AT de Microbiologie TS1 ABM

AT 11 – IDENTIFICATION PAR MICROGALERIE DE

BACILLES GRAM - OXYDASE - NON EXIGEANTS

OBJECTIFS
 Analyser les différentes réactions intervenant dans l'identification biochimiques des bacilles
Gram - oxydase - non exigeants.
 Ensemencer et lire une microgalerie d'identification biochimique.

COMPÉTENCES

C1.1.1 Inventorier et quantifier les moyens techniques nécessaires

C1.2.1 Présenter et ordonner des résultats
C1.2.3 Valider des résultats
C3.4.2. Réaliser les examens macroscopiques et microscopiques sur l'échantillon biologique
ayant subi ou non un traitement préalable
Interpréter les observations réalisées
C3.4.4 Réaliser un isolement
C3.4.5 Mettre en œuvre une démarche d’identification

QUESTIONS PRÉLIMINAIRES

Q1.Indiquer le caractère permettant de distinguer formellement les genres Acinetobacter et

Stenotrophomonas des bactéries de la famille des Enterobacteriaceae.

Analyse de la fiche technique de la galerie API 20 E (voir la notice de la galerie sous format
électronique ou dans le document "identification" disponible au laboratoire) :
Q2.Préparation de l'inoculum pour ensemencer la galerie API 20 E :
Schématiser la préparation de la suspension inoculum servant à ensemencer la galerie API
20E. (Attention au laboratoire du lycée, il n’y a pas de tube de 5 mL mais des tubes de 9 mL
d’eau physiologique !).

Q3.Validation technique de la galerie : Proposer deux cas empêchant de procéder à la lecture

de la galerie API 20E après 24h d'incubation.
Q4.Lecture des caractères ADH, ODC, LDC :
a. Sachant que l'indicateur de pH situé dans ces cupules est le rouge de phénol et par
analogie avec les bouillons de Moeller de la macrogalerie, expliquer ce qui se passe dans la
cupule LDC pour une bactérie ne possédant pas de LDC (réaction dans la cupule pendant
l'incubation et résultat obtenu après 24h d'incubation).
b. Faire de même avec une bactérie LDC +.
Q5.Lecture des caractères TDA (tryptophane désaminase) et IND (indole) :
a. Indiquer quel substrat est indispensable dans ces cupules pour révéler ces caractères.
b. Nommer l’enzyme recherchée dans la cupule IND.
Q6.Lecture de la cupule GEL (recherche de la gélatinase) : Sachant que cette cupule contient
des petits sacs de gélatine contenant de la poudre de charbon, expliquer les résultats
attendus pour une bactérie possédant une gélatinase et pour une bactérie n'en possédant
pas.

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Q7.Lecture de l'utilisation des glucides (cupules GLU à ARA) : Sachant que l'indicateur de pH
est le bleu de bromothymol, expliquer la couleur obtenue pour une cupule positive et celle
obtenue pour une cupule négative.
Q8. Lecture de l'utilisation des nitrates par une nitrate réductase :
a. Cette lecture se fait dans la cupule GLU de la galerie. Indiquer les substrats déshydratés
que doit contenir au minimum cette cupule au départ.
b. Citer les réactifs permettant de mettre en évidence une production de nitrites (NO2-) dans
cette cupule.
c. En l'absence de nitrites révélés par ces réactifs, indiquer le réactif à ajouter et son rôle pour
rechercher la présence de nitrates (NO3-) non transformés dans cette cupule.
d. Présenter le résultat de chaque étape de la lecture pour une souche possédant une nitrate
réductase qui réduit les nitrates en diazote (N2).