Ministère

Ministère de
de l’enseignement
l’enseignement supérieur
supérieur etet la
la recherche
recherche scientifique.
scientifique.
Université
Université Djilali
Djilali Liabbes
Liabbes Sidi
Sidi Bel
Bel Abbes
Abbes ..
Département
Département desdes sciences
sciences Agronomiques
Agronomiques ..

Nom: Benghaffor .

Prénom :kheira Hiba .

Module: phytopathologie .
Master 1 Protection des végétaux .
Compte rendu
TP 02 / 03 :Repiquage d’un champignon sur un milieu solide .
: isolement d’un agent pathogène d’une feuille malade .
:isolement d’un agent pathogène d’une feuille malade Rosier .
:isolement d’un agent pathogène d’une feuille malade adventice .
 Le but de TP :
• L'objectif de ce travail est d'étudier la méthode d'isolement et identification de quelques
champignons de stockage des trois types de feuilles infestées .
• Connaitre quelques champignons phyto pathogène qui attaquent les végétaux .
Matériels :
Bécher
Boites pétri
Pince / Scalpels à lames interchangeables;
Feuilles de géranium infestée .
Anse de platine
Papier filtre
Pipette et micro pipette .
Bec de bunsen .
Étiquettes .
Éthanol .
Eau de javel .
Avant la manipulation :

Se laver soigneusement les mains avec un antiseptique et les laisser sécher.

Désinfecter le plan travail et avec l’hypochlorite de sodium (l’eau de javel).
Placer le bec bunsen au centre du plan de travail et l’allumer pour avoir une flamme bleue .
Installer le bécher à éthanol loin de bec bunsen .
Fermer les fenêtres de laboratoire pour éviter le courant d’air .
Les manches ne doivent jamais toucher la surface de travail.

lavage des mains

Mise en place d’une zone aseptique
à l’aide de bec bunsen. la flamme doit être bleu
 Les étapes de manipulation :
- Fragmentation des feuilles de géranium après le rinçage .
- On mets des fragments dans l’eau physiologique pendant 1h et les autres dans l’eau de javel
pendant 2min .
- L’étape suivante est de mettre les fragments mise en javel dans un bécher contient de l’éthanol
pendant 2min .
- puis , on fait le rinçage avec l’eau distillé après on mets les fragments dans un papier filtre
- La dernière étape est le repiquage dans les boites pétri : on fait cette opération avec prudence et
on s’éloigne le fragment l’un de l’autre .
- étiquetter .
- Mise des boites pétri au l’étuve .
(ces étapes sont les mêmes pour les feuilles de rosier et la feuille de l’adventice ) .
 La lecture macroscopique :
Après l’incubation , on observe un développement des micro organismes champignons et bactéries .
Le champignon apparu peut être un fusarium car la feuille est infestée .
Le petit tapis vert avec les bords blancs c’est probablement des Aspergillus .
Et pour les bactéries : Au niveau de la peau de l'homme, on a souvent des Staphylococcus epidermidis
qui font des colonies .
Pour le spot jaune, je pencherais pour une actinomycètes , certaines font des structures de ce genre !

Aspect macroscopique de la resultat obtenue

Observation microscopique :

• Passer à l’observation microscopique et cela en suivant les étapes

• suivantes :
• 1- Stériliser la lame en utilisant l’alcool puis essuyer et flamber
• 2- Verser une goutte d’eau distillée sur la lame
• 3- Prélever une colonie de champignons à l’aide de l’Anse à ensemencer
• puis étaler sur la goutte d’eau distillée versée au par avant
• 4- Observer sous microscope photonique
• On observe des filaments qui sont cloisonnées et des spores qui sont mobiles .
Isolement d’un champignon à partir d’une autre colonie :

• Il s’agit d’une opération d’isoler un champignon à partir d’une colonie , les matériels utilisées :
• Bec de bunsen
• Pipette pasteur
• Boite pétri contient une colonie des champignons.
• Des boites pétri stériles .
• L’éthanol .
Les étapes de manipulation :
• Stérilisation des mains avec l’éthanol et les laissent dessécher .
• l’ouverture avec prudence de la boite pétri qui contient la colonie ,en respectant que notre travail doit
être autour de la bec bunsen .
• On fait un Prélèvement à l’aide de pipette pasteur flambée .
• Puis ,on fuit un ensemencement comme ces figures présentent :
Conclusion :
• L’observation des colonies de champignons dans un milieu PDA dur longtemps ( 1 semaine
d’incubation au minimum; c’est long). Mais , l’isolement des champignons et la préparation
pour l’observation microscopique est très simple et très courte.