Université des sciences et de la technologie MB-USTOU

Faculté des sciences de la nature et de la vie

Département vivant et environnement

Spécialité Microbiologie

--Nom et prénom: Tahar Yamina

-Groupe:6 (assistée au groupe 05)

-Sous groupe :1 (Kenza)

-Module: microbiologie alimentaire

Compte rendu du TP 01 :

Analyse microbiologique de la tomate conservé

-Recherche des staphylocoques

-L’objectif du Tp :

-Le but principal permet d’identifier la présence ou l’absence les micro-organismes pathogènes (ex :
staphylocoques) de la conserve du concentré de tomate  dans des conditions différentes. Puis, de
prononcer et d’expliquer l’origine de cette contamination pour analyser la microflore présente dans cet
aliment

-Manipulations réalisées :

Manip01 : -Préparation de la solution mère et les dilutions décimales

Manip02 : -maitriser la technique d’ensemencement (méthode de stries et en tapis)

-le dénombrement de germes pathogènes dans cet aliment (tomate conservé) permettre de juger la
qualité sanitaire de ce produit.

-ce nombre de germes de contamination pourra représenter l’état de fraicheur ou l’état de

décomposition du produit.

Année Universitaire : 2021/2022

 Introduction
- Le développement du procédé de conservation des aliments est confronté au traitement
thermique .Un conditionnement aseptique permettant de préserver au mieux l'intégrité des
composés nutritionnels. Il est mis au point des barèmes de stérilisation, couples temps-
température. L’objectif principal de ce travail est l’étude de la qualité microbiologique du
concentré de tomate, et l’évaluation de leur conformité à normes exigées.

Matériels utilisées :

 -Le matériel biologique :

-la tomate conservé et TSE (Tryptone Sel Eau)
 Matériels utilisée :
-bec bunsen -vortex -portoir -spatule-bêcher –balance-boites pétri stériles contenant la
(BP- Chapman-OGA) -tubes à essai -–crayon -étuve-pipette gradué - un anse de platine-
des embouts stériles.-pipette pasteur râteau –eau javel

Manipulation01:

 -1- Identification des staphylococcus :

1-Le test catalase : l’enzyme catalase sert à neutraliser les effets bactéricides du d’hydrogène il
accélère la décomposition du peroxyde d’hydrogène(H2o2) en eau et oxygène.
.
-Protocole :

-placez une lame de microscope sur un paillasse .

-à l’aide d’une anse de platine stérile flamber sous forme d’une boucle, prélevez une colonie
d’une culture des staphylococcus (milieu Chapman boite dilution 10-2 ) et placez-la sur la lame

-à l’aide d’une pipette pasteur stérile, on dépose 1goutte de H2O2 sur la colonie et on mélange .
 -Observation :
-la formation de bulles sur un fond sombre
améliore la lisibilité. Donc on a un catalase
positif(+) qui indique l’identification et la
confirmation de présence des staphylococcus.

- 2-1 préparation du frottis à l’état frais :

On a met une lame de microscope sur paillasse

puis-à l’aide d’une anse de platine stérile flamber
sous forme d’une boucle, on prélève une colonie
d’une culture des staphylococcus (boite dilution 10-
2 ) et placez-la sur la lame .après avec une pipette
pasteur stérile , on dépose 1 -2goutte d’eau distillé
sur la colonie on étale sur lame et on la renferme
par lamelle.

-l’observation se fait au microscope optique avec un

grossissement de (*400).

- 2-2 le séchage :

-en posant la lame dans l’air chaud au-dessus de la veilleuse d’un bec bunsen après le séchage, le
dépôt est fixé afin de tuer les microorganismes tout en permettant une bonne accroche sur la lame en
vue d’une future coloration.

- 2-3 Coloration au bleu de méthyléne

(coloration simple) :

- après la fixation on met la lame sur un support

en dépose des gouttes du colorant bleu de
méthylène pendant 1 à 2 min.

2-4 Elimination du colornt et le séchage sur une platine chauffante ou à l’air libre.

2-5 l’observation microscopique après la coloration : on utilise le microscope optique et réaliser

la mise au point pour l’étude morphologique de ces micro-organismes (staphylocoques) avec un
grossissement (*400) après on ajoute des gouttes d’huile d’immersion pour une observation nettes
et précises (*1000)
 La lecture:

-
Après

Observation microscopique des staphylocoques au bleu de méthylène

-L’observation microscopique montre que les staphylocoques sont des coques arrondis, en amas
(grappe de raisin) réguliers(les S.blancs sont souvent un peu plus volumineux que les S.dorés)
dépourvues de spores et présentent en capsule et la couleur bleu retourne au colorant bleu de
méthylène.

Manipulation02:

-Identification de levures et les

moissisures :

a- Levure : Préparation de frottis :

on dépose une lame sur un support puis àlaide

d’une boucle stérile on prèleve des colonies de la
boite sur milieu OGA(dilution 10-2) qui contient
les levures après sur le bord de la lamelle on
rajoute une goutes de solution iodée (Lugol)
( 2à3 min)

b- moissisures : Préparation du frottis :

on a dépose des colonies de la culture fongique

champignon de la boite de milieu OGA (dilution
10-2)à l’aide d’une boucle stérile après on rajoute
des gouttes du colorant bleu de coton au bord du
lamelle
Lecture des résultats :

-Recherche des Levure (Du Tp 02 sur milieu

OGA) :

a-Dénombrement : nous avons compté la boite OGA

de dilution 10-2(figure) :apparition des
colonies(jusqu’au 100 ) de taille petites  ;de couleur
blanchâtre qui retourne à des levures

Etude macroscopique des colonies :

Les caractères Forme taille couleur opacit consistanc contou surfac relief
organolyptique é e r e
s

Figure circulair petite blanchâtr opaque crémeuses régulier lisse bomb

e s e é

- Lecture de résultats après la coloration : - a-recherche des levures :

L’observation microscopique montre que les levure se présentent sous forme de cellules arrondies de
couleur blanchâtre brillantes, les taches brunes apparaissent dans les cellules sont des grains de
glycogène(substance de réserve que les levure fabriquent à partir du glycose).

Observation microscopique des levures

b- les moissisures :

Après coloration au Bleu coton lactique, on observe à l’état frais de longs conidiophores qui peuvent
porter plusieurs branches appelées métules.
 Observation microscopique des moisissures

-Résultats et interprétation :

-comptes tenu des résultats obtenus lors de notre étude ,nous observons La présence totale des germes
(levures et moisissures) .

-Levures : un nombre élevée de ces colonies de tailles petites et de couleur blanche sur le milieu solide
et sous l’observation microscopique on a fait l’etude morphologique car on observé dans les cellules
sont des grains de glycogène(substance de réserve que les levure fabriquent à partir du glycose).
Conclusion
-moissisure : on a vu sur milieu solide un aspect velouté et dur avec de tailles plus grandes que celles
des levures et sous l’observation microscopique A l’objectif *1000 (l’aide d’huile d immersion) on
peut noter la ramification du conidiophore suivie de plusieurs branches de métules qui, elles, portent
les phialides. Les phialides, qui sont des cellules conidiogènes, présentent l’aspect de bouteilles
allongées à l’extrémité des conidiophores; elles sont aussi appelées sporocystes, elles bourgeonnent et
libèrent les conidies

Les conidies sont rondes ou ovales, ce sont des exospores produites en continu à l’extrémité des
phialides.

et par la comparaison de notre boite(10-2) avec les autres groupe (3et4) on observe une différence de
nombre des germes(bactéries levure et moisissure ) dans chaque boite qui retourne à la manipulation
réalisé

Conclusion

-différentes germes sont criblés.la flore de contamination permet d’estimer la charge microbienne
totale du concentré, les staphylocoques levure et les moisissures témoignent l’apparition de
phénomènes d’altération, de décoloration ou de modification de la flaveur. Donc on conclure que
les analyses microbiologiques de l’échantillon dans ce travail ont montré la présence de germes
indice de contamination et des germes pathogènes et par conséquent l’aliment est de mauvaise
qualité hygiénique et ne répondent pas aux normes microbiologiques fixées par la
réglementation.