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examen de l'état frai

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TP de microbiologie sur l'examen macroscopique(l'examen de l'état frai).
TP de microbiologie sur l'examen macroscopique(l'examen de l'état frai).

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Université Saad Dahleb, Blida Faculté des Sciences Agro-Vétérinaires Département de Biologie

Compte rendu du TP Nº 04 de microbiologie

Année scolaire : 2008 /2009

I/ Introduction :
Pour faire des recherches microbiologiques, le chercheur devra effectuer tous les prélèvements nécessaires dans des conditions d’asepsie rigoureuse. Ces prélèvements peuvent êtres soit liquides comme les urines, le sang, …, soit solide comme les selles, …etc. Pour effectuer de bonnes recherches, le bactériologiste à la possibilité de choisir entre 2 méthodes d’examens microscopiques • Examen direct à l’état frais. • indirect Examen avec des colorants. Le plus utilisable est l’examen direct puisque il permet l’observation des germes à leur état vivant et permet aussi de mettre en évidence : •L’absence ou la présence de bactéries ainsi que leur abondance. •La morphologie et le mode d’assemblage des bactéries Pour identifier, classer les bactéries on doit passer par un examen morphologique (lecture

morphologique). II/Observation macroscopique (lecture morphologique) :
C’est l’étude de l’aspect des colonies, elle nécessite l’observation a l’oeil nu. Il y a plusieurs critères de classification :

1-Forme :

2-taille :
• • • • • Petite (de 1 à 2 mm) Moyenne (de 2mm à5mm Grosse 5mm Ponctiforme (inférieur de 1 mm, ne peut se voir qu’avec une loupe)

3-le relief :
• • • • Bombée Plate Concentrique (elle est ni plate ni bombée elle a un point au centre) Omblique (très rare, une colonie qui apparaît plate mais elle a des bordures surélevées)

4-l’aspect :
C’est l’étude de la surface de la colonie Lisse S (smooth) : elle est ronde avec des bordures régulières, elle a une surface brillante, se sont des bactéries pathogènes. Rugueuse R (rooth) : elle a des bordures irrégulières, opaque (la colonie n’est pas transparente, elle ne laisse pas traverser la lumière) Irisante : elle reflète des reflets métalliques (elle est rare)

5- nature de la crème bactérienne :
• Crémeuse • Visqueuse (brillante) • Filamenteuse (sous forme de filaments).

6-la couleur :

Elle peut prendre toute les couleurs imaginables : beige, verte, blanche, jaune… Le pigment peut être diffusable : le pigment colore la colonie et le milieu de culture, ou non diffusable : le pigment colore seulement la colonie. Avant l’étude de la bactérie on passe par des étapes préliminaires qui se limitent a un isolement des ensemencements successifs afin d’avoir des colonies purs puis une étude macroscopique qui va décrire les colonies ça va orienter l’étude. Apres on va procéder aux étapes de l’identification : c’est l’examen a l’état frais. En troisieme lieu on fait un antibiogramme. Examen de l’état frais : c’est l’étude des bactéries dans leur milieu naturelle, on utilise une coloration vitale ou à l’état frais, le but de cet examen c’est de définir la mobilité de la bactérie.

Exemple :

Irrégulier, moyenne, plate, rugueuse, crémeuse, rouge, non diffusable.

III Examen a l’état frais : 1. BUT :
Le but de l’examen à l’état frais consiste sur l’observation microscopique des bactéries vivantes. Cette méthode permet de mettre en évidence :  L’existence ou pas de germes.  La morphologie des bactéries qui est l’une des principales étapes de l’identification bactérienne.  La mobilité : une bactérie mobile doit se déplacer dans le champ microscopique avec un mouvement qui lui est propre. Cette mobilité ne doit pas être confondue ni avec le mouvement BROWNIEN ni avec le mouvement SINUSOIDAL.  Le mode d’assemblage c'est-à-dire comment elles sont disposées ; libre ou liées. Il est également possible d’apprécier la quantité approximative des bactéries par champ microscopique et en déduire les paramètres observés. Ce renseignement peut être important, en particulier lorsqu’un isolement doit être effectué à partir du produit examiné. 2. Préparation de l’étalement :

On prépare avant tout une lame stérilisée on met au dessus une goutte d’eau distillée a l’aide d’une pipette , on prend une anse flambée ,on prélève des bactéries on étale sur la lame ,on recouvre avec une lamelle stérilisée le liquide ne doit pas déborder,on stérilise l’anse .

• Prélèvement d’un milieu solide :

On prélève a l’aide d’une anse flambée des bactéries qu’on dans un tube a essai contenant une eau distillée, on mijote délicatement a fin de ne pas casser les flagelles s’il y en a, on prélève une goutte a l’aide d’une pipette on étale sur une lame stérilisée et on couvre a l’aide d’une lamelle. L’étalement est prêt a être observé, on peut classer les bactéries après cet observation si elle est mobile (elle contient un flagelles ou plus, la localisation du flagelle) ou elle ne contient aucun flagelle. Après prélèvement on mais la lame sous le microscope photonique et on observe (grossissement x 100).

• Prélèvement d’un milieu liquide :

CONCLUSION :
* D’après les résultats qu’on a obtenu, on peut déduire que l’examen microscopique à l’état frais permet de mettre en évidence les caractéristiques des bactéries observées : la forme, la mobilité, le mode d’assemblage, et permet aussi l’identification et l’orientation bactérienne.

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