DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE

Prélèvement :

Correctement identifié + renseignements cliniques +++ (interprétation)

Transport

rapidement possible au labo (<2h ).

Examen microscopique direct

l’état frais
Immobiles, asporulés parfois capsulés
Après coloration de Gram

Isolés ,ou groupés en diplocoque ou en amas

– altérées

Culture :

 Produits monomicrobiens : isolement facile en milieu non sélectifs (trypticase-soja, GS, MH).
 Produits polymicrobiens : milieux sélectifs :
 Chapman mannité: Milieu hypersalé à 75 g pour 1000ml de NaCl
 Baird Parker: au Tellurite, utilisé en bactériologie alimentaire;
 Milieux d’enrichissement: milieu liquide de Chapman (bactériologie alimentaire)

Identification

o Aspect des colonies

Voir caractères culturaux
o Identification du genre :
 Catalase
 Réaction d’oxydoréduction: H2O2 à 3% + colonie  formation de bulles d’O2.
 Sur lame ou tube à hémolyse
 Ne pas prélever sur GS car les érythrocytes possèdent une activité catalasique (faux +)
 Distingue les staphylocoques (catalase +) et les streptocoques (catalase -).
 Oxydase:

Négative chez la plupart des espèces du genre staphylocoque sauf: S. sciuri, S. lentus, S. vitulus.
 Positive chez les genres de Micrococcaceae : Micrococcus lyle, Micrococcus luteus,Kocuria kristinae, Kocuria varians..
 PRINCIPE:
MEE d’une enzyme : la phénylène diamine oxydase.
Capable d’oxyder : le N diméthyl paraphénylène diamine

o Identification de l’espèce :
L’espèce S.aureus doit être identifiée et différenciée des SCN.
Coagulase :
La coagulase libre est présente chez S.aureus, mais peut aussi être produite par S.intermedius ou S.hyicus.
 Mee de la coagulase libérée dans le milieu extérieur. Dans un tube à hémolyse on mélange :
 o 0,5ml de plasma de lapin reconstitué à partir d’un lyophilisat ;
o 0,5ml d’une suspension dense du germe à étudier.
 Le mélange est placé à l’étuve à 37°C et est incubé pendant 24h.
 Les souches de S.aureus provoquent la coagulation du plasma, le plus souvent lors des 3 premières heures. La prise en masse est généralement
totale, mais parfois légère et plus tardive, et la réaction doit être considérée comme positive si le phénomène intervient avant la 24ème heure.
Le mélange est observé d’heure en heure car le coagulum peut être suivi d’une redissolution du caillot provoquée par la fibrinolysine.
 Faux +, Si plasma citraté avec P. aeruginosa, S. marcescens , B. subtilis ou à l’existence de protéase.
 C’est le principal test caractérisant S. aureus: identification de 99% des souches.

Recherche de la nucléase thermostable : Dnase

 Cette thermonucléase est retouvée chez S.aureus mais aussi chez S.intermedius, S. hyicus, S.lugdunensis et parfois faiblement chez
S.epidermidis.
 la recherche est réalisée sur des géloses à ADN : on ensemence la souche à étudier en strie épaisse sur la gélose ADN en partant d’un bouillon
de 24h ou d’une colonie isolée ; après 18 h d’incubation à 37°c, la gélose est inondée avec une solution d’HCl 1M. si un halo clair apparait
autour de la strie au bout de 5 à 10min, la recherche est positive.
o Tests d’agglutination rapide
Des tests d’agglutination rapide permettant une identification présomptive de S.aureus par la recherche simultanée du facteur d’affinité pour le fibrinogène,
de la protéine A et de polysaccharides capsulaires de S.aureus.
 Quelques colonies de staphylocoques sont mises en suspension dans une goutte de latex ou d’hématies sensibilisées. Si une agglutination
franche apparait presque instantanément, la réaction est dite positive.
 Sensibilité : 90 à 100%, spécificité : 90 à 99%
 En pratique, on réalise deux tests pour l’identification de S.aureus :
Détection de la coagulase ou la Dnase + Test d’agglutination
 Parmi ces tests rapides, si deux sont trouvés positifs, on peut considérer que l’identification de S.aureus est validée, mais toute discordance
entre les deux tests utilisés nécessite une identification biochimique complète.
o Identification biochimique complète : Galerie API20 Staph
Ces systèmes utilisent des tests d’acidification ou d’assimilation des sucres et des tests enzymatiques.
Ils sont partiellement ou totalement automatisés.
Utilisées essentiellement pour l’identification des SCN

o Tests complémentaires :
 Résistance à la novobiocine : S saprophyticus
 Sensibilité à la déféroxamine distingue S. epidermidis et S. hominis des autres SCN.
 Sensibilité à la polymixine B sur TS au sang mouton différencie les souches résistantes: S.aureus, S. epidermidis, S. hyicus,S. chromogenes.
o Technques de biologie moléculaire
 Identification des S. aureus atypique: kit Accuprobe.
 Identification d’autres SCN.
 Épidémiologie moléculaire.
o Recherche de toxines
 Test immunologiques.
 Agglutination passive latex: TSST1, entérotoxines A, B, C, et D.
 ELISA