Saad Dahlab Blida1

Département Génie des procédés

Spécialité Pharmacie Industrielle

TP N°1
Contrôle de pureté Microbienne des préparations
Pharmaceutiques pour administration orale
(Préparation sèche)

Guettafi Maroua

Sadouk Yamina Rosa

 1. But de TP :
Contrôle microbiologique de la préparation pharmaceutique sèche (Diclofenac) par voie
orale.

2. Domaine d’application :
S’applique sur le contrôle microbiologique des préparations pharmaceutiques sèches pour
administration par voie orale.

3. Documents de référence :
Pharmacopée Européenne 2014, 8éme Edition.

4. Définitions :
Milieux De Culture :Un milieu de culture est une préparation au sein de laquelle des
micro-organismes peuvent se multiplier .Il doit donc satisfaire les exigences nutritives du
micro-organisme étudiées ce qui implique :

 Couvrir les besoins en ions minéraux, en facteurs de croissance apporter la

source de carbone et d’énergie.
 Présenter un pH voisin du pH optimal.
 Présenter une force ionique optimale

Pharmacopée Européenne : Défini les critères de pureté des matières premières ou

des préparations entant dans la fabrication des médicaments et les méthodes d’essai et
d’analyse à utiliser pour assurer leur contrôle dans le but d’unifier la composition des
médicament et d’indiquer le mode de préparation de certains médicaments.
Membrane plasmique : La membrane plasmique, également appelée membrane
cellulaire, membrane cytoplasmique, est une membrane biologique séparent l’intérieur
d’une cellule de son environnement extérieur c’est-à-dire du milieu extérieur.

Bec Bunsen : Un bec Bunsen est un appareil de laboratoire destiné à produire une flamme
ouverte avec du gaz combustible afin de chauffer des préparations, stériliser du matériel ou
bruler des substances .Bien qu’il n’en fut pas l’inventeur.

Colonie Bactérienne : Elle est définie comme un groupe de micro-organismes vivant à la

surface ou à l’intérieur d’un milieu de culture solide, généralement cultivés a partir d’une
cellule ionique
 5. Abréviations :
1. Dénombrement des germes aérobies totaux (DGAT)

Intitulée Anglais : Enumeration of total aerobic germs.

Essai préconisé par la Pharmacopée européenne pour déterminer si la qualité
microbiologique d’une substance ou d’une préparation est satisfaite.

2. Dénombrement des moisissures/levures totales (DMLT)

Intitulée Anglais : Enumeration of molds / total yeasts.

Essai préconisé par la Pharmacopée européenne pour déterminer si la qualité
microbiologique d’une substance ou d’une préparation est satisfaite.

3. Unité Formant Colonie (UFC)

Intitulée Anglais : Colony Forming Unit.

Les unités formant colonies sont utilisées en microbiologie pour quantifier les résultats dans
de nombreuses méthodes de comptage et d’étalement sur gélose.

6. Equipement et Matériel :

1. Installations Spécifiques :

Le laboratoire microbiologique doit se doter d’équipements spécifiques que :

 Une hotte à flux laminaire : pour aseptiser l’air contenu sous la hotte et un bec
Bunsen, pour désinfecter la matériel métallique, on fait rougir le métal à la flamme ;
l’ensemble permet de manipuler en asepsie, pour éviter la contamination par des
germes contenus dans l’air ou sur le matériel.
  Une étuve, c’est-à-dire une armoire thermorégulée, permet de placer les écgantillons
tests à des températures qui favorisent la croissance des micro-organismes étudiés .

 Un autoclave permet de désinfecter le matériel utilisé mais aussi tous les supports et
les milieux de culture que l’on se destine à jeter.

 Bain-marie 100°C :
Chauffe et maintient la température jusqu'à 100°C
Affichage digital précis
Cuve en plexiglas 2,5 L
Livré avec son portoir inox pour 16 tubes
2. Prélèvement et préparation de l’échantillon en condition stérile :
L’échantillonnage destiné à une analyse microbiologique revêt une précaution
supplémentaire par rapport au prélèvement destiné a un contrôle physico-chimique .Celle
d’être réalisé en conditions stériles :

 Flacon stérile, rempli sans toucher l’échantillon avec les mains ni un quelconque
matériel (broc, entonnoir, pipette) a moins d’avoir été désinfecté ; dans le cas d’une
désinfection chimique, attention aux résidus de produit ;
 Bouchon stérile ;
 Flambage du col de la bouteille.

Après le prélèvement, maintien de l’asepsie :

 Interdiction stricte d’ouvrir le flacon jusqu’à l’analyse ;

 Ouverture de l’échantillon seulement sous hotte à flux laminaire ou à proximité
directe de la flamme bleue du bec bunsen.
Mode opératoire :
 Préparer une solution de 10g de produit d’examiner dans 90ml de la solution tampon
peptonée au chlorure de sodium ou dans un autre diluant phosphaté.
 Agiter jusqu'à l’homogénéisation complète.
 Prélever 4fois 1ml de la solution préparée et déposer chaque prélèvement dans une
boite de pétri de 90mm.
 Couler dans 2 des 4 boites de pétri destinés au DGAT 15 à 20ml du milieu gélose TSA
et dans les 2 boites restantes destinés au DMLT 15 à 20ml du milieu sabourand.
 Agiter doucement les boites par un mouvement circulaire pour assurer un mélange
homogène de l’échantillon et la gélose sans faire de bulles.
 Incuber les boites TSA à 30-35°c pendant 3 jours et les boites sabouraud à 20-25°c
pendant 5 à 7 jours.

Lecture :
-Le nombre de germes aérobies totaux (DGAT) est considéré comme égale au nombre d’UFC
obtenu avec le milieu TSA (si des colonies de moisissures ou levures sont détectés sur ce
milieu, elles sont comptabilisée dans le DGAT.

-Le nombre total de levures et moisissures (DLMT) est considéré comme égale au nombre
d’UFC obtenu avec le milieu sabouraud.

(Si des colonies de bactéries sont détectés sur ce milieu, elles sont comptabilisées dans le
DLMT.

Calcul le nombre d’unité formant colonie :

X= M. (1 /D). (1/V)

 Compter le nombre de colonie apparue dans chaque boite

 Faire la moyenne
 Déduire le nombre d’unités formant colonie

M= (n1+n2+n3) / 3

M= (75+125+100)/ 3

M = 100
On remplace M dans l’équation 

Avec (1/D)=0

X= 100.10

X=100 UFC

Conclusion :
Afin d’apprécier la qualité microbiologique d’un médicament durant le procédé de
fabrication des différents étapes sont utiliser dans le but de rechercher et dénombrer dans
les différents échantillons prélevés les micro-organismes suivants :

 Les bactéries aérobies viable totale : concerne tous les micro-organismes aptes a se
multiplier a des températures moyennes.
 Les levures et moisissures : sont responsables de nombreux phénomènes d’altération
d’enzymes hydroliptiques (amylases, protéases, lipases,….).
 Les germes spécifiques( E coli, entérobactéries).