UNIVERSITE HASSAN II CASABLANCA ANNEE UNIVERSITAIRE 2020/2021

FACULTE DES SCIENCES AIN CHOCK

DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

TRAVAUX DIRIGES DE TECHNIQUES CHIMIQUES

A- Quelle sera la valeur de l’accélération en (g) si on centrifuge avec une vitesse de

rotation de 3000 rpm en utilisant un rotor de 10 cm ?

B- Quelle sera la concentration d’une substance X dont la valeur de la densité optique est
de 0,71 en utilisant une cuvette de 1 cm de largeur ? sachant que la valeur du
coefficient d’extinction molaire de X est de 14202 M-1cm-1.

C- Pour une électrophorèse sur gel de polyacrylamide, on a préparé le mélange suivant :

Composant Volume
ddH20 4,0 ml
Mélange d'acrylamide 30 % 3,3 ml
1,5M Tris pH 8.8 2,5 ml
10 % SDS 0,1 ml
10 % ammonium persulfate 0,1 ml
TEMED 0,004 ml

Déterminer le pourcentage du gel. En déduire le rôle de chacun des réactifs utilisés.

D- Une électrophorèse sur gel de polyacrylamide de notre échantillon montre que notre protéine
est tétramérique, en présence de SDS et Urée elle a montré le profil (1). Par contre en présence
de meracaptoéthanol elle a montré le profil (2)
 1. Donnez la Masse Molaire de la protéine.
2. Quelle est la structure de la protéine ? justifiez votre réponse

E- Une protéine de MM X kDa présente les caractéristiques suivantes :

- Après une électrophorèse sur gel de polyacrylamide-SDS en présence d’une température
élevée, elle donne deux bandes, l'une de 22 kDa et l'autre de 8 kDa (profil 1)
- Après traitement par le ß-mercapto-éthanol et électrophorèse sur gel de polyacrylamide-
SDS, elle donne 3 bandes : l'une de 22 kDa, les autres de 6 kDa et 2 kDa (profil 2).
- Après traitement par le ß-mercapto-éthanol et électrophorèse bidimensionnelle sur gel de
polyacrylamide-SDS, elle donne 4 taches (profil 3)

Interprétez les résultats obtenus en déterminant la masse molaire de la protéine, et sa structure

F- Une protéine enzymatique a été purifiée en utilisant des centrifugations différentielles

suivies d’une précipitation par le sulfate d’ammonium. Pour la dernière étape de la
purification aucune activité n’a été retrouvée si dans le culot ni dans le surnageant.
D’après vous quelle est la cause de la perte d’activité et Comment peut-on faire pour
récupérer cette activité.