UNIVERSITE MOHAMED V - RABAT

ECOLE NATIONALE SUPERIEUR D’ARTS ET

METIERS DE RABAT (ENSAM)

TRAVAUX PRATIQUES
DE QUALITE MICROBIOLOGIQUE D’EAU

Semestre 5

Responsables : Pr Latifa Doudach

Pr Asmaa Chaik

Année universitaire 2023-2024

 Manipulation
Recherche et dénombrement des Escherichia coli dans les eaux traitées

(PNM ISO 9308-1 année 2006)

Méthode par filtration sur membrane

Echantillon
de 500 mL
TEST PRESOMPTIF

Filtrer 100mL

Membrane 0.45µm

Tergitol - 7 - TTC
44°C  0.5°C /21H ± 3H jusqu’à 44H ± 4H
Dénombrer les colonies typiques

(jaunes avec halo jaune et orange) et les colonies

atypiques (différentes couleurs et morphologies)
TEST CONFIRMATIF Isoler
TSA

(Gélose tryptonie au soja) 36°C  2°C /21H ± 3H

Ensemencer sur eau peptonnée exempte d’indole

44°C  0.5°C /21H ± 3H

Réaction d’indole

Ajouter 0.2 à 0.3 ml du réactif de Kovacs

Lecture des résultats :
Dans les tubes d’eau peptonnée
Résultats des espèces
Apparition d’une coloration rouge à la surface de l’eau peptonnée recherchés après
confirme la production de l’indole  présence d’E. coli incubation :

Nombre de colonies

Confirmées en UFC/100 mL
 Dénombrement des microorganismes revivifiables

(PNM ISO 6222 année 2006)

Technique de comptage des colonies par ensemencement sur milieu de culture gélosé

Echantillon
Prétraitement de 500 mL

Faire fondre au bain-marie la gélose à l’extrait de levure

Maintenir la gélose liquide dans un bain-marie à 47°C  1°C

Ensemencement

1 ml de l’échantillon / boite

Puis ajouter

15 ml à 20 ml de gélose Technique d’incorporation en gélose (extrait de levure)

Boite de pétri

de 90 mm de
diamètre

Incubation à 22 ± 2 °C / 68 ± 4 heures Incubation à 36°C ± 2 °C / 44 ± 4 heures

Méthode par filtration sur membrane

Dénombrement des boites entre 30 et 300 colonies

(PNM ISO 9308-1 année 2006)

Méthode par filtration sur

Nombre de colonies en UFC/ mL

Questions :
1) Analysez les résultats pour chaque expérience.
2) Indiquez la méthode d’analyse utilisée
3) Citez les autres techniques d’analyse bactériologique des eaux