Université des Sciences et de la Technologie Houari

Boumediene (USTHB)

Faculté des Sciences Biologiques (FSB)

Département de Biologie Cellulaire et Moléculaire
(BCM)

Compte rendu du TP2 :

TP dosage des protéines par la méthode de
Bradford

Travaux pratique du module TAB

Licence L3 biochimie

- Réalisé par :

IZARIREN Ania Myriam

Année universitaire : 2022/2023

Introduction :
Dans un but de séparation et de dosage des protéines, une des méthodes les
plus utilisées est la méthode de Bradford basée sur les propriétés d’absorption
d’un complexe coloré formé par action d’un colorant hydrophobe (le bleu de
coomassie) sur les protéines.

But :
Nous avons tenté, durant ce TP, de réaliser avec le sérum d’albumine bovin SBA
comme protéine standard, une courbe étalon à six points de concentrations
croissantes et ce, afin de déterminer la concentration de deux dilutions de
sérum (S et S’)

Matériel utilisé :
• 7 tubes : 4 concentration + 1 témoin + 2 dilutions (S=1/1000 et S’=1/5000)
 Bécher
• 3 Micropipettes (1000μl/100μl, 75μl et 50 μl)
• BSA (Bovine Serum Albumin)
• L’eau distillée
• Réactif de Bradford (Bleu de Coomassie).
• Un vortex
• Spectrophotomètre à 595nm

Tubes V BSA (μl) V H2O (μl) V Bradford (ml)

1 0 100 2
2 25 75 2
3 50 50 2
4 75 25 2
5 100 0 2
Préparation des solutions :
- Nous préparons 5 tubes dans lesquels nous mettons : V (BSA) + V(H2O) = 1ml

- Dans les 2 tubes restants : 0,1 ml de sérum dilué (dans chaque tube)

- Après avoir fait passer les 7 tubes au vortex afin d’homogénéiser le contenu
de chaque tubes, nous les recouvrons afin d’empêcher toute entrée de
lumière.

- La prochaine étape consiste en l’ajout d’un volume égal à 2ml du réactif de

Bradford, on les laisses entreposer dans l’obscurité totale pendant 15 min.

- Mesure de densité optique à l’aide d’un spectrophotomètre réglé à une

longueur d’onde de 595 nm.

Après avoir mesuré la densité optique (DO) à l’aide d’un spectrophotomètre

réglé à une longueur d’onde de 595nm, on obtient les résultats suivants :

Tubes DO (BSA) (μg/ml)

1 0 0
2 -0.001 25
3 -0.014 50
4 0.006 75
5 0.029 100
S (1/1000) 0.439 /
S’ (1/5000) 0.146 /
Remarque : Nous n’avons pas réussi à dessiner le graphe avec nos propres valeurs en raison
des concentrations encore très faibles pour avoir une courbe correcte, alors on a utilisé les
valeurs d’un autre groupe avec autorisation de notre prof.

Les valeurs utilisées :

Tubes DO (BSA) (μg/ml)
1 0 0
2 0.042 25
3 0.14 50
4 0.298 75
5 0.378 100
Le graphe : (sur papier millimétrique)

Interprétation du graphe :
Le graphe représente la densité optique (DO) en fonction de la concentration
de la protéine BSA, on remarque que quand nous mettons 25μg de BSA la
densité optique représente 0.042 et plus la concentration de BSA augmente
plus la densité augmente.

Conclusion :
La méthode de Bradford est une méthode simple et très rapide, elle est basée
sur le changement d’absorbance
On utilise dans cette méthode le colorant bleu de coomassie qui se lie avec la
protéine et permet de les doser en solution par colorimétrie afin d’obtenir la
concentration des protéines en solutions.