Compte rendu

Influence de la variation de certains

facteurs sur la croissance des
microorganismes et l’identification
des bactéries

Réalisée par :Hajar Ifqir

Introduction
Un certains nombre de facteurs physique
externes peuvent intervenir dans le
développement des microorganismes. La
variation de certains entre eux (Ph,
température …) peut accélérer, retarder, ou
arrêter la croissance .nous étudions dans cette
séance l’influence de la variation de température
et de concertation de Nacl puis, l’indentification
des bactéries (test mannitol, coloration de gram)

Matériel utilisé
8 tubes
2 pipettes de 10 ml
 pipette de 0 .1 ml
Fiole jaugée de 500ml
Fiole jaugée de 1l
Bouillons nutritifs
Mannitol
L eau distillé
anse de platine
lame
I. variation de la température et la
concentration de Nacl :
1 préparation de bouillons nutritifs
Mode opératoire :
 mesure 20g de bouillons nutritif par la balance
 Mélanger les bouillons nutritifs avec un 1 L d eau
distillé
 Mettez le mélange dans la plaque de chauffage
pendant 5m

(a) variation de la température

 le but
 Déterminer les valeurs limites de
température et la valeur optimale de
croissance
Mode opératoire
4 tubes de bouillons nutritifs (contenant 10ml de
milieu), marquer chaque tube de la température
correspondante : 4C°,20C°,37C°et 45C°
Ajouter dans chaque tube 0,1ml de bactérie 2
Incuber immédiatement chaque tube à la
température indiquée
 B :variation de concentration de
Nacl :
 Le but :
Favorise la croissance de certains micro-
organismes grâce à une pression de sélection
résultant de sa composition Par exemple, milieu
à concentration en NaCl pour la culture des
halophiles ou non halophile

Mode opératoire :
 Ajouter dans le mélange de bouillon
nutritif :
*Pour la concertation de 0,5 % :0 g /Nacl
* Pour la concertation de 2 % : 1 ,5 g /Nacl
*Pour la concertation de 4 % : 3,5 g /Nacl
*Pour la concertation de 7,5 % :7 g /Nacl
 Remplir chaque tube par une valeur
 Ajouter dans chaque tube 0,1ml de
bactérie 2
 Incuber immédiatement les tubes à la
même température
 C : résultat :
Mesurer la DO des tubes à 600nm par
min
Pour mesurer la DO on a utilisé le
spectrophotomètre dans le quelle à chaque fois
on a rempli la cuve (après on a réglé le zéro) par
le bouillons nutritifs de la température
(4C°,20C°,37C°,45C°) et de concentration de
Nacl (0,5% ;2% ;4% ;7,5% ) pour chaque bactérie
et on a noté les mesures trouver dans le tableau
Après avoir calculé la moyenne on a trouvé les
résultats suivants :
Les La température à PH=7 Concentration de Nacl°
bactéries
4C° 20C° 37C° 45C° 0,5% 2% 4% 7,5%

B1 0,030 0,390 0,270 0,187 0,157 0,336 0,283 0,183

B2 0,011 0,191 0 ,37 0,037 0 ,209 0,3 0,315 0,350

B3 0,060 0,109 0,150 0,261 0,198 0,126 0,200 0,340

B4 0 ;33 0,370 0,299 0,270 0 ,272 0,231 0,227 0,145

DO
0.45

0.4

0.35

0.3
bactérie 1
0.25
bactérie 2
0.2 bactérie 3
0.15 bactérie 4

0.1

0.05

0
4°C 20°C 37°C 45°C
T (°C

Influence de la température sur la croissance

des bactéries
do
1.2

0.8
bactérie 4
0.6 bactérie 3
bactérie 2
0.4
bactérie 1

0.2

0
0.5 2 4 7.5
Nacl

Influence de la concentration de Nacl sur la

croissance des bactéries
 Interprétation

Résultats Résultats étudiés

expérimentaux
température Nacl température
Nacl
Bactérie 1 mésophile Non mésophile Non
Halophile halophile
(E,coli)
Bactérie 2 Thermophil Halophile thermophil halophile
(Staphylococcie
s aureus)
Bactérie 3 thermophil Halophile thermophil Halophile
Pseudomonas
Bactérie 4 mésophile Halophile mésophile Halophile
Bacillus

 On a observe que les résultats expérimentaux

identique avec les résultats étudie

E,coli Staphylococcies

Bacillus
pseudomonas
II. Test mannitol
But :
il s’agit d’apprécier la mobilité de la bactérie dans
un milieu
Mode opératoire
 mesure 55 ,5g de mannitol par la
balance
 Mélanger le mannitol avec un 500ml d
eau distillé
 Mettez le mélange dans la plaque de
chauffage pendant 5mn
 Remplir les 4 tubes par 10ml de le
mélange
 Prend un échantillon de bactérie 3 par
l’anse après rincée l’anse Horizontalement
dans deux tubes
 La même chose avec les autres deux tubes
mais par la bactérie 4
 Incuber immédiatement les tubes à la
même température
Résultat

Bactérie 3
 prendre une couleur
jeune
 La distribution de la
bactérie dans le tub
Bacterie 4

 Prendre une couleur

rouge
 Assembler dans une
ligne verticale
 interprétation :

Bactérie 3
Lorsque le mélange prendre une couleur jeune
donc c est un mannitol
La distribution de la bactérie dans le tub donc
c’est mobile
Bactérie 4
Lorsque le mélange prendre une couleur rouge
donc c est un mannitol
L Assembler dans une ligne verticale
Représente que la bactérie est immobile

III. Coloration de gram :

But :
la coloration de base en bactériologie qui
permet de distinguer les bactéries en Gram
positif et en Gram négatif, cette distinction est
fondamentale pour leur identification
 Réactifs :

 -Violet de gentiane phénique-

 Lugol (iodo-iodure de potassium)
 -Alcool à 95% (ou mélange alcool absolu+
1/5
 èmed’acétone)
 Safranine (ou Fuchsine phéniquée de ziehl
Mode opératoire :
1* Réaliser un frottis et le fixer à la flamme
2*. Verser le Violet de Gentiane sur la lame ;
laisser en contact 1 minute
3.* Jeter le colorant et finir de la chasser par la
solution de Lugol ; laisser agir le Lugolenviron 1
min
4*. Jeter le Lugol et faire couler de l’alcool sur la
préparation ; rincer immédiatement àl’eau
5. *Recouvrir la préparation de Safranine, laisser
agir environ 1 min. lavé abondamment
.6.Sécher au dessus de la flamme d’un bec Bunsen.
 1 Prélever une partie
d’une colonie isolée

2 Réaliser un
étalement sur lame

3. Fixer à la chaleur

4. Réaliser les étapes de

coloration
Résultats :
A l’issue de cette coloration, on peut distinguer :-
Des bactéries colorées en violet foncé ; elles ont
gardé le violet, ‘le gram’ elles sont dites ‘Gram
positif’
Des bactéries colorées en rose ou rouge pâle ; elles
ont perdu le violet, ‘le Gram’ elles sont dites ‘gram
négative
 :
Ces travaux explique que chaque bactérie a des
conditions précis pour leur croissance exemple de
la cette séance on a étude l’influence de la
température et la concentration de Nacl sur la
croissance de 4 bactéries différents. et on a vu la
technique de coloration de base en bactériologie
qui permet de distinguer les bactéries en Gram
positif et en Gram négatif, cette distinction est
fondamentale pour leur identification, et après le
test de mannitol pour déterminer la mobilité des
bactéries