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SVT 1ère S Partie A, Chap.

TP n°1:
Réalisation et suivi de réactions enzymatiques « in vitro »

But: Mettre en évidence l'activité catalytique d'une enzyme


Problème : Comment les enzymes interviennent-elles dans les réactions biochimiques?

Protocole expérimental:
Pour étudier le rôle des enzymes, nous allons réaliser une réaction biochimique : la synthèse de macromolécules
d'amidon dans les cellules d’un tubercule de pomme de terre. On précise que l'amidon est une macromolécule
synthétisée à partir de molécules de glucose.

1. Préparation d'un filtrat de tubercule de pomme de terre


Le filtrat a été préalablement préparé en laboratoire à partir de pommes de terre râpées dont on a filtré le jus.
Le filtrat de tubercule de pomme de terre est conservé au froid.

a. A l'aide d'une pipette prélever 1 ml de solution de filtrat et vérifier l'absence d'amidon dans un tube à essai.
Quel réactif allez vous employer pour vérifier l'absence d'amidon? ( /1).
b. Observer et analyser le résultat du test de l'amidon. ( /2)

2. Préparation des tubes à essai


Préparer 3 tubes à essai en suivant les indications du tableau ci dessous:
- En haut de chacun des tubes indiquer votre nom et le numéro du tube.

Numéro du tube Contenu


1 - 1 mL de solution de glucose - 1 - phosphate à 1%
- puis ajouter 1 mL de filtrat de tubercule de pomme de terre
- placer le tube au bain marie (t = 0 min)
2 - 1 mL de solution de glucose - 1 - phosphate à 1%
- puis ajouter 1mL d'eau distillée
- placer le tube au bain marie (t = 0 min)
3 - 1 mL de solution de saccharose à 1%
- puis ajouter 1 mL de filtrat de tubercule de pomme de terre
- placer le tube au bain marie (t = 0 min)

3. Test des contenus des tubes


Dès que les tubes ont été placés à température ambiante à t = 0 minutes, déclencher le chronomètre puis
réalisez les manipulations suivantes :
− prélever une goutte de chaque tube (avec une pipette propre ) toutes les 2 puis 4 minutes ;
− la déposer sur un puits de lame ELISA et faire un test à l’eau iodée (utiliser une ligne de puits par tube de
même numéro).
− reporter les résultat des tests sur votre compte rendu dans un tableau comme ci dessous.
− arrêter les tests au bout de 20 minutes.

Résultats:
a. Recopier et compléter le tableau ci dessous ( /6):

Numéro du Contenu au départ Test après 2 Test après 4 Test après Test après Test après Test après
tube min min 8 min 12 min 16 min 20 min
1
2
3

b. Indiquez pour chaque tube le facteur qui varie par rapport aux autres tubes. ( /1)
c. Quel est le tube témoin et à quoi sert-il? ( /2)
d. En déduire ce que contient le filtrat de pomme de terre et préciser son rôle.( /2)
Rangement : Faire vérifier le rangement ( /2)
Conclusion:
a. Écrire la réaction chimique en plaçant les différentes molécules ainsi que la substance contenue dans le
filtrat de pomme de terre. ( /2)
b. Sachant que ce filtrat contient une enzyme, et que c'est cette enzyme qui est intervenue dans la réaction,
proposer une définition du mot enzyme. ( /2)