Spectrophotométrie UV-visible : Dosage du BM

Introduction.

Le bleu de méthylène (BM) est un composé organique utilisé en médecine ou

comme colorant. C'est un excellent désinfectant mais aussi un antiseptique à faible
action donc qui aura une action préventive contre les bactéries. Il est présent
dans le collyre « gouttes bleues ophtalmiques » qui sont des préparations
pharmaceutiques destinées à une application ophtalmique. Il est vendu en
pharmacie, droguerie et magasin de produits chimiques.
La problématiques de ce travail expérimental c’est comment pourriez‐vous
connaître, à partir d’un dosage spectrophotométrique, la concentration en BM
exprimée en g.L‐1 que contient une solution de ce collyre commercial ?

Principe de fonctionnement d'un spectrophotomètre.

Dans un spectrophotomètre, la solution contenant une espèce colorée est éclairée

par un faisceau considéré comme monochromatique de longueur d’onde λ choisie.
Pour chaque longueur d’onde choisie, l’appareil mesure une grandeur appelée
Absorbance à partir de la comparaison de l’intensité lumineuse mesurée après
l’échantillon colorée et de l’intensité lumineuse mesurée après un échantillon de
référence (le solvant en général). L’absorbance est un nombre sans unité.

Objectifs

1. Comprendre le principe de fonctionnement d’un spectrophotomètre.

2. Mettre en œuvre un protocole expérimental pour caractériser une espèce
colorée.
3. Exploiter un spectre UV-Visible.
4. Relier la couleur d’une espèce au maximum d’absorption d’une espèce
chimique
 Protocole expérimental

1. On se propose de tracer le spectre d’absorption d’une solution de BM. Après

démonstration du professeur, ces mesures seront réalisées à tour de rôle par chaque
étudiant. On procédera ainsi : faire varier λ de 400 à 800 nm par intervalles de 10
nm. Pour chaque λ, faire le blanc avec de l’eau distillée puis introduire la cuve
contenant la solution étudiée. Veiller cependant à respecter les consignes suivantes
: Ne pas laisser de gouttelettes sur les parois de la cuve (l’essuyer avant chaque
mesure) ; Refaire le blanc (A = 0) avant chaque mesure, donc pour chaque longueur
d’onde λ Consigner les résultats dans un tableau du type :

λ (nm)
A

2/ Préparation des solutions filles étalons à partir de la solution de bleu de

méthylène de concentration connue C0 = 10 mg. L–1. Le volume des solutions
filles à préparer est fixé à Vf =100,0 mL (le mélange sera fait dans des fioles
jaugées les volumes mesurés avec une pipette graduée).

Solutions Si S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S0
Facteur de dilution Fi 1
Volume V0
de S0 (mL)
Volume Veau
d’eau (mL)
Concentration C en bleu
(μmol · L–1)
Absorbance
Ai
Résultats et discussions.

1. Donner la formule moléculaire brute et développée du BM ainsi que son état

physique, sa masse moléculaire et sa solubilité dans l’eau.

2. Tracer la courbe représentant l’absorbance en fonction de la longueur d’onde ;

soit A = f(λ). Déterminer λmax correspondant au maximum d’absorption. En
déduire la couleur absorbée et comparer aux résultats précédents. Interpréter
alors la couleur de la solution.

3. Mesurer l’absorbance Ai des solutions et tracer la courbe d’absorbance Ai en

fonction des concentrations Ci des solutions filles en BM. Comment sont
qualifiées ces deux grandeurs ? Quel est le nom de la loi de
spectrophotométrie ainsi mise en évidence ? Exploitez les résultats pour
trouver la concentration en g.L‐1 et en mol.L‐1 en BM en solutions.

4. Expliquer simplement et qualitativement quel va être votre raisonnement pour

trouver la concentration en BM que contient une solution du commerce
«collyre» ? Proposez vos hypothèses au professeur quant à la préparation de
la gamme étalon et à l’utilisation du spectrophotomètre.