Effet des tensioactifs sur les propriétés thermiques, conformationnelles et rhéologiques propriétés

du collagène Le collagène est un biomatériau important et son interaction avec le tensioactif est
importante à la lumière de son utilisation dans diverses applications cosmétiques et
dermatologiques. Actuellement, l'effet des tensioactifs sur le les propriétés physico-chimiques du
collagène ont été étudiées. La stabilité thermique du collagène est réduite de sulfate de dodécyle de
sodium et bromure d'hexadécyltriméthylammonium, contrairement au Triton X - 100. La viscosité du
collagène est fortement influencée en fonction des concentrations de tensioactifs. Le secondaire la
structure du collagène montre des changements uniquement dans l'ellipticité molaire. Le rôle de la
charge et de la concentration de les tensioactifs influençant les diverses propriétés physico-
chimiques du collagène ont été élucidés Le collagène est la protéine du tissu conjonctif la plus
abondante dans animaux multicellulaires, y compris l'humanité. C'est aussi largement utilisé
matériau pour la fabrication du cuir, de la gélatine et des biomatériaux tels que la peau artificielle.
C'est un composant majeur de la matrice extracellulaire dans de nombreux tissus, et son
métabolisme est directement associé à de nombreux processus physiologiques d'adaptations
biologiques et tissulaires régénération [1]. La molécule de collagène de type I est un droitier triple
hélice. Il est stabilisé par des liaisons hydrogène directes inter-chaînes et des liaisons hydrogène
médiées par l'eau inter et intra - chaîne [2,3]. Les tensioactifs, sont des agents mouillants qui
abaissent la tension superficielle de un liquide, permettant un étalement plus facile, et abaisse la
tension interfaciale entre deux liquides [4]. L'interaction entre les tensioactifs et les protéines ont des
conséquences importantes pour de nombreux processus dans l’Industries chimiques, biochimiques,
pétrochimiques et pharmaceutiques, pour obtenir la solubilité, les propriétés rhéologiques
souhaitées, et stabilité colloïdale des systèmes. Trois types de tensioactifs en fonction de leurs
différences de charges ont été choisis pour cette étude à savoir, le dodécyle sodique anionique
sulfate (SDS), bromure cationique d'hexadécyltriméthylammonium (CTAB) et Triton X-100 non
ionique. La FDS est couramment utilisée dans la préparation de protéines pour l'électrophorèse sur
gel de polyacrylamide (PAGE DE LA FICHE SIGNALÉTIQUE) [5]. SDS fonctionne en perturbant les
liaisons non covalentes dans les protéines, les dénaturant ainsi, faisant perdre aux molécules leur
forme native (conformation). Il est largement utilisé comme solubilisant de matériaux biochimiques
généralement insolubles [6], comme dissociant agent pour les complexes protéine-acide nucléique
[7]. Le bromure de cétrimonium ((C16H33) N (CH3) 3Br) est l'un des composants de l'application
topique cétrimide antiseptique. Le cation cétrimonium (ou hexadécyltriméthylammonium) est un
agent antiseptique efficace contre les bactéries et les champignons [8]. Ses utilisations incluent la
fourniture d'une solution tampon pour le extraction de l'ADN. Il est également largement utilisé dans
les produits de conditionnement capillaire. Les tensioactifs non ioniques ont été sélectionnés car ils
sont susceptibles pour interférer avec les interactions hydrophobes mais sont beaucoup moins
dénaturantes que les interactions ioniques. Triton X-100 est utilisé dans les travaux biologiques tels
que pour la séparation des protéines dans les membranes cellulaires, et mélangé avec des
phospholipides, il produit des substrats efficaces pour étudier les enzymes de métabolisme des
phospholipides [9]. Des agents tensio-actifs non ioniques sont employés en tant qu'a agent mouillant
dans le laboratoire de microscopie et d'histologie, dans le sous forme de solutions diluées, il est
utilisé comme agent mouillant pour effectuer certains protocoles de coloration et est également
utilisé comme agent mouillant pour le nettoyage des couteaux diamantés. Dans cette étude, l'effet
de différents types de tensioactifs sur les différentes propriétés physico-chimiques des le collagène
comme la stabilité thermique, la stabilité conformationnelle et les caractéristiques rhéologiques ont
été étudiés car le collagène est largement utilisé utilisé un biomatériau dans des applications
cosmétiques et dermatologiques.

MATERIELS UTILISE

L'eau distillée désionisée de Millipore (Milli-Q) (18 M) était utilisé pour les expériences. Tous les
fluides utilisés dans l'étude étaient de qualité HPLC et obtenus auprès de Merck, en Inde. La
curcumine était obtenu auprès de Sigma Chemicals, États-Unis. Agents tensioactifs CTAB (AR), FDS et
Triton X-100 ont été achetés chez SD Fine Chemicals, Merck Produits chimiques et Sigma Chemicals,
respectivement.

2.2. Préparation de la solution de collagène et traitement avec agents tensioactifs

Des solutions de collagène ont été préparées à partir de tendons fraîchement disséqués de la queue
de rats albinos mâles âgés de 6 mois congelés à -20 ◦C par extraction à l'acide acétique et relargage
au NaCl [10]. La pureté de la préparation de collagène a été confirmée par le sodium électrophorèse
sur gel de sulfate de dodécyle et de polyacrylamide. Le collagène la concentration dans les solutions
a été déterminée à partir de la teneur en hydroxyproline [11]. Le poids moléculaire moyen du
collagène était de 300 000 Da, sur la base desquels la concentration molaire était déterminé. La
concentration en stock du collagène préparé était Une solution de collagène à 0,2 M a été traitée
avec trois tensioactifs à savoir., SDS, CTAB et Triton X-100 dans l'augmentation du rapport molaire de
collagène à tensioactif au 1: 1, 1: 10 et 1: 100 et incubé pendant 24 h sous chambre température (25
° C).

2.3. Mesures de dichroïsme circulaire (CD)

Une solution de collagène purifiée a été incubée en présence de trois types de tensioactifs à 25 °C
pendant 24 h et les spectres ont été enregistrés utilisation d'un spectropolarimètre à dichroïsme
circulaire Jasco 715. Un scan une vitesse de 20 nm par minute a été utilisée avec une moyenne de
trois balayages par échantillon. Une largeur de fente de 1 nm et une constante de temps de 1 s ont
été utilisées. Une cellule de 1 mm a été utilisée pour les expériences. Un spectre de référence un
tampon contenant de l'acétate (pH 4,2) a également été enregistré. L'addition des tensioactifs
pourraient modifier le pH de la solution de collagène par conséquent, tous les mesures ont été
effectuées en solution tampon acétate pour éviter Le pH change. Les spectres CD des échantillons
ont été obtenus après soustraction du spectre de référence. Changements dans la conformation de
du collagène additionné de trois types de tensioactifs a été enregistré. La concentration en collagène
(0,04 × 10-6 M) a été fixée et la concentration en tensioactif a varié de 0,04 × 10-6 M à 4 × 10-6 M
pour CTAB, SDS et Triton X-100 pour donner des rapports molaires 1: 1, 1: 10 et 1:100.

2.4 Mesures de stabilité thermique

Les tendons de queue de rat (RTT) ont été traités avec 0,1% de trois tensioactifs solutions à pH 4,0
pendant 48 h. Le rat natif et les tensioactifs traités les tendons caudaux (RTT) ont été épongés
uniformément pesés et encapsulés hermétiquement dans des casseroles en aluminium. Les
échantillons ont été fusionnés dans un cellule calorimétrique à balayage différentiel des instruments
DSC Q200 TA. La température a été étalonnée en utilisant l'indium comme étalon. La vitesse de
chauffage a été maintenue constante à 3 ◦C / min. La dénaturation température, TD (en ◦C) associée
à la phase et à l'enthalpie les changements pour les fibres natives et traitées avec des tensioactifs ont
été déterminés.

2.5. Mesures de viscosité

Des mesures de viscosité ont été effectuées à l'aide d'un type Ostwald viscosimètre. Le viscosimètre
a été placé dans un bain-marie et contrôlé thermostatiquement à 18 ± 1 ◦C. Le même viscosimètre a
été utilisé pour toutes les mesures et a été monté de sorte qu'il occupait toujours la même position
dans le bain. Les mesures de viscosité ont été fabriquées de 10 ◦C à 40 ◦C à intervalles de 5 ◦C. Cette
agrégation induite par la chaleur s'inverse lors du refroidissement. Les temps d'écoulement des
échantillons de collagène ont été mesurés après un temps d'équilibre thermique de 30 min. Les la
concentration en collagène (0,04 × 10-6 M) a été fixée et les mesures ont été effectuées avec
différentes concentrations de tensioactifs, 0,04 × 10-6 M à 4 × 10-6 M. La mesure de la viscosité était
basée sur le débit de solution de collagène à travers le capillaire d'un viscosimètre Ostwald. Dans ces
expériences, la contribution de la viscosité () due au collagène a été mesurée en fonction de la
concentration de tensioactifs. Le temps d'écoulement a été mesuré avec un chronomètre numérique
au moins trois fois et la moyenne a été prise. La viscosité relative a été calculée à partir de la relation,
= (t-t◦) / t◦, où t◦ est le temps d'écoulement du tampon (pH 4,2, I = 2 × 10-2 M) et test le temps
d'écoulement pour chaque échantillon.

RESULTATS

Les spectres dichroïques circulaires (CD) UV lointains des solutions protéiques fournissent des
informations sur les teneurs en structure secondaire des protéines [12]. L'effet des tensioactifs à
diverses concentrations sur la structure secondaire du collagène a donc été étudié à l'aide de CD.
Collagène a été traité avec des concentrations de divers tensioactifs dans une molaire ratio de 1:1, 1:
10 et 1:100 pour étudier la stabilité conformationnelle de collagène. Les spectres CD UV lointains de
solutions de collagène traitées avec diverses concentrations de divers tensioactifs à 25 ◦C sont
représentés sur la Fig. 1. Le CD le spectre du collagène natif est en accord avec celui rapporté
précédemment [13]. L'addition des agents tensio-actifs à la solution de collagène n'a pas changé Les
spectres CD sont significatifs à une concentration donnée. Le spectre du CD révèle le spectre à un pic
positif à environ 220 nm et un négatif pic à 197 nm caractéristique de la triple hélice, qui diminue
pendant la dénaturation. À des concentrations plus élevées, plus de changements dans une ellipticité
molaire du collagène a été observée. Cela montre que le le déploiement du collagène est
étroitement lié aux concentrations. Il a été rapporté qu'en dénaturation complète, le pic positif à 220
nm disparaît complètement et la bande négative est devenue rouge décalé [14]. Aucun changement
de ce type n'a été observé par conséquent, les tensioactifs utilisés dans cette étude n'entraînent pas
de dénaturation du collagène aux concentrations utilisées dans cette étude. Le ratio Rpn (rapport de
pic positif à négatif dans un spectre CD) [15] donné dans le tableau 1 indique que le collagène est plié
ou précipité à une concentration extrême de tensioactifs. Les tensioactifs anioniques (SDS) et non
ioniques facilitent la thémicelle formation du collagène en améliorant l'interaction hydrophobe (car
l'interaction hydrophobe est responsable de la formation de micelles). Bromure de cétyle
triméthylammonium( CTAB), un tensioactif cationique, d'autre part, entravé la formation de micelles
du collagène en raison de l'effet répulsif entre l'ion N + du CTAB et l'ion NH3+ d'acides aminés
[16,17]. La différence dans le comportement de dénaturation du collagène RTT avec divers
tensioactifs suggère les différents modes d'interactions présentes entre SDS-collagène, Triton X-100
et des complexes CTAB-collagène. Les mesures calorimétriques différentielles à balayage (DSC) ont
été réalisé pour trouver l'effet des tensioactifs sur la stabilité thermique de collagène après
interaction. La transition de l'hélice endothermique à la bobine lors du chauffage dans le collagène
fibreux a été analysée par DSC et les changements d'enthalpie correspondants ont été déterminés.
Le CDN les thermogrammes sont représentés sur la Fig. 2. La réaction des tensioactifs avec le
collagène, est complexe et se déroule par étapes. Molécules tensioactives se lie immédiatement aux
sites sur les molécules de collagène dans son natif état, donnant une impulsion de chaleur positive
(exothermique). S'ensuit alors une réaction endothermique au voisinage du site de liaison, qui
pourrait La liaison d'une petite quantité non saturante de tensioactif provoque des changements de
configuration dans la molécule de collagène; les sites inoccupés peuvent changer en nombre ou dans
leurs affinités pour tensioactif. Le gonflement des fibres est affecté par la composition du gonflement
mélange similaire à la liaison—il augmente avec la quantité croissante de tensioactifs [18].
L'interaction du collagène avec le tensioactif procède d'abord sur la base des forces électrostatiques,
puis à travers une combinaison de forces électrostatiques et de réactions hydrophobes. L'interaction
des formations micellaires a un caractère coopératif [19,20]. Les interactions hydrophobes sont liées
au collagène dénaturation [21] et sont à nouveau coopératifs. On peut le voir de la Fig. 2 que le
traitement SDS et CTAB a entraîné une perte de stabilité thermique alors que le Triton X-100 non
ionique n'a pas affecté la stabilité thermique stabilité du collagène. Cela confirme à nouveau le rôle
joué par la charge interactions. La réduction de la viscosité du collagène dans divers environnements
à différentes températures est donnée à la Fig. 3. Il peut être vu de la figure que la viscosité diminue
avec l'augmentation de la température de divers tensioactifs. En outre, il y a une diminution
marquée de la viscosité à température autour de 35 ◦C comme température de fusion du collagène
est d'environ 37 ◦C [22]. Le % de diminution de la viscosité du collagène natif en augmentant la
température de 10 ◦C à 40 ◦C est de 37%. Cependant, le % de diminution de la viscosité pour CTAB,
SDS et Triton X-100 traités le collagène est respectivement de 60,35, 46,02 et 65,27. Cela indique que
l'interaction des tensioactifs a également une profonde influence sur le comportement rhéologique
du collagène. L'augmentation de la concentration de tensioactif de 1: 1 à 1: 100 a entraîné une
diminution moindre de la viscosité. Cela pourrait peut-être dû à l'agrégation de la protéine en
présence de concentrations plus élevées de tensioactifs.

4. Conclusions

L'interaction des tensioactifs avec le collagène a été étudiée dans ce travail. L'étude indique que la
charge de tensioactif a une rôle important à jouer dans l'influence des propriétés physico-chimiques
de collagène. Les changements dans la structure secondaire du collagène sur les interactions avec les
tensioactifs dépendent des concentrations de tensioactifs utilisés tels que vus à partir des mesures
de CD. Le rôle joué par tensioactifs en affectant les changements dans les propriétés physico-
chimiques de collagène a été élucidé.

A la fin de la mesure, on constate que l’augmentation des températures du système a

augmenté les solubilités de l’acide stéarique dans tous les solvants testés. L’acide stéarique est
donc le plus soluble dans l’acétate d’éthyle et le moins soluble dans le méthanol.