Filière Science de la Vie (SVI – S3)

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Module de Microbiologie générale

TP de Microbiologie

Isolement bactérien en utilisant un milieu sélectif et différentiel

 Isolement bactérien en utilisant un milieu sélectif et différentiel

Objectifs

* Réaliser un isolement par l’utilisation d’un milieu sélectif et

différentiel :

Exemple : Milieu de Chapman

* Apprendre à faire la lecture de milieux sélectifs et

différentiels
Isolement sur milieu sélectif et différentiel « Milieu Chapman »

Aspect du Mode Sélectivité / Caractères

milieu avant d’ensemen- composition recherchés
utilisation cement

L'ensemencement Ce milieu contient un On peut étudier

doit être massif, en inhibiteur : forte la fermentation
stries serrées : concentration en du mannitol par
chlorure de sodium virage au jaune
(NaCl : 75 g.l-1), de l’indicateur
coloré, le rouge
ce qui permet un de phénol
isolement sélectif
de Staphylococcus
tolérant les fortes
concentrations en
NaCl
 Protocole expérimental :
- Divisez chaque boite de Pétri en 3 secteurs.

- Ensemencer chaque section par à l’aide d’une anse de platine par l’une des
colonies (A, B et M : mélange) striation
Gélose nutritive
Chapman
(Témoin)

A B A B

M M

A : Staphylococcus aureus, B : Escherichia coli, M : Mélange des 2 souches A et B.

 Protocole expérimental :

Gélose nutritive
Chapman
(Témoin)

A C A C

M M

A : Staphylococcus aureus, C : Bacillus subtilis, M : Mélange des 2 souches A et C.

 Composition des milieux de culture
Milieu de Chapman (g/l) Gélose nutritive (g/l)

- Peptone (source de C et N) 10 - Peptone 20

- Mannitol (Sucre: Source de C) 10 - Extrait de viande 2

- NaCl 75 - NaCl 5

- Rouge de phénol 0,025 - Agar-agar 15

- Extrait de viande 1 - Eau distillée qsp 1 litre

- Agar-agar 15

- Eau distillée q.s.p. 1 litre

Milieu Chapman :
Agent sélectif : NaCl à 75 g/l
Agents différentiels : Mannitol : Sucre
Rouge de phénol : Indicateur de pH
 Virage du rouge de Phénol en fonction du pH

Dégradation du Mannitol : Mannitol +  production d’acides  Virage du rouge de phénol en jaune

(Colonies jaunes)
Lecture des résultats : Milieu Chapman
 Lecture des résultats : Milieu Chapman

A : Staphylococcus aureus, B : Escherichia coli, M : Mélange des 2 souches A et B.

A : Staphylococcus aureus, C : Bacillus subtilis, M : Mélange des 2 souches A et C.