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Tp1 : Préparation des solutions

Le but d'une solution tampon est d'aider à maintenir un pH stable lorsqu'une


petite quantité d'acide ou de base est introduite dans une solution. Une solution
tampon phosphate est un tampon pratique à avoir autour, en particulier pour les
applications biologiques. L'acide phosphorique ayant plusieurs constantes de
dissociation. Le tampon est le plus souvent préparé à pH 7 en utilisant du
phosphate monosodique (NaH2PO4) et sa base conjuguée, le phosphate
disodique (Na2HPO4)
Matériaux tampon phosphate
Pour fabriquer votre tampon phosphate, vous aurez besoin des matériaux
suivants:
 Phosphate monosodique
 Phosphate disodique.
 pH-mètre
 Fiole jaugée
 L’eau distillé
 Béchers
 Barres d'agitation
 Plaque chauffante
La solution acide (NaH2PO4) La solution basique (Na2HPO4)
50mM ; v=250mL 50mM ; v=250mL
Masse molaire :156g/mol Masse molaire :141.96g/mol

Étape 1. Décidez des propriétés du tampon


Avant de faire un tampon, vous devez d'abord savoir quelle molarité vous
voulez qu'il soit, quel volume faire et quel est le pH souhaité.
Solution acide : NaH2PO4
156g1mol1L(1M)
156mg1mmol1L(1mM)
7.8g50mmol1L(50mmol)
1.95g12.5mmol250mL(50mM)
Solution basique : Na2HPO4
141.96g 1mol1L(1M)
141.96mg1mmol1L(1mM)
7.08g50mmol1L(50mmol)
1.77g12.5mmol250mL(50mM)
Étape 2. Mélanger la base d'acide et de conjugué
Préparez un peu moins de 500mL de solution en utilisant les quantités correctes
de phosphate monosodique et de phosphate disodique. En diluant 1.95g d'acide
dans 250ml d'eau distillée, et 1.77g de base dans 250ml d'eau distillée.
(Agitation à l’aide de barre d’agitation sur la plaque chauffante)
Étape3. Vérifiez le pH
Utilisez une sonde de pH pour confirmer que le pH correct pour le tampon est
atteint.
Étape 4. Corrigez le volume
Une fois le pH souhaité atteint, porter le volume de tampon à 500mL. Diluez
ensuite le tampon comme vous le souhaitez.
Avantages et inconvénients des tampons au phosphate
Les deux principaux avantages des tampons au phosphate sont que le phosphate
est hautement soluble dans l'eau et qu'il a une capacité tampon extrêmement
élevée. Cependant, ceux-ci peuvent être compensés par certains inconvénients
dans certaines situations.
Les phosphates inhibent les réactions enzymatiques.
Le phosphate précipite dans l'éthanol, il ne peut donc pas être utilisé dans des
préparations pour précipiter l'ADN ou l'ARN.
Les phosphates séquestrent les cations divalents (par exemple, Ca2 + et Mg2 +).