des vitamines et autres substances qui sont des facteurs de croissance pour les bactries, - Culture de grandes quantits dantibiotiques, d'enzymes et de vitamines grce la croissance en milieu de culture renouvel, - Culture de grandes quantits de bactries destines l'alimentation en particulier animale (gnie gntique).

5- Les Systmes pour hmoculture:

5-1- Systmes non automatiss:
ex. Hmoculture Signal (OXOID)

Le Gaz dgag par le mtabolisme bactrien est dtect par lIndicateur

5-2- Systmes automatiss:

Bass sur le principe de dtection dun produit du mtabolisme biochimique ; Exemple : Dtection du CO2 dorigine bactrienne Lun des automates les plus rcent : BACT/ALERT Microbial Detection System (Biomerieux) , bas sur la dtection par technique colorimtrique.

6- Les Biofilms:
Dans les habitats naturels, les bactries sont attaches des surfaces , plus souvent que libres en suspension dans un milieu liquide. Ainsi, les bactries attaches des surfaces sorganisent en communaut en sentourant dune matrice de polymres organiques : le Biofilm Cest sous cette forme que les bactries colonisent les matriel dexploration ou de soin : Endoscopie, cathters , sondes respiratoires ou urinaires. Elles seraient protges des agents antimicrobiens car elles se trouvent au repos ou dans un tat de latence peu propice laction des antimicrobiens . Les bactries des bio films imposent une rflexion en matire d hygine hospitalire, de prvention et de dsinfection du matriel de soin .

Bibliographie 1- Leclerc H. , Gaillard J.L., Simonet M. Microbiologie gnrale :La Bactrie et le monde bactrien Edition DOIN 1995 2- Marchal N., Bourdon J.L. , Richard CL .Les Milieux de culture pour lisolement et lidentification biochimique des bactries , dition DOIN 1991 3- Olds R.J. Atlas en couleurs de Microbiologie dition MALOINE 1979 4- Consultez les liens disponibles dans le site du Rseau AARN (Algrian Antimicrobial Resistance Network) que vous trouverez ladresse Internet : WWW.sante.dz