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Préparé par :
Hmidouch Bouchra
Imzilan oumayma
Encadré par :
Professeur HAMDALI
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Sommaire
INTRODUCTION
2. objective de TP
3. méthodologie
4. L’ensemencement
a. l’ensemencement en profondeur
1. Introduction
2. Objectif
3. Méthodologie
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4. Résultats
1. introduction
2. objectif
a. Principe
b. méthodologie
C .résultats
a. Principe
b. méthodologie
C .résultats
V. Conclusion générale
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I. INTRODUCTION
La microbiologie est le domaine d’études scientifiques qui
s’intéressent aux organismes de taille microscopique, en
particulier aux Bactéries,
aux protozoaires, aux
virus ainsi qu’à certains
champignons (levures),
et algues unicellulaires
de petite taille.
Photo : nature.com
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Photo : matériels utilisés
dans laboratoire de
microbiologie.
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En bactériologie le milieu de culture est un support matériel de la
culture et son pourvoyeur en nutriments nécessaires (énergie,
l’eau, oxygène, pH, température et pression osmotique) au
développement et à la croissance des germes en présence des
facteurs physico-chimique favorable.
b. stérilisations :
b. préparation de la
dilution :
On prélève à l’aide de l’anse un
échantillon de sol dans le
premier tube qui contient l’eau
physiologique, puis on met ce
tube au vortex, on obtient donc
une dilution de 10¯¹. On prend
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1ml de tube1, et on met dans le tube2 →dilution 10¯². On répète
jusqu'à dilution 10⁻⁶.
4. L’ensemencement :
L’ensemencement consiste à déposer dans un milieu de culture
neuf des germes prélevés dans un milieu de culture mère, le
transport est en général effectué avec une anse.
a. l’ensemencement en profondeur :
Dans la boite de pétri vide, stérile, et constituer de gélose on
verse 1ml de la dilution (pour notre paillasse on utilise la dilution
10 ⁻⁶).
b. l’ensemencement par stries transversale :
Flamber l’anse et laisse refroidir.
Prélever un échantillon du sol.
Etaler à nouveau le prélèvement
par stries serrées dans la moitié
de boite.
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Flamber l’anse et laisser refroidir.
Répéter l’étalement par stries serrées.
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On met les boite de pétri préparer dans l’incubateur à 37°c
pendant une semaine.
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Fixation du frottis : chauffer la
lame jusqu’à la fixation du frottis.
Application de la coloration de
gram : ajouter le cristal violet et
laisser pendant 1 min et rincer
avec l’eau, puis faire la fixation
avec le lugol laisser 1min et
rincer, ensuite faire la
décoloration avec
l’alcool (acétone) en
ajoutant (1-2 gouttes)
laisser durant (1-2
seconds),après on fait la
recoloration avec la
fuschine et attendre 1min puis rincer
avec l’eau .
En passe à l’observation en
microscope (Gx4) →(GX10) → (GX100).
4. Résultats :
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A l’aspect macroscopique : dans notre boites de pétris on
observe des colonies (l’ensemble des cellules bactériennes issues
de la même cellule mère par la division binaire), qui son de
différente forme (ronds…) et différente taille (petite, moyenne et
grande) et de couleur presque orange. Dans certaines boites on a
trouvé des mouches.
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C’est une méthode quantitative de comptage des cellules
bactérienne contenues dans un échantillon donné dans un
milieu gélosé par rapport à un volume bien définie.
b. méthodologie :
i. la préparation de la dilution :
On prélève à l’aide de l’anse un échantillon de sol dans le premier
tube qui contient l’eau physiologique, puis on met ce tube au
vortex, on obtient donc une dilution de 10¯¹. On prend 1ml de
tube1, et on met dans le tube2 →dilution 10¯². On répète jusqu'à
dilution 10⁻⁶.
ii. l’ensemencement en masse :
Verser 0,5 ml de la dilution 10⁻⁶ pour notre paillasse dans les
trois boites de pétri qui contienne la gélose nutritive puis on les
mettre à l’incubateur à 37°c pendant une semaine.
c. résultats :
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calcul le nombre des cellules bactérienne :
i. Interprétation :
ii. Remarque :
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Si on trouve des résultats défirent c’est à cause de plusieurs
effets tel que : la dilution ; condition du travail et l’effet de
manipulateur lui-même.
b. La méthodologie :
i. la préparation de la dilution :
On prélève à l’aide de l’anse un échantillon de sol dans le premier
tube qui contient l’eau physiologique
On met ce tube au vortex, on obtient donc une dilution de 10¯¹.
On prend 1ml de tube1
On met dans le tube2 →dilution 10¯²
On répète jusqu'à dilution 10⁻⁶.
ii. l’ensemencement en masse :
Verser 0,1 ml de la dilution 10⁻⁶ pour notre
paillasse dans les trois tubes qui contienne le
bouillon nutritive puis on les mettre à
l’incubateur à 37°c pendant une semaine.
c. Résultats :
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Pour les tubes trouble on note(+), et les tubes clair on note (-)
On a : NC= 312
i. Interprétation :
V. conclusion générale :
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