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Spectrométrie de Masse

Principe
Ionisation-Séparation-Détection
Analyse d’un échantillon pur : chromatographie
préalable puis :

Vide

ENCPB, 2009
Repères historiques
1910 : J.J. THOMSON mesure des abondances
isotopiques du néon 20 et 22 (gaz). (Prix Nobel en
1906)
1938 : Premier spectre de masse d'une molécule
organique : le benzène.
1959 : GOLKE réalise le premier couplage de la
chromatographie en phase gazeuse avec la
spectrométrie de masse CG-SM.
1966 : BECKER : ionisation chimique.
1975 : première CPG-SM sur colonne capillaire
1981 : BARBER : source à bombardement d'atomes
rapides FAB. Possibilité d'analyse de molécules
d'intérêt biologique.
1985 : HILLENKAMP : MALDI (Matrix Assisted Laser
Desorption Ionization). Application au séquençage de
peptides.
1988 : FENN : Electrospray (ESI) : permet les
mesures de hautes masses moléculaires (peptides).
Prix Nobel de Chimie 2002

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Ex. de spectres
de masse

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Les techniques
d’ionisation

- impact électronique
- ionisation chimique
- électrospray
- phase solide
Ionisation par impact
électronique (IE-EI)

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Impact électronique
(IE-EI)

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Types d’ionisations

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Ex. de l’acide benzoïque

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Les différents massifs
Massifs de
fragmentation
Massifs
isotopiques

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Table
d’isotopes

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Massifs
isotopiques

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Cas des macromolécules
(molécules biologiques)

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Les analyseurs

Quadripôles, trappes ioniques,


temps de vol et les autres
Analyseurs à secteur(s)
magnétique(s)

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Analyseurs à secteur(s)
magnétique(s)

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Les quadripôles
Description

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Lignes de champ dans un
quadripôle

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Parcours autorisé dans
un quadripôle

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Bilan du « Quad »
Gamme de masse : entre 10 et 4000 m/z.
Précision : 0,1-1 m/z
Vitesse de balayage : 5000 m/z /s.

Le temps de vie d’un ion de sa formation à sa détection est de 40 à 100 µs.

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Détection des ions

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Ionisation Chimique
(IC-CI)
Ionisation Chimique
La pression du gaz
réactant
(méthane,butane,NH3)
dans la source d'ions
est suffisante pour
entraîner des réactions
de transferts de
charges.
Ionisation plus douce
qu’en IE
Ions pseudo-
moléculaires ([M+H]+ en
mode positif ou [M-H]-)
en mode négatif et
fragments.

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Ionisation Chimique

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IE en phase gaz, et la
phase liquide ? :
l’Electrospray
Electrospray

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Massifs multiprotonés

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Estimation de la masse
molaire

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Analyseur :
trappe ionique
Analyseur :
trappe ionique
Trappe ionique

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Trappe ionique

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Analyseur : FTICR

Résonance Cyclotronique
Ionique à Transformée de
Fourier
FTICR-FTMS

www.chm.bris.ac.uk/ms/theory/fticr-massspec.html.

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Ionisation par
désorption
MALDI : Matrix Assisted
Laser Desorption
Ionization
Solide dispersé dans une matrice, irradié par un laser
dont la longueur d'onde est située dans la bande
d'absorption de la matrice.
Désorption de molécules ionisées intactes. On peut
observer l'ion :
 M+, (M+H)+, (M+Na) +,
 (M-H)-,
 des ions multichargés (M+2H)2+, (M+3H)3+,
 (M-3H)3-, etc.
 mais peu d'ions fragments.

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Désorption laser

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Analyseur à temps de
vol
Temps de vol

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Station TOF

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Bruker Daltonics
Autoflex MALDI-TOF

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Reflecteur

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Mode linéaire / réflecteur

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Bilan
Analyseur Secteur Quadripôle TOF FTICR
magnétique

Domaine de 100 000 < 5000 illimité 100 000


masse
Sensibilité **** ** **** *****

Résolution **** ** **** *****

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Tandem

CID : Collision Induced Dissociation

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LC-MS-MS

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Influence de l’énergie de
collision

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MALDI TOF-TOF

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Ultraflex
Brucker

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MALDI-PSD

Post Source Decay

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Applications de la SM au
séquençage peptidique

Nécessité d’un fragmentation


Acides aminés

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Fragmentations peptidiques

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Etude de peptides

ENCPB, 2009
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ENCPB, 2009
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Analyses de résidus
trypsiques par SM

Figures extraites de « NOUVELLES APPROCHES DE LA SPECTROMETRIE DE MASSE EN TANDEM POUR LA CARACTERISATION DE


BIOMOLECULES. APPLICATIONS A LA PROTEOMIQUE » par Elsa WAGNER, thèse de doctorat de l’UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE
STRASBOURG, 2004.

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Exemple
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ENCPB, 2009
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Bibliographie
Spectrométrie de masse - René BOTTER,
Guy BOUCHOUX - Techniques de
l’Ingénieur, traité Analyse et Caractérisation -
PE 2 615.
Couplages chromatographiques avec la
spectrométrie de masse - Frédéric de
MAACK, Michel SABLIER - Techniques de
l’Ingénieur, traité Analyse et Caractérisation -
PE 2 614.

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E. de HOFFMANN. J. CHARETTE. V. STROOBANT.
Spectrométrie de Masse : cours et exercices corrigés.
Dunod. 2ème édition, 1999.
E. CONSTANTIN. P. TRALDI. D. FAVRETTO. A.
SCHNELL. Spectrométrie de Masse : Principes et
Applications. Technique et Documentation Lavoisier.
2ème édition, 1996.
R. B. COLE. Electrospray ionization mass
spectrometry : fundamentals, instrumentation and
applications. John Wiley and Sons. 1997.
Alex. G. HARRISON. Chemical Ionization - Mass
Spectrometry. 2ème édition, 1992.
F.W. McLAFFERTY. Frantisek TURECEK.
Interpretation of Mass Spectra. University Science
Books. 1993, 4ème édition.

ENCPB, 2009
R. M. Silverstein, Spectrometric
Identification of Organic Compounds,
7th Edition
, Wiley, 2005, 512 p.
R. M. Silverstein, Identification
spectrométrique de composés
organiques, De Boeck, 1998, 432 p.
Sur le Net :
 http://www.ms-textbook.com/
 http://www.chem.arizona.edu/massspec/example
_html/examples.html
 http://www.chez.com/dalmeyda/cours/spectrode
masse/interpretation-ms.pdf

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