La RMN à une dimension donne la position et l’intensité des pics de résonance ainsi que les

couplages à courtes distances. La RMN 2D permet en fait de montrer les corrélations plus
complexes existant entre les spins. Ces spectres sont particulièrement utiles lorsque la taille
de la molécule étudiée augmente.

Le développement des techniques 2D (COSY, NOESY, XHCORR, etc.)

 Détermination des structures des macromolécules
 Détermination des distances internucléaires est donc complémentaire à la
cristallographie par rayon X
Principe de la spectroscopie de R.M.N à deux dimensions
L'expérience de RMN à deux dimensions repose sur une succession de trois intervalles de
temps et dans certains expériences s’y ajoute une autre période avant la détection :
Le temps de préparation:
Préparation du système de spins à étudier pour l’expérience. Par exemple,
création de l’état à mesurer à l’aide d’une impulsion radiofréquence, ou expérience de
découplage.
Le temps d’évolution:
Le système de spin évolue sous l’effet de divers facteurs, ceci étant fonction du déplacement
et des couplages scalaires du noyau correspondant. Il y a modulation, on parle de «
marquage ».
Le temps de mélange/transfert:
Réalisation de transferts d’aimantation ou de polarisation de manière à pouvoir corréler
des spins entre eux:
* transfert d’aimantation par voie scalaire (liaisons chimiques)
* transfert d’aimantation par voie dipolaire (proximités dans l’espace)
* échange chimique.
La détection:
Acquisition du signal modulé

- 2 variables temporelles t1et t2

Expérience à 2 dimensions:
- Double transformée de Fourier

Une première transformée de Fourier par rapport à t 1 nous donne un interférogramme.

Une deuxième transformé de Fourier par rapport à t2 donne un spectre à 2D (1 et 2).

Cross Peak

Double
TF
Caractéristiques de la carte

* La diagonale principale est occupée par le spectre conventionnel;

* La projection sur chacun des axes conduit à nouveau au spectre 1D;

* Les informations de corrélation sont données par les pics hors Diagonaux (A-B-D) et (C-E).

* Les taches observées montrent des interactions entre noyaux. On dit que ces noyaux sont
corrélés.

Interactions scalaires Homonucléaires

= couplage
1
H-1H

Interactions dipolaires Hétéronucléaire

= Proximités spatiales 1
H-13C
Corrélations homonucléaires

COSY: COrrelation SpectroscopY

Permet de faire apparaitre sur une carte 2D des taches de corrélations entre
protons couplés par couplage scalaire direct. Les taches de corrélation se
présentent de part et d’autres de la diagonale d’autocorrélation.

Spectroscopie résolue en J

Couplage homonucléaire
- COSY - TOCSY - COSY-relayé

H1 H2 H3 H4
HO C C C C H
H H H H
Couplage Hétéronucléaire

XHCORR
COLOC
Structure générale d’un diagramme 2D homonucléaire
spectre COSY: H-RMN

2
Corrélations Hétéronucléaires

HSQC (Heteronuclear Simple Quantum Coherence): permet de faire apparaitre des

taches de corrélation entre un 1H et un 13C couplés par couplage scalaire et séparés par
une seule liaison scalaire.
HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Coherence) permet de faire apparaitre des taches
de corrélation entre un 1H et un 13C couplés par couplage scalaire et séparés par deux ou
trois liaisons scalaires.
HSQC spectre
HMBC spectre
Spectre HETCOR: H-RMN et 13C-RMN
Les corrélations par effet
NOE
* Information Spatiale
* Interaction dipolaire entre deux spins —C — ~ —C —
géométriquement proches
* Interaction en 1/r6 et les corrélations ne sont plus Ha Hb
visibles au delà de 5 Å.
r  0.5nm

Spectre NOE

H-H H-H

H-H
H-H
Analyse des spectres à 2D

* L’information est répétée deux fois (cartes Leucine tyrosine

symétriques) COSY

* On se limite à l’étude de la moitié de la carte

* On cherche sur les lignes et colonnes les taches de
corrélation
* Chaque tache correspond à une interaction
dipolaire
* L’intensité de la tache est fonction de la force de
cette interaction, donc de la distance entre les deux
noyaux Leucine tyrosine
Correlation spectroscopy TOCSY
Spectroscopie TOCSY : Total correlation spectroscopy
Permet de faire apparaitre des couplages relayés entre
protons couplés par couplage scalaire direct jusqu’à 4
ou 5 liaisons covalentes. En plus des taches observées
en COSY, apparaissent de nouvelles taches dus au relai
entre protons.
Spectroscopie NOESY: Nuclear Overhauser Enhancement SpectroscopY

Basée sur le NOE Connexions 1H-1H à travers l’espace jusqu’à 5 Å.

Spectroscopy ROESY: Rotating Overhauser Effect SpectroscopY

Les spectres NOESY et ROESY permettent de faire apparaitre des taches de corrélation
entre protons couplés par couplage dipolaire à travers l’espace. Lorsque la distance
augmente, l’intensité de la tache diminue. Ils sont spécialement intéressantes pour la
détermination de distances interatomiques.