Partie microbiologique

Échantillonnage (NA 762- 1990) 

L’échantillonnage destiné à l’analyse microbiologique est prélevé de façon à être plus

exactement possible représentatif du milieu d’où il provient. Pour mener à bien recherches
bactériennes, le service de laboratoire de SARL Mont Djurdjura effectue des analyse sur des
échantillon d’eaux propres qui arrivent au cours de la journée dans des bouteilles en plastique (
produit fini de la 0.5L, 5L, 19L, 1.5L et les gobelets ) et le prélèvement au hasard d’une façon
systématique pur avoir un échantillon présentatif.

L’échantillonnage doit avoir lieu en présence de témoins représentant les parties intéressées.

Pour chaque gamme on prélève 5 échantillons et pour chaque échantillon on fait les mêmes
étapes d’analyses

Le produit fini a était analysé dans des conditions stériles et aseptiques au sein de laboratoire
de l’entreprise.

Plan d’analyse

L’eau de source a été analysée à partir des prélèvements effectués. Juste un type d’analyse qui
a été effectué : microbiologique.

Analyses microbiologiques

Une analyse microbiologique de l’eau est indispensable pour garantir et s’assurer de l’efficacité
de traitement vis-à-vis des germes ci-dessous

 Les coliformes totaux.

 Escherichia coli.

 Les Entérocoques intestinaux.

 Pseudomonas aeruginos.

 Des anaérobies sulfito-réducteurs.

Recherche de coliformes totaux et Escherichia coli (NA ISO 9308-1) (NA 764 : 2015)

 Milieux de culture et réactifs :

 Gélose chromogène pour bactérie coliforme (CCA), il y’a une autre méthode de
dénombrement avec le milieu de TTC térgitol et le milieu de confirmation TSI.
 Filtration :
Filtrer 250 ml pour l’eau embouteillée à analyser sur une membrane filtrante (0.45µm). Le
volume de filtration minimale et de 10 ml d’échantillon ou de dilution correspondante pour
garantir une distribution homogène des bactéries sur la membrane filtrante.
 Incubation :
Après filtration, placer la membrane filtrante sur la gélose (CCA) en veillant à ce qu’il n’y
ait pas d’air piégé en-dessous, retourner la boite de pétri et incuber à (36+2) °C pendant (21+3)
h.
 Lecture :
Examiner les membranes filtrantes et compter toutes les colonies présentant de couleur
rose à rouge en tant que bactéries coliformes présomptives qui ne sont pas des E.coli. Compter
toutes les colonies présentant de couleur bleu foncé à violet en tant qu’E.coli.
 Confirmation :
Pour confirmer les bactéries coliformes présomptives qui ne sont pas d’E.coli, on réalise
de préférence cet essai sur la totalité ou sur au moins 10 colonies de couleur rose à rouge choisies
conformément à l’ISO 8199.

Recherche des Entérocoques intestinaux : (NA ISO 7899-2) (NA 766 : 2010)
 Milieux de culture et réactifs :
Milieu de Slanetz et Bartley.
 Filtration et incubation :
Pour une description générale de la technique de filtration sur membrane, voir l’ISO 8199.
Filtrer un volume d’eau appropriée au type d’eau examinée.
Placer la membrane filtrante sur le milieu de Slanetz et Bartley.
Faire incuber les boites à (36±2) °C pendant (44±4) h.
 Confirmation et dénombrement :
Après incubation considérer comme typique toutes les colonies bombées montrant une
couleur rouge, marron ou rose, soit au centre soit sur l'ensemble de la colonie.
 S’il y a des colonies typiques, transférer la membrane et les colonies, au moyen de pinces
stériles, sans retournement, sur une boite de gélose bile-esculine-azoture qui a été préchauffée a
44°C.
Faire incuber à (44±0.5) °C pendant 2h.
 Lecture : Considérer toutes les colonies typiques montrant une couleur brune à noire
dans le milieu environnant cordonnant une réaction positive, et le compter comme
entérocoques intestinaux.
Recherche des Pseudomonas aeruginosa : (NA ISO 16266) (NA 6825 : 2010)

 Milieux de culture et réactifs :

Base gélosée pour pseudomonas gélose CN.
 Filtration et incubation:
Filtrer des volumes de l'échantillon d'eau ou des portions d'une dilution dur une membrane
filtrante stérile en esters de cellulose de diamètre de pore nominale de 0,45 µm placer chaque
membrane sur une boite de pétri contenant de la gélose avec supplément CN, veillant à ne pas
emprisonner d'air sous la membrane.
Incuber les boites de pétri à (36 ± 2) °C pendant (44 ±2h dans des récipients et protéger
contre toute dessiccation.
 Dénombrement et lecture
Le nombre de pseudomonas aeruginosa présumés est obtenu par comptage du nombre de
colonies caractéristiques formées sur les membranes filtrantes après incubation. Les colonies
produisant de la pyocyanine (de couleur bleu-vert) sont considérées comme pseudomonas
aeruginosa confirmés, mais les colonies qui produisent une fluorescence ou celles de couleur
rougeâtre nécessitent une confirmation.
 Confirmation
Par le milieu de Milieu de King B.
Repiquer les colonies brun rougeâtre oxydase positive obtenues sur un milieu de King B et
incuber cinq jours au plus, à une température de (36 ± 2) °C. Examiner quotidiennement la
culture et noter la présence d'une éventuelle fluorescence Enregistre comme positive tout
fluorescence apparu dans les cinq jours.

Recherche des anaérobies sulfito-réducteurs

  Filtration et incubation

On filtre sur une membrane stérile de 0, 2µm de porosité, 250 ml d’échantillon d’eau traitée et
on dépose la membrane Sur la boite de pétri, face retournée sur la gélose, en évitant toute
incorporation d’air. On place la boite préparée dans la jarre d’anaérobiose. Puis on l’incube à
37°C pendant 48h.

 Lecture des résultats : On fait la lecture après 48h, en considérant toute colonie noir
comme résultat d’une spore de bactérie anaérobie sulfito-réductrice.