Le but d'une solution tampon est d'aider à maintenir un pH stable lorsqu'une
petite quantité d'acide ou de base est introduite dans une solution. Une solution tampon phosphate est un tampon pratique à avoir autour, en particulier pour les applications biologiques. L'acide phosphorique ayant plusieurs constantes de dissociation. Le tampon est le plus souvent préparé à pH 7 en utilisant du phosphate monosodique (NaH2PO4) et sa base conjuguée, le phosphate disodique (Na2HPO4) Matériaux tampon phosphate Pour fabriquer votre tampon phosphate, vous aurez besoin des matériaux suivants: Phosphate monosodique Phosphate disodique. pH-mètre Fiole jaugée L’eau distillé Béchers Barres d'agitation Plaque chauffante La solution acide (NaH2PO4) La solution basique (Na2HPO4) 50mM ; v=250mL 50mM ; v=250mL Masse molaire :156g/mol Masse molaire :141.96g/mol
Étape 1. Décidez des propriétés du tampon
Avant de faire un tampon, vous devez d'abord savoir quelle molarité vous voulez qu'il soit, quel volume faire et quel est le pH souhaité. Solution acide : NaH2PO4 156g1mol1L(1M) 156mg1mmol1L(1mM) 7.8g50mmol1L(50mmol) 1.95g12.5mmol250mL(50mM) Solution basique : Na2HPO4 141.96g 1mol1L(1M) 141.96mg1mmol1L(1mM) 7.08g50mmol1L(50mmol) 1.77g12.5mmol250mL(50mM) Étape 2. Mélanger la base d'acide et de conjugué Préparez un peu moins de 500mL de solution en utilisant les quantités correctes de phosphate monosodique et de phosphate disodique. En diluant 1.95g d'acide dans 250ml d'eau distillée, et 1.77g de base dans 250ml d'eau distillée. (Agitation à l’aide de barre d’agitation sur la plaque chauffante) Étape3. Vérifiez le pH Utilisez une sonde de pH pour confirmer que le pH correct pour le tampon est atteint. Étape 4. Corrigez le volume Une fois le pH souhaité atteint, porter le volume de tampon à 500mL. Diluez ensuite le tampon comme vous le souhaitez. Avantages et inconvénients des tampons au phosphate Les deux principaux avantages des tampons au phosphate sont que le phosphate est hautement soluble dans l'eau et qu'il a une capacité tampon extrêmement élevée. Cependant, ceux-ci peuvent être compensés par certains inconvénients dans certaines situations. Les phosphates inhibent les réactions enzymatiques. Le phosphate précipite dans l'éthanol, il ne peut donc pas être utilisé dans des préparations pour précipiter l'ADN ou l'ARN. Les phosphates séquestrent les cations divalents (par exemple, Ca2 + et Mg2 +).