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Laboratoire de Biotechnologie, U.F.R Biosciences, Université de Cocody ; 22 B.P. 582 Abidjan 22 (Côte d’Ivoire)
RESUME
Deux cellulases C1 et C2 extraites des ouvriers du termite Macrotermes subhyalinus ont été purifiées et
homogénéisé en combinant les chromatographies de basse et de haute pression [HPLC]. L’électrophorèse
sur gel sds polyacrylamide a montré une seule bande pour chaque cellulase purifiée. La cellulase C1 a eu
un pH optimum de 4,5, une température optimale de 45 °C et un poids moléculaire de 63 KDa, tandis que
la cellulase C2 a eu un pH optimum de 4, une température optimale de 40 °C et un poids moléculaire de
27 KDa. L’effet des effecteurs a montré que l’ion Mn2+ est très activateur des deux formes de cellulase.
L’activité spécifique de la cellulase C1 a été de 14,71 UI/mg de protéine et celle de la cellulase C2 de 8,83
UI/mg de protéine.
ABSTRACT
Two cellulases C1 and C2 isolated of the workers of the termite Macrotermes subhyalinus have been purified
to homogeneity while combining the different chromatographic techniques of low and high pressure [HPLC].
Polyacrylamide gel electrophoresis shows only one strip for every purified cellulase. The cellulase C1 has
an optimum pH of 4.5, an optimal temperature of 45 °C and a molecular weight of 63 KDa while the cellulase
C2 has an optimal pH of 4, an optimal temperature of 40 °C and a molecular weight of 27 KDa. The effect
of the ions showed that the Mn2+ ion is a lot of activator of the two shapes of cellulases. The specific activity
of the cellulase C1 is of 14.71 UI/mg of protein and the one of the cellulase C2 is of 8.83 UI/mg of Protein.
INTRODUCTION
Dans la recherche de nouvelles sources L’hydrolyse de la cellulose nécessite l’action
d’énergie renouvelable, des polysaccharides synergique de l’endocellulase, l’exocellulase
tels que l’amidon et la cellulose ont été testés et l a ß -g l ucosi dase, à ca use de sa
pour produire des sucres simples fermen- cristallinité, son complexe avec la lignine et
tescibles. La fiabilité technique et économique les autres composés qui lui sont associés
des processus d’utilisation de ces polymères (Arunik et al., 1988).
dépend de l’optimisation des diff érents Pour pouv oir hydrolyser les polymères
paramètres d’hydrolyse tel que la production naturels, nous avons entrepris l’extraction, la
des enzymes, la nature des substrats, le purification, l’homogénéisation et la déter-
prétraitement et les conditions d’hydrolyse mination des propriétés physico-chimiques de
(Martin et al., 1987). deux cellulases des ouvriers du termite
____ Absorbance
------ Activité
Activité UI/ml
Nombre de fractions
____ Absorbance
------ Activité
Absorbance à 280 m
Fraction F1
Fraction F2
Absorbance à 280 m
Activité UI/ml
Activité UI/ml
10
Activité (10-3) UI
6
5 C2
4 C1
0
2 3 4 5 6 7
pH
10
9
8
Activité (10-3) UI
7
C1
6
C2
5
4
3
2
20 30 40 50 60 70
Température (°C)
Albumine bovine
30 C2
Cytochrome c
0
0 10 20 30
Temps (mn)
Temps (min)
Détermination des constantes de Les ions utilisés sont sous forme de chlorures.
Michaelis et actions des cations sur les L’ion Mn2+ active les deux formes de cellulases,
cellulases C1 et C2 alors que l’ion Hg2+ les inhibe fortement. L’ion
Les cellulases C1 et C2 ont respectivement des Sr2+ active la cellulase C1 et inhibe la cellulase
Km de 3,84 (mg/ml)-1 et de 6,66 (mg/ml)-1 C2. L’ion Ni 2+ inhibe la cellulase C1 et active
(Figure 7). la cellulase C2 (Figures 8 et 9).
Le Km de la cellulase C1 a été le même que L’inhibition de l’activité cellulasique par l’ion Hg2+
celui de la celulase de Aspergillus japonicus s’expliquerait par sa fixation sur les groupements
(Kundu et al.,1988). thiols essentiels de l’enzyme (Kundu et al.,1988).
4
3,5
3
1/v min/micromoles
2,5
C1
2
C2
1,5
1
0,5
0
-0,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5
1/s (ml/mg)
300 C1
250
0 Ni2+
Ni
2+
Figure 8 : Effets des ions Mn2+ et Ni2+ sur l'activité des cellulases C1 et C2.
Effects of Mn2+ and Ni2+ cations on the activities of C1 and C2 cellulase enzymes.
180
160
C1
activité résiduelle (%)
140
120 Sr2+
Sr2+
100 Sr2+
Sr2+
80 Hg2+
Hg2+
60 C2
Hg2+
Hg2+
40 C1
20 C2
0
0 2,5 5 7,5 10 12,5
concentration (10-3mM)