Corrections Exo analyse instrumentale

Exercice 1 : On realise sur une plaque CCM de 4 cm sur 9 cm le chromatogramme de trois

solutions : Sur la ligne de dépôt, situee a 1 cm du bas on pose une micro-goutte du colorant
E122, une autre du colorant E124 et la derniere d’un sirop de fraise a base de ces deux
colorants. On arre' te l’elution lorsque le front de l’éluant arrive a 1 cm du bord superieur de la
phase fixe.
Avec l’eluant donne, on determine les rapports frontaux de ces deux colorants :
Rf(E124) = 0,57 ; Rf(E122) = 0,70.
a) Calculer les hauteurs atteintes par les taches
b) Dessiner le chromatogramme obtenu en grandeur nature
c) Indiquer en legende les mots soulignes dans le texte

Correction 1:
d
a) Par definition : Rf = avec d : distance d’une tache a la ligne de depo' t et H : hauteur
H
atteinte par l’eluant depuis la ligne de depo' t.
d(E124) = Rf(E124) × H avec H = 7 cm
d(E124) = 0,57 × 7 d(E124) ≈ 4 cm
de me' me d(E122) = 0,70 × 7 d(E122) ≈ 4,9 cm

b) Schema

c) legende :

Exercice 2 :
On a realise la chromatographie de deux echantillons d’une reference. L’exploitation du
chromatogramme a fournit les resultats suivants :
- Front du solvant H= 8,0 cm
- echantillon A : deux taches situees a 3,0 cm et 4,0 cm de la ligne de base
- echantillon B une tache situee a 5,0 cm de la ligne de base
- reference le menthol M : Rf = 0,5
a) faire le schema du chromatogramme
b) La chromatographie a-t-elle mis en evidence des especes chimiques pures
c) Les echantillons A et B renferme t il du menthol

Modibo K Goita
 Correction 2:

a) il faut determiner la position de la tache de la reference ici

le menthol
h
a partir de son rapport frontal Rf = on en deduit h = Rf × H
H
soit pour la tache unique du menthol M h = 0,5 × 8,0 = 4,0 cm
Ce qui nous permet de construire le chromatogramme ci contre

b) Ces especes chimiques pures correspondent aux depo' ts

ayant donne qu’une seule tache apres elution M
est evidemment un corps pur ainsi que B

c) Le depo' t A donne une tache situee au me' me niveau que celle

issue de M cette tache est donc du menthol
Le depo' t a renferme donc bien du menthol

Exercice 3 : La figure ci-contre represente une plaque

de chromatographie apres revelation.
a) identifier les substances pures
b) Les depo' ts 1, 2 et 3 donnent naissance a des taches A, B et C
situees au me' me niveau

Correction 3:
a) Ce sont celles qui donnent naissance qu’a une seule tache
apres l’elution. Les depo' ts 3 et 4 sont donc a priori des corps purs
b) 1,2 et 3 renferment tous trois une espece chimique en commun
notee A sur le croquis 1 et 2 renferment tous deux une autre
espece chimique en commun notee B sur croquis
1 et 4 renferment tous deux une autre espece chimique
en commun notee C sur le croquis

on peut dire aussi que 1 et 2 renferment l’espece pure 3

et que 1 renferme l’espece pure 4

Exercice 4 : Le chromatogramme ci-dessous a ete obtenu en chromatographie liquide a

polarite de phase inverse
Les conditions operatoires sont les suivantes.

Longueur de colonne : 10 cm Temperature: 20°C

Debit : 1ml/min Teneur en methanol : 35 %

Modibo K Goita
 On rappelle que si les pics sont gaussiens ( se que l’on supposera)
on a ω0/ω½ = 1,70 (rapport des largeurs à la base et à mi-hauteur)

Le tableau des resultats est le suivants :

Nom du solute Temps de retention reduit Largeurs a mi-hauteur W½
t’r(s) (s)
uracile 28 10,9
phenol 141 13,1
Alcool benzylique 158 13,4
2-phenyle-ethanol 282 15,8
Benzoate de benzyle 341 16,9
Methylphenidate 519 20,4

1ère question

1 a) Indiquez les composes qui ne sont pas correctement separees.

1 b) Toutes choses egales par ailleurs, quelle serait la resolution entre le phenol et l’alcool
benzylique si vous utilisiez une colonne de 25 cm ?
Conne calculs intermediaires, vous determinez pour les 2 composes le nombre de plateaux
(theoriques ou effectifs), leurs temps de retention (tr et t’r), leur largeur a mi-hauteur de
chaque pic pour les 2 longueurs de colonne.
1 c) Donnez l’allure des 2 pics les moins bien separees avec la colonne 25 cm.
1 d) Calculez le temps de retention du dernier composes (methylphenidate) et la pression en
te' te, avec la colonne de 25 cm.

Modibo K Goita
2ème question

En chromatographie en phase liquide, le facteur de capacite est relie a la teneur en solvant

organique par une relation de forme : ln(k’) = a.ln(Xs) + b
avec Xs fraction volumique du solvant.
En reprenant les conditions operatoires d’origine (colonne de 10 cm), mais pour une teneur
de 20 % en methanol, le facteur de capacite de l’alcool benzylique est egal a 6 et sa largeur a
mi-hauteur est egale a 15,2 s :
pour une teneur en alcool a 28 % :

2 a) calculez le temps de retention reduit et l’efficacite de l’alcool benzylique

2 b) calculez l’efficacite de l’alcool benzylique en supposant que l’efficacite est une fonction
lineaire du temps de retention.

3ème question

Proposez 3 solutions pour optimiser l’analyse (R = 1,5 et temps d’analyse court). Dites sans
faire de calcul, pourquoi vous envisagez cette modification et quels effets elle va provoquer.

Correction 4:

1ère question

1 a) Le chromatogramme montre que 2 composes ne sont pas separees. Ce sont le phenol et

l’alcool benzylique. Le signal ne retourne pas a la ligne de base.
1 b) Toutes choses egales par ailleurs, si vous utilisiez une colonne de 25 cm quelle serait la
resolution entre le phenol et l’alcool benzylique ?

Nous partons de l’equation suivante. N eff =5,54 ⋅ ( )t r −t m 2

ω1 /2 ( )
=16 ⋅
tr − tm 2
ω0
dans les donnees nous avons ω 1/ 2et non pas ω 0, t’r et non pas tr

 Nous allons calculer l’efficacite et la HEP T du phenol et l’alcool benzylique sur la

colonne de 10 cm.
Comme les autres conditions analytiques ne changent pas d’une colonne a l’autre, la HEPT
reste constante pour chaque composes. On en deduira la largeurs a mi-hauteur de chaque pic,
on calculera alors la resolution avec la nouvelle colonne.

( )
t −t 2
N eff phénol=5,54. r m =5,54
ω0 ( )
141 2
13,1
=642 plateaux sur la colonne de 10 cm.

La Hauteur equivalente a un plateau theorique (HEP T) est H = L/N d’ou N 1 = H.L1 et N2 = H.L2
donc
25
642 x =1605 plateaux sur la colonne de 25 cm.
10

(
N eff alcool − benzylique=5,54. )
t r − tm 2
ω 1/ 2 ( )
=5,54
158 2
13,4
=770 plateaux sur la colonne de 10 cm.

25
770 x =1925 plateaux sur la colonne de 25 cm.
10
Il etait possible de faire le me' me type de calcul pour les nombres de plateaux theoriques. Sur
la colonne de 10 cm :
Nth phenol = 1069 plateau
Nth alcool benzylique = 1222 plateau

Modibo K Goita
En theorique, lorsque la longueur de la colonne change, les k’ des composes restent
identiques. Par contre, le temps mort est directement fonction de la longueur de la colonne
(volume mort a l’interieur de la colonne).

25
t m 10 =41 s ,t m 25 =41 x
=102,5 s
10
pour 10 cm k ' phénol=
141
41 ( )
=3,439 k ' alcool −benzylique =
158
41
=3,854

pour 25 cm t ' r phénol =3,439 x 102,5=352 st ' r alcool benzylique =3,854 x 102,5=395 s

on en deduit la largeur a mi-hauteur des pics et leur resolution.

 Pour la colonne de 25 cm
N eff phénol=5,54.
352,5 2
ω1/ 2 ( )
=1605 plateau d’ou ( ω 1/ 2 phénol )2=
5,54
1605
. ( 352,5 )2=428,9

ω 1/ 2 phénol =20,7 sω 0=20,7 x 1,7=35,2 secondes

( )
N eff alcool benzylique=5,54.
395 2
ω1/ 2
=1925 plateaux

2 5,54
d’ou ( ω 1/ 2 alcool benzylique ) = . (395 )2=449 ( ω 1/ 2 alcool benzylique )2=21,2 secondes
1925
( tr B −tr λ ) (395 −352,5 )
ω 0=21,2 x 1,7=36 secondesR=2. R=2. =1,20
( ω0 B +ω0 B ) ( 35,2+36 )
autre solution :
pour la colonne de 10 cm, pour les 2 composes etudies :
( 158− 141) R 225 N 25
R=2. =0,75 or R est proportionnel a √ N =
( 1,7∗ ( 13,1+13,4 )) 2
R 10 N 10

1 c) l’allure des 2 pics les moins bien separees avec la colonne de 25 cm

R = 1,20

1 d) avec la colonne de 25 cm, le temps de retention du dernier composes (dimethylphtalate)

et la pression en te' te.
Nous avons vu dans la premiere question le principe.
Nous ecrivons « dimethylphtalate » DMP.

tm10 = 41 s, tm25=41x (25/10) = 102,5 s

' 519
pour 10 cm k DMP= =12,66
41

Modibo K Goita
Pour 25 cm t 'r DMP =12,6 x 102,5=1291,5 → t r DMP=1291,5+102,5=1394 s
 que deviendrait la pression en te' te de la colonne
Toutes choses egales par ailleurs, la pression est directement proportionnelle a la
longueur de la colonne d’apres la loi de DARCY.
25
P25 =P10 . =69.2,5=172,5 bars
10

2ème question

En chromatographie en phase liquide ? Le facteur de capacite est relie a la teneur en solvant

organique par une relation de forme : ln(k’)= a.ln(Xs) + b

avec Xs fraction volumique du solvant (teneur) divisee par 100).

2 a) Calculez le t’r et l’efficacite de l’alcool benzylique pour une teneur en methanol de 28 %
en supposant que l’efficacite est une fonction lineaire du temps de retention.
Alcool benzylique AB
20 % en methanol k’ = 6½ = 15,2s.
35 % en methanol k’ = 3,854½= 13,4s
2 equations, 2 inconnues a et b.
ln ( 6 )=a . ln (0,2 ) +beq(1)
ln ( 3,854 )=a . ln ( 0,35 )+beq(2)
b=ln ( 6 ) − a . ln ( 0,2 )

en faisant eq(1)-eq(2)

a=
[ ln (6 ) − ln ( 3,854 ) ]
a=−0,790 b=+0,520
[ ln ( 0,2 ) − ln ( 0,35 ) ]
ln ( k ' )=− 0,79. ln ( Xs ) +0,52
verifications : ln ( 6 )=− 0,79.ln ( 0,2 )+ 0,52 ln ( 3,855 )=1,349=− 0,79. ln ( 0,35 )+ 0,52
A 28 % de methanol,
ln ( k ' )=− 0,790. ln ( 0,28 )+ 0,520 ln ( k ' )=1,526 k ' =4,598

t rAB =t m . (1+ k ' ) . ( 1+ 4,598 )=230 st ' rAB =188 s

2b) Efficacite :
A 35 % tr= 182s Neff = 770 plateaux
A 20 % tr= tm.(1+k’) = 41.(1+6)=287s
Neff=5,54.(41.6/15,2)²=1451 plateaux.
N eff =c . t r +d
2 equations, 2 inconnues

770=182. c +d .1451=287 c +d
d=770 − 182c
1451− 770=( 287 −182 ) . c
c=+ 6,67 d=− 445. N eff =6,67. t r − 445
A 28 % t rAB =230 s donc N eff =1086 plateaux

Modibo K Goita
3ème question

Plusieurs modifications peuvent entraî'ner une amelioration de la separation.

 L:
Nous avons vu que l’allongement de la colonne ameliore la separation mais on peut
difficilement aller au-dela de 30 cm de colonne dans des conditions normales
d’analyse. Dans ce cas, le temps d’analyse augmente, la pression en te' te de colonne
augmente.
 Dp :
En diminuant le diametre des particules la surface de partage augmente, ce qui
ameliore la finesse des pics. Le temps d’analyse varie peu, par contre la pression
augmente.
 %methanol
suivant les composes, en modifiant la teneur en methanol, il est fort probable que la
separation s’ameliore. A priori on ne peut pas dire si il faut diminuer ou augmenter la
fraction volumique. Si on diminue la teneur en methanol, le temps d’analyse augmente.
 Changer de solvant organique
en changeant de solvant (methanol pour de l’acetonitrile ou du tetrahydrofuranne, il
est probable que la separation s’ameliore.
 Modification du debit
en general, a un debit de 1ml/min, on se trouve sur la pente montante de la courbe de
Van Deemter. En diminuant un peu le debit on diminue la HEPT, on ameliore la
separation. Mais le temps d’analyse augmente.
 Gradient d’elution
dans le cas de cette analyse, en commençant avec une faible teneur en methanol (10%)
puis apres quelques minute on augmente la teneur pour diminuer le temps d’analyse,
une fois que les composes limitant la separations ont ete separes

Exercice 5 : On determine les temps de retention (tr) au cours d'une chromatographie sur
Sephadex, des proteines suivantes dont on connaî't la masse moleculaire (MM) (Le debit de la
colonne est de 5 ml / min) :
MM tr/(min)
Aldolase 145000 10,4
Lactate deshydrogenase 135000 11,4
Phosphatase alcaline 80000 18,4
Ovalbumine 45000 26,2
Antiglobuline 37100 28,6

1 - Calculer les volumes d'elution (Ve) correspondants. Porter le log de MM en fonction de Ve -

Que remarquez-vous ?

2 - Pour la glucanase, tr = 21 min. Determiner sa masse moleculaire a l'aide du graphique

precedent. Existe t'il une autre methode pour determiner la MM ?

Correction 5:
1- Cet exercice met en jeu une chromatographie d’exclusion (encore appelee:tamisage
moleculaire, gel filtration, permeation de gel). La connaissance du debit de la colonne (5ml/
min) et des differents temps de retention nous permet de calculer le volume d’elution pour
chaque compose, selon la relation :
Ve (volume d’elution) = d (debit) x tr (temps de retention)
Modibo K Goita
La representation graphique du log de la masse moleculaire (log MM) qu’il faut calculer
prealablement en fonction du volume d’elution (Ve) nous donne une droite :

MM Log MM tr/ Ve (ml)

(min)
Aldolase 145000 5,16 10,4 52
Lactate deshydrogenase 135000 5,13 11,4 57
Phosphatase alcaline 80000 4,9 18,4 92
Ovalbumine 45000 4,65 26,2 131
Lactoglobuline 37100 4,57 28,6 143

Le fait de visualiser une droite signifie qu’aucune proteine n’est exclue du gel.
2 – La glucokinase, avec un temps de retention de 21 min, est eluee a un volume d’elution de
5x21 = 105 ml. Il suffit de se reporter au graphe pour determiner un log de MM = 4,82 environ,
soit une masse moleculaire de 66070 Da (ou 66070 g/mol ou 66,7 kDa), environ.
Ici, on a trace le logarithme de la masse moleculaire en fonction du volume d’elution :
log MM = f(Ve).
L’autre representation serait de porter le logarithme de la masse moleculaire en fonction du
KAV, le coefficient de partage entre la phase liquide et la phase gel:log MM = f(K AV).

KAV = (Ve – Vm) / (Vt – Vm)

mais pour cela il faudrait connaî'tre le volume mort Vm et le volume total de la colonne Vt.

Exercice 6 : Un melange de trois acides amines : Asp (pHi = 2,87), Arg (pHi = 10,76) et Leu
(pHi = 6), est soumis a une chromatographie sur colonne echangeuse de cations. L'elution est
effectuee a l'aide d'un tampon a pH = 6.

Question :

1 - Dans quel ordre peut-on prevoir la sortie de ces acides amines ?

Correction 6:
Un melande de trois acide amines : Asp (Phi =2,87), Arg (phi = 10,76) et Leu (phi = 6), est
soumis a une chromatographiesur colonne echangeuse de cations. L’ elution est effectuee a
l’aide d’un tampon a ph = 6.

Si les trois acides amines ont ete retenus sur la colonne, c’est que la charge de la colonne a ete
realisee a un ph inferieur au plus petit des phi, soit un ph inferieur a 2,87 afin que les AA se
presentent sousforme chargee positivement etqu’ils puissent e' tre retenus sur la resine
echangeuse de cations, chargee negativement.

Modibo K Goita
 Acide Amine: Phi: Charge a ph < 2,87 Charge a ph 6
Asp 2,87 + -
Leu 6 + Neutre (50%/50%)
Arg 10,76 + +

A un ph de 6, Asp est charge negativement, il est donc elue de la colonne. La leucine est ensuite
elue. L’Arginine, toujours chargee positivement a ph = 6 reste sur la colonne et n’est donc pas
eluee.

Exercice 7 : La carboxymethylcellulose (CM-cellulose) est un support echangeur de cations.

Elle est obtenue en substituant la cellulose par des groupements carboxymethyls (-
CH2COOH).

Questions : 1 - Quelle est la proportion des groupements carboxymethyls charges

negativement aux pH suivants : 1 ; 4,76 ; 7 et 9 (on considerera que le pKa du groupement
carboxyl des radicaux carboxymethyls est 4,76).

2 - Parmi les proteines suivantes : Ovalbumine (pHi = 4,6), Cytochrome c (pHi = 10,65) et
Lysozyme (pHi = 11), quelles sont celles qui sont retenues par la CM-cellulose a pH 7 ? (On
considerera que les interactions proteine CM-cellulose sont uniquement d'ordre
electrostatiques).

Correction 7:
1 – Proportion des groupements carboxymethyls (pKa = 4,76) charges negativement aux PH :
1 ; 4 ,76 ; 7 et 9.
Le PH est donne par la relation suivantes :

A pH = 1 : = pH – pKa = 1 – 4,76 = - 3, 76 donc : = 1,74 10-4

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 1,74 10-4 .(A),
on en deduit que (A) + 1,74 10-4.(A)= 100
(A) est mis en facteur : (A) = 100/(1 + 1,74 10-4)

on peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 99,98 % et (B) = 0,02 %

A pH = 4,76 : = pH – pKa = 4,76 – 4,76 = 0 donc : =1

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = (A), on en deduit que (A) + (A)= 100
(A) est mis en facteur : (A) = 100/(2)

on peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 50 % et (B) = 50 %

Modibo K Goita
A pH = 7 : = pH – pKa = 7 – 4,76 = 2,24 donc : = 173,78

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 173,78 .(A), on en deduit que (A) + 173,78.(A)=
100
(A) est mis en facteur : (A) = 100/(174,78)

on peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 0,575 % et (B) = 99,425 %

A pH = 9 : = pH – pKa = 9 – 4,76 = 4,24 donc : = 13378

Sachant que (A) + (B) = 100 % et que (B) = 13378 .(A), on en deduit que (A) + 13378(A)= 100
(A) est mis en facteur : (A) = 100/(13379)

on peut ainsi calculer le pourcentage des formes (A) et (B) : (A) = 5,73 10-3 % et (B) =
99,994 %

Globalement, on peut donc constater qu’a un pH inferieur au pKa (pH acide), les groupements
carboxymethyls se presenteront majoritairement sous forme acide (-CH 2-COOH).
A l’inverse, a un ph superieur au pKa (ph basique), les groupements carboxymethyls se
-
presenteront majoritairement sous forme basique (-CH2-COO ).

2 – A ph = 7, on a pu calculer que la resine etait a 99,425 % sous forme basique, chargee

-
negativement (-CH2-COO ).

Protéine: PHi: Charge à ph = 7:

Ovalbumine 4,6 negative

Cytochrome c 10,65 positive
Lysozyme 11 positive

Ainsi, seule l’ovalbumine, qui a PH = 7 est chargee negativement, ne sera pas retenue par la
colonne. Le cytochrome c et le lysozyme seront retenus.

Exercice 8: Le coefficient de partage de l'iode (I2) entre les deux solvants non-miscibles :
tetrachloromethane et eau, est egal a 100 a 25 °C. AZ 10 ml de solution aqueuse d'iode a 10 g/l,
on ajoute 10 ml de tetrachloromethane (CCl4).

Donnee : I2 est plus soluble dans le tetrachloromethane que dans l'eau.

Question : Determiner la concentration en iode dans le tetrachloromethane et dans l'eau,

apres agitation et decantation.

Modibo K Goita
 Correction 8:
Coefficient de partage de l’iode dans le tetrachloromethane et l’eau.
D’apres les donnees de l’exercice, on peut ecrire les deux egalites suivantes :

on peut en deduire que :

Concentration dans le tetrachloromethane (solvant organique) = 9,9 g/l

Concentration dans l’eau (solvant aqueux) = 0,099 g/l

Exercice 9 :
Deux especes chimiques, A et B sont separees par chromatographie gazeuse isotherme, a
l’aide d’une colonne de 2,00 m ayant 5000 plateaux theoriques au debit de 15,0 ml/min.

Le pic de l’air non absorbe apparaî't au bout de 30 s ; le pic de A apparaî't au bout de 5 min et
celui de B au bout de 12 min.
(a) Calculer le volume mort VM de la colonne, et les volumes de retention VA et VB ?
(b) Calculer les volumes reduits V’A et V’B ?
(c) Calculer les coefficients de retention k’A et k’B ?
(d) Quelles sont les largeurs a la base des pics A et B ?
(e) Quelle est la valeur de H pour cette colonne ?
(f) Determiner la valeur de la selectivite α de cette separation ?
(g) Calculer la resolution R de la separation ?
(h) Commenter brievement les valeurs de k’ et de R ?

Correction 9:
(a) Formule Vi = ti . D
VM = 0,5.15 = 7,5 ml, VA = 5.15 = 75 ml, VB = 12.15 = 180 ml

(b) Formule V’i = t’i . D soit V’i = Vi – VM

t’A = 5 – 0,5 = 4,5 min, t’B = 12 – 0,5 = 11,5 min
V’A = 4,5.15 = 67,5 ml et V’B = 11,5.15 = 172,5 ml
Ou V’A = 75 – 7,5 = 67,5 ml et V’B = 180 – 7,5 = 172,5 ml

Modibo K Goita
 (c) Formule tR = tM(k’+1) ou k’ = t’R/tM
k’A = 4,5/0,5 = 9 et k’B = 23

(d) Formule N = 16 (tR/ω))2 donc ω) = 4 . tR/√N

ω)A = 4 . 300/√5000 = 17,0 sec et ω)B = 4 . 720/√5000 = 40,8 sec

(e) Formule H = L/N

H = 200/5000 = 0,04 cm/plateau

(f) Formule α = t’B/t’A = k’B/k’A

α = 11,5/4,5 = 23/9 = 2,56

(g) Formule R = 2 (tB – tA)/(ω)B+ω)A)

R = 2 (720 – 300)/(40,8+17,0) = 14,5

(h) Pour k’ les valeurs sont elevees. Composes retenus donc temps de retention long et
surement elargissement des pics.
Valeur de R tres importante. La resolution de la separation est tres bonne, mais le
compromis entre le temps de retention et la resolution n’est surement pas optimise. Il est
preferable de baisser le temps d’analyse et de perdre un peu en resolution.

Exercice 10
Un melange de six iodures d’alkyle est separe par chromatographie gazeuse a l’aide d’une
colonne remplie de poudre de brique refractaire enrobee d’huile de silicone (longueur L = 365
cm). La colonne est chauffee de telle sorte que sa temperature croisse lineairement durant
toute l’operation. Le tableau donne les resultats releves.
Temperatur Surface
Pic Identite tR (min) ω) (min)
e (°C) (cm2)
1 Air tM = 0,5 Petite 55 Petite
2 CH3I 6,60 0,55 100 13,0
3 C2H5I 9,82 1,00 127 12,0
4 Iso-C3H7I 11,90 1,04 139 10,0
5 n-C3H7I 13,04 1,08 148 7,2
6 CH2I2 19,10 1,60 193 2,0

(a) Calculer la resolution entre les pics 2-3, 3-4, 4-5, 5-6 ?
(b) la separation vous convient elle ?
(c) Quelle longueur de colonne aurait il fallu pour que la resolution des pics 4 et 5 ait ete de R’
= 1,5 ?
Correction 10 :
(a) Formule R = 2 (tB – tA)/(ω)B+ω)A)
R2-3 = 2 (9,82-6,6)/(0,55+1) = 4,15
R3-4 = 2 (11,9-9,82)/(1+1,04) = 2,04
R4-5 = 2 (13,04-11,9)/(1,04+1,08) = 1,08
R5-6 = 2 (19,1-13,04)/(1,6+1,08) = 4,52
(b) Les pics 4 et 5 sont mal resolus.
(c) Comme R est proportionnel a √L, alors, R’/R = √(L’/L)
Ainsi, (1,5/1,08) = √(L’/365) L’ = 365.(1,5/1,08) 2 = 704 cm

Modibo K Goita
Exercice 11 :
Le chromatogramme suivant a ete obtenu pour un melange de chaî'nes droites
d’hydrocarbures : CnH2n+2. Le pic M est du' a un corps non absorbe ; le pic A est celui de C3H8 ; le
pic F est celui de C20H42. La colonne mesure 120 cm de longueur et est utilisee a temperature
constante avec un debit de gaz de 50,0 cm 3/min. On trouve les donnees concernant les temps
de retention et la largeur des pics dans le tableau 12-2.

ω (s)s))

(a) Trouver le nombre de plateaux theoriques NA en se basant sur le pic A ?

(b) Pour le mesurage decrit precedemment, la vitesse lineaire moyenne a ete optimise
suivant l’equation de Van Deemter. u^ = 13,7 cm/min.
Donnees : Terme de remplissage A = 0,0032 cm
Terme de diffusion longitudinale B = 0,150 cm2/min
Transfert de masse C = 8.10-4 min
Quelle est le nombre de plateaux theoriques pour la colonne utilisee a la vitesse lineaire
moyenne optimum ?
(c) Calculer la resolution entre les pics B-C, D-E ?
(d) Quelle longueur de colonne aurait il fallu pour que la resolution des pics B et C ait ete
de R’ = 1,5 ?
(e) En deduire la nouvelle resolution des pics D et E ?
(f) Determiner le tR de F sur une colonne de longueur determinee au (d) et conclure ?
Correction 11:
(a) Formule N = 16 (tR/ω)) 2

NA =16 (60/9)2 = 711 plateaux

(b) H = 0,0032 + (0,150/13,7) + (8.10-4)(13,7) = 0,025 cm
D’ou N = 120/0,025 = 4800 plateaux
(c) Formule R = 2 (tB – tA)/(ω)B+ω)A)
RB-C = 2 (110-100)/(15+16,5) = 0,63 mal resolus.
RD-E = 2 (165-140)/(21+24,75) = 1,09 mal resolus.
(d) Comme R est proportionnel a √L, alors, R’/R = √(L’/L)
Ainsi, (1,5/0,63) = √(L’/120) L’ = 120.(1,5/0,63) 2 = 680 cm
(e) On peut deduire RD-E avec une colonne de 680 cm
Ainsi, (R’/1,09) = √(680/120) R’ = 2,6
(f) On a tR = 235 sec = 3,9 min sur une colonne de 120 cm
Ainsi, sur une colonne de 680 cm, tR = 235.(680/120) = 1331,7 sec tR = 22,2 min
Trop long donc peut e' tre changee la nature de la colonne.

Modibo K Goita
Exercice 12 :
Un melange d’alkyles de bromes est separe par CPG. Les parametres de la colonne sont : L
= 150 cm, T = 140°C, gaz vecteur He, debit = 20 cm 3/min, detection FID. Le
chromatogramme a ete obtenu avec un melange de composition inconnue, neanmoins, on
sait que le pic F est du' a du n-C5H11Br. Le tableau resume les donnees pour les differents
pics.

ω (s)s))

(a) Quelle peut e' tre la longueur de la colonne minimale pour que les pics D et E puissent
e' tre resolus avec moins de 1% de recouvrement ?
(b) Determiner le nombre de plateaux theoriques N, pour les pics B, C, D, E et F ?
(c) Commenter la valeur de NC ?
Correction 12 :
(a) Formule R = 2 (tB – tA)/(ω)B+ω)A)
RD-E = 2 (1222-1029)/(68,6+81,5) = 2,57
Or R est proportionnel a √L et une separation avec un recouvrement de 1 % correspond a
une R = 1,5
Alors, (1,5/2,57) = √(L/150) L = 51 cm
(b) Formule N = 16 (tR/ω))2
NB = 16(177/11,8)2 = 3600 plateaux et Nc = 3030 ; ND = 3600 ; NE = 3600 ; NF = 3600
(c) Le pic C a la plus petite valeur de N. Il est probable qu’il corresponde a un melange non
separe de deux alkyles de brome ou plus (un pic non resolu doit avoir une valeur plus grande
de ω) et un N plus faible).

Exercice 13 :
Le methyl 2,5-dihydro-2,5-dimethoxy-2-furancarboxylate est le produit d'electrolyse du
methyl-2-furoate dans le methanol. Dans le cadre d'une etude de cette reaction, on veut
identifier les signaux chromatographiques correspondant a ces composes. Une solution
contenant ces deux produits commerciaux est analysee par chromatographie en phase
gazeuse, dans une colonne Carbowax (polyethylenglycol). Les chromatogrammes suivant
correspondent a differents programmes de temperature.

Modibo K Goita
A

C
D

T0 = 100°C/1min; 8°C/min; T1 = 200°C/3min

T0 = 100°C/1min; 15°C/min; T1 = 200°C/3min

Modibo K Goita
 T0 = 100°C/1min; 20°C/min; T1 = 200°C/3min

Formule :

Methanol : CH3OH
Methyl-2-furoate :

Methyl 2,5-dihydro-2,5-dimethoxy-2-furancarboxylate (melange cis et trans) :

(a) Identifier les principaux pics

(b) Pour chaque chromatogramme, calculer les temps de retentions reduits de chaque
compose, ainsi que les facteurs de selectivite entre B et C et entre C et D.
c) Expliquer l'influence de la rampe de temperature sur la separation.
Correction 13:
(a) A: methanol, B: methyl-2-furoate, C et D: methyl 2,5-dihydro-2,5-dimethoxy-2-
furanecarboxylate (2 configurations spatiales possibles)

(b)
Modibo K Goita
(c) Plus la rampe est lente, plus la separation est bonne ???

Modibo K Goita