UNIVERSITE HASSAN II CASABLANCA ANNEE UNIVERSITAIRE 2019/2020

FACULTE DES SCIENCES AIN CHOCK

DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

TRAVAUX DIRIGES DE TECHNIQUES CHIMIQUES

SERIE N°1

A- Citez les techniques qu’on pourrait utiliser pour extraire une protéine
cytoplasmique à partir d’un échantillon bactérien.

B- Si le protéines était d’origine animal nucléaire ?

C- Dans le but d’extraire une protéine d’un échantillon X, on a eu recours à une

technique d’extraction nécessitant un sonicateur à ultrasons suivi d’un
homogéniseur (potterisation), ce qui nous a permis d’obtenir la fraction A.

1. Quel est la nature de l’échantillon X ?

2. Quel est le nom de la fraction A et quelle est sa composition ?

3. Donner un autre Protocol qui nous permettra de fractionner cet échantillon X

D- Si notre protéine présente un pHi de l’ordre de 7,3, à quel pH de tampon

pourrions-nous mieux solubiliser notre protéine ? Expliquez.

E- Dans le but de déterminer la concentration en protéines d’une solution X d’un

échantillon plasmatique, on a réalisé une gamme étalon qui représente la
variation de la densité optique (DO) en fonction de la quantité en µg de la
protéine standard BSA/tube. La concentration de la solution de BSA est de
1mg/ml. Pour cela on a établi le tableau suivant dont on vous demande de le
compléter avec la quantité de BSA utilisée pour chaque tube en µg/tube.
Sachant que la gamme sera tracée sous la forme de DO en fonction de µg/tube.
Les 100 µl de l’échantillon X à doser ont été dilués 10 fois pour faire le dosage
de ce dernier.
Volume de 0 10 20 40 60 80 100 X
BSA en µl
Quantité de 100 µl
BSA en
µg/tube
Volume 200 190 180 160 140 120 100 100
d’eau
Réactif 800 µl
Bradford
D.O. 0 0,08 0,17 0,31 0,50 0,62 0,81 0,55

1. Tracer la gamme étalon

2. Déterminer la valeur de la pente de la courbe
3. En déduire la valeur de la concentration de l’échantillon X.
4. Sachant que le Bradford est un colorant utilisé spécifiquement pour les
protéines qui les colore en Bleu. Le dosage ainsi réalisé, est-il dans le domaine
de l’UV ou le visible ?