Compte rendu 

:
i. Observation microscopique à l’état frais

ii. Etude macroscopique/microscopique des

micro-organismes « coloration des grams »

But du TP :
 Observation des échantillons des colonies de bactéries sous microscope optique à leurs
états frais.
 Observation des échantillons après coloration sous microscope optique.

Travail à faire :
 Etude et observation d’une colonie isolée d’une bactérie (Escherichia Coli/
Staphylocoque) sous microscope optique.
 Observation des colonies de (Escherichia Coli/ Staphylocoque) avec coloration des
grams.

Réalisé par :
 BELLAL Cylia Groupe :
 CHIBANE El djida
 DEMMOUCHE Manel Biologie 02
 i. Observation microscopique à l’état frais

I. Introduction :
L’observation au microscope à l'état frais est une technique importante en biologie qui permet aux
scientifiques d'étudier les structures et les processus biologiques dans leur état naturel, offrant ainsi des
informations précieuses pour la compréhension de la vie et de ses mécanismes fondamentaux.

II. Matériels utilisés:

Bec benzène Micropipette Bécher Anse de platine

Pipette Pasteur Lame en verre Microscope optique

III. Matières utilisés :

Culture solide (E. Coli) Eau physiologique Eau de javel

IV. Mode opératoire :

1) Milieu solide :

 On a commencé par stérilisé le milieu de travaille avec l’eau de javelle et on a allumé le

bec benzène en posant au tour de lui les boites pétries, micro pipette, eau physiologique,
anse de platine, des lames et lamelles.
 Tout d'abord, une petite goutte d'eau physiologique a été placée sur une lame propre et
sèche. Cette étape permet d'éviter que la bactérie sèche et meure sous le microscope.
 Puis on a stérilisé l’anse de platine et l’a mis dans le milieu de culture après l’avoir flambé
cette dernière, on a pris un échantillon et l’étalé sur la lame et avec une lamelle on l’a
recouvré.
 Enfin, la lame a été placée sous le microscope et observée à différents grossissements pour
voir la bactérie à l'état frais.

2) Milieu liquide :

 On a pris un échantillon à l’aide d’une pipette pasteur de staphylocoque et on l’a mis

sur une lame stérilisé.

 On a mis notre préparation sous microscope après avoir pausé une lamelle en verre
sous l’échantillon.
V. Observation :
On a observé des bactéries d’une forme bâtonnées qu’ils sont immobiles et se sont des
bactéries isolés

VI. Conclusion :
En conclusion, Il est important de noter que l'observation microscopique à l'état frais des
bactéries peut fournir des informations générales sur leur morphologie, leur mobilité et
leur distribution, mais elle peut ne pas permettre une identification précise des espèces
bactériennes.
 ii. Etude macroscopique/microscopique des micro-organismes
« coloration des grams »

1. Introduction :

La coloration différentielle ou coloration de gram est l'étape essentielle de l'identification

bactérienne, Surtout dans le domaine médical, à partir d'une culture pure (culture pure
contenant une seule espèce), elle est aussi appelée coloration V.L.A.F (Violet, Lugol,
Alcool. la fuschine).C'est une coloration qui permet de mettre en évidence les propriétés
de la paroi bactérienne et d'utiliser ces propriétés pour les distinguer et les classifier. Cette
méthode permet de colorer les bactéries et de les distinguer à l'examen direct par leur
aptitude à fixer le violet de gentiane (Gram +) ou la fuschine (Gram -)

2. Matériel utilisé :

Bec benzène Micropipette Bécher Anse de platine

Pipette Pasteur Lame en verre Microscope optique Pince

3. Matières utilisé :

Culture solide (E. Coli) Culture solide(Staphylocoque) Eau physiologique

Eau de javel Lugol(fixateur) Bleu de méthylène Alcool acétone

La Fuschine violet de gentiane Huile a émersion Eau distillé

4. Mode opératoire :
 Tout d'abord, une lame de verre a été nettoyée et stérilisée.
 Ensuite, on a prélevée une culture bactérienne (E. Coli et Staphylocoque) à l'aide d'une
anse de platine et déposée sur la lame de verre où on a déjà mis une goutte d'eau
physiologique.
 On a ensuite chauffée la lame de verre doucement au-dessus d'une flamme pour fixer
les bactéries sur sa surface.
 On a recouvré la lame de verre avec une solution de coloration violet de gentiane de
Gram positif E. Coli.
 On a laissé la coloration agir pendant environ une minute, puis on a rincée la lame à
l'eau distillée pour éliminer l'excès de colorant.
 On a ensuite immergée la lame dans une solution de décoloration alcool acétone pour
enlever le colorant des bactéries à Gram négatif.
 On a recouvré la lame d'un colorant de contre-coloration, généralement le safranine,
qui colore les bactéries à Gram négatif Staphylocoque en rose.
 Finalement, on a mis huile à d’émersion sous nos échantillons et les a placés sous
microscope pour commencer l’observation.
 5. Observation :

Couleur violet = « gram -» Couleur rose = « gram +»

Les bactéries à paroi cellulaire épaisse (gram positives) apparaissent violettes au microscope,
tandis que les bactéries à paroi cellulaire mince (gram négatives) apparaissent roses.

6. Conclusion :
Lors de ce TP, nous avons appris les étapes de la coloration de Gram et comment interpréter
les résultats obtenus. Nous avons également pu observer des bactéries au microscope et
constater leur diversité morphologique. Nous avons compris l'importance de cette technique
pour la classification et l'identification des bactéries, ainsi que pour la mise en place de
traitements antibiotiques adaptés. Nous avons également pu constater l'efficacité de la
coloration de Gram pour détecter des infections bactériennes dans différents types
d'échantillons biologiques.