Université AMO de Bouira, Faculté SNVST Licence 3: Microbiologie

Département : Biologie Microbiologie Industrielle

Série de TPs (TP N°1)

« Initiation aux techniques de criblage d’antibiotiques »
Introduction :

La microbiologie industrielle se base sur l’utilisation des microorganismes pour obtenir

soit des substances chimiques ou bien une biomasse. Les molécules actives telles que
les antibiotiques sont l’une des molécules largement produites et commercialisées.
Cependant, avant de passer à la production des testes de vérifications et criblage de la
molécule active sont élaborés dans le laboratoire, afin de sélectionner la souche
productrice d’antibiotique et d’étudier la molécule active. C’est dans ce contexte que se
base notre TP.

Méthodologie à suivre

Les souches cibles (Productrice S1 et A1 et non productrice S2 et A2) sont

repiquées dans un flacon de 250ml contenant 20ml du bouillon nutritif, puis incubées à
37°C pendant 24 heures. D’autre coté une culture d’une souche de E Coli sensible est
préparée aussi dans un volume de 10ml.

1. Criblage directe sur boite pour la production d’antibiotique

a) Test d’activité antibactérienne par la méthode des puits

Le criblage d’antibiotique peut êtres vérifier par la méthode des puits décrite par Li et
al., 2003 (Modifié). Cette dernière consiste à ensemencer par inondation 1ml de la
souche de E Coli sur une boite de Pétrie contenant le milieu Muller Hinton, la boite
ensemencée est séché pendant quelques minutes. Aseptiquement, des puits de 9mm de
diamètre sont réalisés à l’aide d’une pipette Pasteur. Par la suite, un volume de 50μl de
chacune des souches ou le surnageant est déposé dans les puits. Et pour facilité la
diffusion des boites sont incubées à 4°C pendant une heure. Et enfin, les boites sont
incubées à 37°C pendant 24heures. Au terme de l’incubation, une mesure de la zone
d’inhibition est réalisée.

a) Test d’activité antibactérienne par la méthode du milieu solide

Selon Kekessy et Piguet (1970), la méthode utilisée se base sur la faculté des
bactériocines à diffuser à travers la gélose. Pour cela, des disques de gélose contenant
la souche à tester sont déposés sur des boites de Pétrie préalablement ensemencées
avec la souche cible. La méthode est illustrée dans le schéma ci-dessous. L’activité
antibactérienne se traduit par l’apparition de zones d’inhibition autour des disques d’agar.

NB :

 Un rapport doit êtres rédigé par chaque binôme et remit dans les délais au chargé
de TP.

Chargés de TP: Chargé du cours Mme K. DJENADI

2019/2020