Université de Khenchela Master II: Biochimie Appliquée

Biochimie Appliquée 2023/2024

TP n°02: Tests de caractérisation Phytochimiques

(Screening de molécules bioactives dans des extraits végétaux)

L’un des buts essentiels d’un test phytochimique consiste dans la détection des différentes familles de
métabolites secondaires existant dans la partie étudiée de la plante par des réactions qualitatives de
caractérisation. Ces réactions sont basées sur des phénomènes de précipitation ou de coloration par des
réactifs spécifiques à chaque famille de composés. , les résultats seront classés en :
• Réaction fortement positive + + + • Réaction positive + + • Réaction louche +/- • Réaction négative –

Matériel végétal :
On utilise dans ce TP les différents extraits des plantes : Myrte (Myrtus communis L.), Grenadier
(Punica granatum)….

Réactifs et produits :
- réactif de Dragendorff (réactif à l’iodo-bismuthate de potassium) – réactif de Mayer
- HCl - H2SO4– NH4OH- - Chlorure de fer (FeCl3) – liqueur de Fehling

1. Recherche des alcaloïdes :

Les tests sont réalisés par des réactions de précipitation avec les réactifs de Mayer et de Dragendorff.
Dans deux tubes à essai, 1ml de l’extrait va être introduit ensuite, ajouter au premier, 5 gouttes de réactif
de Mayer et au second, 5 gouttes de réactif de Dragendorff.
L’apparition d’un précipité blanc ou brun, respectivement révèle la présence des alcaloïdes.

2. Recherche des composés phénoliques

2.1. Flavonoïdes
Macérer 10g de la poudre sèche dans 150 ml d’HCl dilué à 1% pendant 24h, filtrer et procéder au test
suivant : prendre 10 ml du filtrat, le rendu basique par l’ajout du NH4OH.Un test positif est révélé par
l’apparition d’une couleur jaune dans la partie supérieure de tube à essai.

2.2. Tanins
A 1 ml d’extrait à analyser, ajouter 0,5 ml d’une solution aqueuse de FeCl3 à 1 %. La présence des
tanins est indiquée par une coloration verdâtre (tanins catéchiques) ou bleu-noirâtre (tanins galliques).

2.3. Coumarines
Introduire 5ml d’extrait dans un tube, ajouter 0,5ml de NH4OH à 10%, mélanger et observer sous UV à
366 nm .Une fluorescence intense indique la présence des coumarines.

3. Terpénoïdes :
5 ml d’extrait est ajouté à 2 ml de chloroforme et 3 ml d’acide sulfurique concentré. La formation de deux
phases et une couleur marron à l’interphase indique la présence des terpénoides.

4. Saponosides :
Dans un tube à essai, introduire 10 ml d’extrait aqueux à tester et Agiter le tube avec énergie en position
horizontale pendant 15 s puis laissé au repos durant 15 min (en position verticale). Une hauteur de mousse
persistante, supérieure à 1 cm indique la présence de saponosides
5. Les composés réducteurs :
Introduire 1ml d’extrait dans un tube à essai, ajouter 2ml de liqueur de Fehling (1ml réactif A et 1ml
réactif B), incuber l’ensemble pendant 8 min dans un bain marie bouillants. L’apparition d’un précipité
rouge brique indique la présence des composés réducteurs.