UNIVERSITE DE DJILALI LIYABES- SIDI BEL ABBES.

FACULTE DE TECHNOLOGIE

DEPARTEMENT DE GENIE DES PROCEDES

3ème LICENCE ENERGIE ET GENIE DES PROCEDES

TP technique d’analyse
Intitulé :

TP03 :
Spectrophotométrie (UV-
visible)

Le nom et le prénom :
 Messellek Manel
 Lellouet Kawther

L’enseignant de module : Mr. Draa Rafik El Arslene

Année universitaire actuelle :

2021/2022
Introduction : 

L'eau de Dakin est une solution antiseptique à usage externe (elle est utilisée

pour la désinfection de la peau et des muqueuses). Elle est à base d'hypochlorite
de sodium c'est-à-dire l'eau de Javel diluée à 0,5 % de chlore actif additionnée
de permanganate de potassium (pour la stabiliser vis-à-vis de la lumière UV) de
manière à obtenir une concentration en masse de Cm = 10mg.L-1

On trouve aussi dans l'eau de Dakin du dihydrogénophosphate de sodium

dissous. Parmi toutes ces espèces chimiques, seuls les ions permanganate
MnO-4(aq) sont colorés et donnent à la solution cette teinte violette, assimilable au
magenta.

But :
Connaitre l’eau DAKIN et le spectrophotométrie

Comprendre le principe de fonctionnement d’une spectrophotométrie.

Tracé la courbe d’étalonnage d’un colorant et détermination du coefficient

d’extinction molaire

Connaitre la loi de Beer-Lambert.

Principe :
Un spectrophotomètre analyse l'énergie lumineuse réfléchie ou transmise d'une
molécule. Il possède un système qui sépare les différentes longueurs d'onde d'un
faisceau lumineux : le monochromateur. Il y a 2 types de
monochromateur : dispersion de la lumière par un prisme ou diffraction de la
lumière par un réseau ou par un cristal.

Le spectre est reconstruit par un logiciel à partir des mesures effectuées à des
intervalles de longueur d'onde fixés (exemple : mesures tous les 1, 3, 5 nm, ...).

Sources lumineuses :

 Lampe à décharge au deutérium : domaine d'énergie / longueur d'ondes

190 à 400 nm (maximum d'émission à 652 nm).
 Lampe à filament de tungstène : domaine 350 à 800 nm.
 Lampe à décharge au xénon (très énergétique) utilisée dans le domaine
UV et visible. Elle fonctionne sous forme de flash, au moment de la
mesure.

La spectrophotométrie est une méthode extrêmement courante pour :

 Déterminer la concentration d'une molécule.

 Suivre la cinétique de formation d'un produit au cours d'une réaction
enzymatique.
 Mesurer l'absorbance d'un éluât au cours d'une séparation
par chromatographie pour tracer le profil d'élution.
 Apprécier le degré de pureté d'une molécule purifiée.

La loi de Beer-Lambert :
La loi de Beer-Lambert s’énonce ainsi :
A = ε.l.c
A : est l’absorbance de la solution aussi appelée densité optique ; c’est une
grandeur non dimensionnée, sans unité.
ε: est le coefficient d’absorption (ou d’extinction molaire) ; il s’exprime
généralement en L.mol-1.cm-1
l : est la largeur de la cuve qui est traversée par la radiation incidente ; elle est
exprimée en cm.
C : est la concentration de l’espèce étudiée ; elle est exprimée en mol.L-1.

Io
D’âpres la loi de Beer-Lambert on a : A= I =-log(T)
Sachant que T est la transmittance :
T= 100 : il n y a pas d’absorption
T=/= 100 il y a absorption plus ou moins intense du rayonnement
T=0 il y a absorption importante du rayonnement

MATERIELS ET PRODUITS :

Matériels Produits

-Spectrophotomètre UV-Visible - Solution de Permanganate de Potassium

- Les cuves 10 mm de largeur pour le (KMnO4) à 2.5 x10-4 M
domaine visible. - solutions étalons,
- 1 burette graduée - Eau Dakin.
- 1 bécher de 50 mL - Eau distillée.
- 07 tubes à essai numérotés et un
bouchon
Mode opératoire :

 On prépare des solutions étalons (Vfinale =20ml) de KMnO4 par dilution

à partir d’une solution mère à Cmère= 2.5 x10-4 mol /litre.

 On rince l’une des cuves avec de l’eau distillée puis on la remplit avec
l’eau distillée encore et on effectue l’essai à blanc.

 Il faut choisir le type de cuve adaptée à la longueur d'onde :

o quartz pour les ultra-violets (190 - 400 nm)
o verre ou polystyrène pour le visible (400 nm - 800 nm)
 On ne met pas les doigts sur les faces dépolies des cuves
 On bien oriente la cuve par rapport à l'axe du faisceau
lumineux

Cuve

 On règle le spectrophotomètre de manière à avoir une longueur d’onde

« λ » d’un rayonnement électromagnétique (monochromatique) incident
égale à 530 nm.
 on réalise une opération appelée réglage du zéro. Elle est effectuée avec
une cuve contenant le solvant et les espèces autres que celle à étudier ;
cette solution s'appelle un « blanc ». Cette cuve est placée dans l'appareil
et une touche permet de régler la valeur de 1' absorbance à zéro et
d'afficher zéro sur le spectrophotomètre. Ce réglage doit être effectué
chaque fois que la longueur d'onde de la lumière sélectionnée change.
 On remplit les cuves chaque cuve par chaque solution étalon
 On lit l’absorbance (A) ou densité optique de chaque solution étalon, à
l’aide du spectrophotomètre.
 On lit l’absorbance (A) ou densité optique de l’échantillon de dakin à
analysé.
 Répondre aux questions :
Ci Vf
1--Sachant que : Cf = Vp = facteur

Cmère = Ci= 2.5*10-5 mol/L

Ci
Cfille= Cf = facteur (mol/L)

Vf
Vp = facteur (mL)

On remplit le tableau suivant :
solution étalon 1 2 3 4 5 6

Facteur de 10 fois 6.66 fois 5 fois 4 fois 3.33 fois 2.85714 fois
dilution «f »

Cetalon= Cfille 2.5 3.75 5 6.25 7.5 8.75

en (mol/L)
*10-5

Volume de 2 3 4 5 6 7
prélèvement «
Vp » en ml

Vfinale (ml) 20 20 20 20 20 20

« A» à 520nm 0.18 0.25 0.31 0.39 0.48 0.56

A à 540nm 0.16 0.22 0.28 0.34 0.32 0.47

A de La solution mère de 2.5*10-5M à 540nm : 1.44

Et à 520nm : 1.62
2- et 3- :

On trace la courbe d’étalonnage en portant A= f(Cetalon). Et on détermine le

coefficient d’extinction molaire « ɛ (𝜆) » en L.mol-1.cm-1 du KMnO4.

C (*10-5 mol/L)

On sait que :

Composé (nm) ɛ (L.mol-1.cm-1)

MnO4− 525 2250
MnO4− 520 2120

Et quand on a déterminé le coefficient d’extinction on a trouvé :

ɛ= 6200 L.mol-1.cm-1
Sachant que : ɛ= A/C

La valeur approximative est très loin de la valeur exacte (on ne

peut même pas calculer l’erreur par cette valeur car on va trouver
192% ??? est ce n’est pas juste du tout).
Donc on dit que :

-soit on a mal préparé les solutions

-sinon le problème vient de l’appareil (l’appareil a commencé de perdre ses

performance

Alors on a décidé a calculer l’absorbance des solution de même concertation que

les solutions précédentes par un autre appareil ou on a trouvé :

A1 A2 A3 A4 A5 A6
0.054 0.082 0.108 0.14 0.16 0.19
As.m= 0.54 de 2.5*10 M
-4

- On trace la courbe d’A=f (C)

C (*10-5 mol/L)

On voit que la valeur approximative est presque égale a la valeur exacte de

coefficient d’extinction pour 𝜆=520nm

4-il faut régler le spectrophotomètre sur la longueur d’onde 530nm parce que :

La dérivée d'un extremum est nulle. Autrement dit, une petite variation de
longueur d'onde n'aura pas trop d'incidence sur l'absorption et donc sur la
mesure.
Ensuite ils viennent se greffer d'autres considérations comme des spectres
parasites, etc.

Et aussi les molécules d'intérêt émettent uniquement dans cette gamme de

longueur d'onde.

Notion :
Le permanganate de potassium n'absorbe quasiment pas la lumière pour des
radiations de longueur d'onde  < 450 nm (bleu) et > 600 nm (rouge). La
lumière non absorbée par la solution est donc un mélange de rouge et de bleu.
Or, nous avons vu que R + B = M, ce qui correspond à la couleur d'une solution
diluée de permanganate de potassium.

5-l’essai à blanc sert à éliminer l’absorbance :

As = AH2O + AKMNO4
As - AH2O = AKMNO4
Avec élimination de l’absorbance de H2O :

As = AKMNO4
6-on vérifie la valeur de ɛ (𝜆) trouvée avec celle de la littérature. Calculer l’écart
relatif :
ɛ mesur é −ɛ thé o
P%= ɛ th é o
*100
2160−2120
p= 2120 *100

p=1.89%
7- L’absorbance (A) mesuré du dakin est :

a- par le 1er appareil A=0.32

b-par le deuxième appareil A= 0.136

8- On détermine par interpolation la concentration molaire KMnO4 (mol/litre) dans le
dakin :

0.136

6.182

C (*10-5 mol/L)
CKMnO4= 6.182*10-55 mol/L
-On déduit sa concentration massique « t » :
Sachant que : t=C*M et M=158g/mol
t=6.182*10-5*158
t= 0.00976756g/L
9-on compare notre concentration massique « t » à celle de l’étiquette du flacon
ttheo – tmesuré = 0.01-0.00976756=0.00023244
On calcule l’écart relatif :
t mesur é −t( thé o)
P%= t (th é o)
*100

0 .01−0 . 00976756
P%= 0 .01
*100
 P= 2.32%
10- Si la couleur perçu du KMnO4 est rose (magenta) alors la couleur du
rayonnement absorbé par cette substance est verte

Conclusion :
L’absorbance est proportionnelle à la concentration de l’espèce
coloré (loi de Beer-Lambert)
Il est possible de déduire les concentrations par le spectrophotomètre
en déduisant l’absorbance