Chapitre 2 : Description des tâches effectuées pendant le stage :

3.1 Les travaux effectués en lien avec le poste du stage :

3.1.1 L’eau et les critères d’une eau potable :

 Une eau potable doit être exempte de germes pathogènes (bactéries, virus) et
d’organismes parasites, car les risques sanitaires liés à ces micro-organismes sont
grands.
 Une eau potable ne doit contenir certaines substances chimiques qu’en quantité
limitée : il s’agit en particulier de substances qualifiées d’indésirables ou de toxiques,
comme les nitrates et les phosphates, les métaux lourds, pour lesquelles des
concentrations maximales admissibles ont été définies.
 A l’inverse, la présence de certaines substances peut être jugée nécessaire comme
les oligoéléments indispensables à l’organisme.
 Une eau potable doit aussi être une eau agréable à boire : elle doit être claire, avoir
une bonne odeur et un bon goût. Pour avoir un bon goût, il lui faut contenir un
minimum de sels minéraux (de 0,1 à 0,5 gramme par litre), lesquels sont par ailleurs
indispensables à l’organisme.
 Enfin, une eau potable, ne doit pas corroder les canalisations afin d’arriver propre à
la sortie des robinets.

3.1.2 Stérilisation et le Prélèvement :

3.1.2.1 Stérilisation

Pour toutes les opérations, le matériel utiliser doit être stérilise c’est à dire ne
contenant aucun micro-organisme vivant. La stérilisation se fait par de la chaleur humide
à l’autoclave (à 120°C pendant une heure).

Toute opération doit être faite à proximité du bec bunsen, afin d’assurer les conditions
d’asepsie.

3.1.2.2 le Prélèvement

Le prélèvement est une phase essentielle de l’analyse, un prélèvement correct exige

les percutions suivantes :

 L’échantillon collecté dans des flacons.

 Les eaux de puits rivières tromper doucement le flacon dans l'eau et prélever a
environ 60cm de la surface en évitant de touche le fond.
 Les eaux de réseaux de distribution, les relèvements sont effectués au robinet jet,
raccord de caoutchouc, flamber le robinet avant le prélèvement à l'aide d’une tige
métallique imbibe d'alcool et laisser couler l'eau pendant 5 à 10 min puis recueillir
l’échantillon.
  Remplir le flacon a ras bord afin d’éviter la présence d’air.
 Les flacons doivent porter une étiquette sur lesquels on note :

*l'origine de l’eau.

*l'adresse exacte du lieu de prélèvement.

*l'adresse exacte du lieu de prélèvement.

*la date et l'heure du prélèvement.

3.1.2.3 Transport et conservation

La durée de transport de l’échantillon depuis le point de prélèvement jusqu’au laboratoire

chargé de l’analyse doit être la plus courte possible (moins de 8H) l’échantillon doit être
placé dans une glacière (4-6c°) à l’abri de la lumière.

3.1.2.4L’importance de l’analyse

Une analyse régulière est importante pour les raisons suivantes :

 Elle permet de définir les problèmes existants.

 Elle garantit une eau qui convient à l’utilisation prévue.
 Elle garantit une eau potable sûre.
 Elle permet de vérifier l’efficacité du système de traitement.

3.1.3 Techniques d’analyse microbiologique des eaux :

3.1.3.1 Recherche et dénombrement des coliformes :

Définition :

Les coliformes sont des bactéries appartenant à la famille Enterobactriaceae ; en forme des
Bacilles à Gram Négatifs (BGN), aérobies ou anaérobies facultatifs, non sporulés, ne
possédant pas d’oxydase, capables de se multiplier en présence de sels biliaires et capables
de fermenter le lactose avec production d’acide et de gaz en 24 à 48 heures à une
température comprise entre 36 et 37°C, (coliformes fécaux 44°c). Ils se trouvent dans les
intestins, du tube digestif des êtres humains et des animaux; Parmi les coliforme: Klebsiella,
Entérobactérie, Citrobacter et E. coli.

La technique en milieu liquide fait appel à deux testes consécutifs à savoir

 Le teste de présomption (méthode du NPP) : réservé à la recherche des coliformes

totaux
 Le teste de confirmation : encore appelé teste de Mac Grady est réservé à la
recherche des coliformes fécaux à partir des tubes positifs du teste

Teste présomptif (Recherche et dénombrement des coliformes totaux)

Ensemencement :
A partir de l’eau à analyser, porter aseptiquement :
 3 tubes de 10 ml de milieu BCPL D/C avec 10 ml d’eau à analyser muni d’une
cloche de Durham.
 3 tubes de 10 ml de milieu BCPL D/C avec 1 ml d’eau à analyser muni d’une
cloche de Durham.
 3 tubes de 10 ml de milieu BCPL S/C avec 0,1 ml d’eau à analyser muni d’une
cloche de Durham.
 Chassez le gaz présent éventuellement dans la cloche de Durham et bien mélangé le
milieu et l’inoculum.

Incubation :
L’incubation se fait à 37°C pendant 24 à 48 heures.

Lecture :
Sont considérés comme positifs les tubes présentant à la fois :
 Un dégagement gazeux (supérieur au 1/10 de la hauteur de la cloche)
 Un trouble microbien accompagné d’un virage du milieu au jaune (ce qui
constitue le témoin de la fermentation du lactose présent dans le milieu).
 Eau à
analyser

10ml 1ml 0,1ml

9ml de BCPL D/C+cloche 9ml de BCPL S/C+ cloche 9ml de BCPL S/C+cloche

Incubation 24H à 37°C

Virage du milieu au jaune + gaz

Dans la cloche

Figure 0: Les étapes du test présomptif pour la mise en évidence des coliformes totaux
Test de confirmation (Test de MACKENZIE) :
Le test de confirmation est basé sur la recherche de Coliformes fécaux parmi
lesquels on redoute surtout la présence d’Escherichia coli.
Les coliformes fécaux ont les mêmes propriétés de fermentation que les coliformes
mais à 44°C.
Escherichia coli est un coliforme fécal qui entre autre :
- produit de l’indole à partir du tryptophane présent dans le milieu à 44°C.
- donne un résultat positif à l’essai au rouge de méthyle.
- ne produit pas de l’acétyle méthyle carbinol .
- n’utilise pas le citrate comme source unique de carbone.
Ensemencement:
Ensemencer 2 à 3 gouttes des milieux positifs dans des tubes contenant le milieu Schubert‚
mettre au bain marie à 44°C pendant 24h.
Lecture :
Une couleur jaune et production de gaz, et formation d’anneau rouge après addition de quelques
gouttes de réactif de Kovacs ; cela confirme la présence de E. coli dans l’eau analysée.

2 à 3 gouttes de tube positif Réactif de KOVACS

Incubation à 44°c pendant 24h

Milieu Schubert Tube positif (gaz dans la cloche et trouble) Anneau rouge

Figure 0: Les étapes du test confirmation  pour la mise en évidence des Escherichia coli