Université ABOU-BEKR BELKAID.

Tlemcen
Faculté de Médecine
Département de pharmacie

Le : 21/11/2022

Module : Biophysique

Compte rendu de TP N°01 thème n°01 :

‘ Etude spectrophotomètre du violet cristallisé ’

Le binôme: ADOUN IBRAHIM.

ALIANE AKRAM ALAA EDDINE.

SOMMAIRE :
1. Introduction.
2. Le but.
3. Le principe.
4. Matériel utilise.
I. Produits utilises.
II. Etude spectrophotométrique du violet cristallisé.
III. Vérification de la loi de Beer-Lambert.
IV. Détermination d’une concentration inconnue.
V. Mesure de l’absorbance d’une solution concentrée.
VI. Conclusion.
I. Introduction :
La spectrophotométrie (ou absorptiomètre) est une technique relativement
récente qui doit son essor aux progrès de la mécanique quantique. Cette
méthode repose sur le fait qu’une lumière va être absorbée en partie lorsqu’on
l’envoie dans une solution. L’absorption dépend de plusieurs paramètres, dont
les concentrations des espèces en solution, qui peuvent être ainsi déterminées.

II. Le but :
-La détermination de la longueur d’onde maximale de violet cristallisé.
-La vérification de loi de Beer-Lambert.

III. Le principe :
On va utiliser un colorimètre qui est un appareil photosensible utilisé pour
mesurer la transmittance et l'absorbance de la lumière traversant un échantillon
liquide pour un petit nombre de longueurs d'onde prédéterminées.
La lumière monochromatique incidente d’intensité I 0 traverse alors une cuve
contenant la
Solution de Viollet cristallise étudiée, et l’appareil mesure l’intensité It de la
lumière transmise. La valeur affichée par le spectrophotomètre est l’absorbance
à la longueur d’onde étudiée.

IV. Matériel utilisé :

Colorimètre
Violet cristallisé
Cuves
Eau distillée
Fioles de 100, 50, et 25 ml
 Béchers (150 ml)
Pipette

V. Produits utilisés :
Eau distillée.
Violet cristallisé.

VI. Etude spectrophotométrique du violet cristallisé :

Mode opératoire pour le colorimètre :

Faire le zéro (ou « faire le blanc ») pour mesurer l’absorbance d’une espèce A
dans une solution B, (A =solution de violet cristallisé à la concentration
massique de 6 mg/l. B = eau distillée) on commence par mesurer l’absorbance
de B et on règle le colorimètre pour y attribuer la valeur 0.
Précautions :
-Il faut veiller à éliminer les bulles d’air qui se forment lors du remplissage des
cuves
-Il faut essuyer soigneusement avec du papier Josef les faces des cuves
traversées par le faisceau lumineux afin d’éliminer, entre autres, toutes traces de
doigts.
-Le colorant a une très forte tendance à s’adsorber sur les parois de la cuve, il
faut donc après chaque mesure :
1. Vider la cuve et la rincer soigneusement puis ne la remplir à nouveau
qu’au moment de la lecture suivante.
2. Si la couleur violette devient persistante sur la cuve, les mesures sont
faussées.
3. Nettoyer la cuve avec de l’acétone si elle est en verre ou la jeter si elle
est en polystyrène.

Détermination de la longueur d’onde maximale du violet

cristallisé :

Apres la manipulation avec le colorimètre du violet cristallisé on a :

 λ L’absorbance
430 0.16
470 0.30
490 0.33
540 0.88
580 0.91
600 0.33
710 -0.04

On constate que ʎmax=580nm (cette valeur ne dépend pas de la

concentration).

VII. . Vérification de la loi de Beer-Lambert :

Dilution :
On a :
C fille x V fille = C mère x V mère
On aura :
C= C1/2 C1/4 C1/6 C1/8 C1/10
Vm = Vf/2 Vf/4 Vf/6 Vf/8 Vf/10
Vm= 25 ml 12.5 ml 8.3 ml 6.25 ml 5 ml

Mesure de l’absorbance (et tracement de graphe) :

Après la manipulation :
Pour ʎ=580nm :

C C1(6mg/l) C1/2 C1/4 C1/6 C1/8 C1/10

Absorbance 0.91 0.22 0.12 0.08 0.06 0.03
 A=F(c)
1

0.9 0.91

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2 0.22

0.1 0.12
0.08 0.06
0.03
0
C1(6mg/l) C1/2 C1/4 C1/6 C1/8 C1/10

Commentaire et détermination du coef d’absorption molaire :

Une courbe linéaire passant par 0 et d’après la loi de beer Lambert A = ε l C…1
(avec A est l’absorbance (sans unité), ε le coefficient d’extinction molaire (en
L.mol-1.cm-1) et l le trajet optique (en cm).), l’absorbance et la concentration
sont des grandeurs proportionnelles est donc une droite qui passe par le 0.
Donc A=a*c …2 → a=A/c
Cm=C*M →C=Cm/M avec M=408.19*10³ mg/mol
a =M* A/Cm= M*(0.47-0/1.5-0) =127900.54 l/mol

1et 2 ……. a= ε l …… ε=a/l=127900 l/mol.cm

VIII. 9.Détermination d’une concentration inconnue :

La mesure de A d’une solution de concentration inconnue à ʎmax est A=0.06

et partir de graphe en trouve que Cx=0.75mg/l
Avec le calcul : A = ε l C ……. Cx=A/ ε l
Cx=0.06/127900*1=4.69*10^-7 =0.752mg/l

IX. Mesure de l’absorbance d’une solution

concentrée :
Violet cristallisée 120mg/l ……. Après manipulation on trouve que A=1.87
A(opaque)= 1.87

DONC :
Si on augment la concentration l’absorbance devient
constante.

REMARQUE :
On observe que la loi de Beer –Lambert est applicable uniquement
pour les concentrations qui est à la partie rectiligne de la trace donc
Cette loi n'est valable que pour les faibles concentrations et en général
pour des absorbances inférieures à 1.

L’intérêt de déterminer la longueur d’onde maximum

d’absorption :

On règle le spectrophotomètre à la longueur d'onde correspondant au maximum

d'absorbance de la solution étudiée, pour une plus grande précision et une plus
grande sensibilité des mesures.

X. . Conclusion :

Sur la base des données ci-dessus, l'absorption A dépend de la longueur

d'onde ʎ et est proportionnelle à la concentration de matière C dans la solution.
Aussi on dit que La loi de Beer-Lambert établit une proportionnalité entre la
concentration d'une entité chimique en solution et l'absorbance de celle-ci et la
longueur du trajet parcouru par la lumière dans la solution.