Université Djilali Bounaama

Faculté des Sciences de la nature et de la vie

Département de Biologie

Module : Microbiologie Alimentaire

Niveau : L3 TAACQ
Chargée du module : Mme DAOUDI A.

TP 2 : Contrôle microbiologique de L’eau

Nature des eaux : Il existe diverses catégories selon la nature et l’utilisation : eaux brutes, eau livrée à la
consommation (potable), eaux minérales naturelles, eaux usées, etc.

1/ But : réaliser une analyse sanitaire complète.

2/ Principe :

Cette analyse comporte :

 Le dénombrement de la FAMT (germes totaux) ;

 Le dénombrement des coliformes totaux et fécaux ;
 Le dénombrement des entérocoques (streptocoques fécaux) ;
 Le dénombrement des Clostridium solfito-réducteurs ;
 La recherche des germes pathogènes (Salmonella, Shigella).

3/ Méthodes d’analyse :

L’analyse s’effectue sur une eau potable.

3.1/ Flore totale « FAMT » : Cette flore est un bon indicateur de la qualité générale. Son dénombrement est
réalisé en boite de Pétri à l’aide du milieu PCA. Ce milieu est ensemencé en surface et incubé durant 48
heures à 30°C. (On peut réaliser un double dénombrement à 20°C et à 37°C .Ce dénombrement permet la
culture d’une gamme plus étendue de microorganismes).

3.2/ Coliformes « totaux et fécaux » :

En milieu solide : Les coliformes sont dénombré en milieu solide (VRBG) les boites sont ensemencées par 1
ml de la suspension mère ou des dilutions. Le milieu en surfusion est ajouté et mélangé (12ml).

1
Après solidification, une deuxième couche (4ml) de milieu est rajoutée .l’incubation a lieu pendant 24 heure
à 30°C pour les coliformes « totaux » et à 44°C pour les coliformes «fécaux ». (Numération présomptive
avec confirmation par subculture sur BLBVB à partir des colonies isolées).

3.3/ Clostridium sulifto-reducteurs (Clostridiume perfringens) : les tubes à analysés seront (dans le but
d’éliminer les formes végétatives de garder uniquement les formes sporulées) soumis :
 d’abord à un chauffage à 80°C pendant 8 à10 mn.
 puis à un refroidissement immédiat sous l’eau de robinet.

Après refroidissement des tubes, porter 1 ml de chaque tube en double dans deux tubes à vis, puis ajouter
15 ml de milieu VF (fondu et additionné d’Alun de fer et de sulfite de sodium). Laisser solidifier 30mn sur
paillasse, ensuite incuber à 37°C pendant 16,24 ou 48 heures, il faut repérer tout colonie noire d’un
diamètre supérieur à 0.5 mm ayant poussé en masse, puis procéder à son identification biochimique.

3.4/ Streptocoques fécaux : les streptocoques fécaux sont dénombrés en milieu liquide par la technique du
nombre le plus probable. Deux tests sont réalisés (48h à37°C) :
 test de présomption sur milieu Roth S/C ;
 test de confirmation sur milieu Eva Lytski.

3.5/ Salmonella : Sa recherche s’effectue par enrichissement sur milieu au sélénite (SEB), puis isolement
sur milieu SS et identification par les identifications par les méthodes classiques.