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1. But
2. Etendue
3. Responsabilité
Le technicien responsable en microbiologie doit veiller à la mise en
application des dispositions prises dans ce mode opératoire.
4. Documents de référence
cours de parasitologie :l’examen parasitologique des selles,département de
biologie clinique ,faculté de médecine et de pharmacie de Casablanca.
traveaux paratiques des protozoaires 2eme annee DES de biologie clinique,
université cheikh Anta Diop, dakkar, senegale.
5. Définition
K.A.O.P :Kystes,Amibes,Œufs ,Parasites .
CCL : cristaux de charquot leiden.
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o Diarrhée glairo-sanglante chez un malade ayant séjournée dans
une zone à risque(EPS :rechercher la forme végétative d’EH).
o Devant les signes cliniques :
− Douleur abdominal
− Troubles digestifs (tel que le prurit : recherche d’helminthe
/EPS ou mieux par scotch test).
o Devant les signes biologiques :
− Anémie
− Hyperéosinophilie(supérieures à 500/mm3) :évoquer une
helminthiase.
− VS élevée :abcès amibien ou destruction tissulaire
parasitaire .
− Devant des signes radiologiques.
− Chez le sujet sujet immunodéprimé(ID) :
− En cas de VIH(+) si CD<200 :recherche de Cryptocoques et
de microsporidie.
7. Limites de l’EPS
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8.2-Préparation du malade et recueil des selles
c’est une étape cruciale qui conditionne la validité des résultats (si
possible fournir un imprimé contenant les instructions).
identifier l’échantillon.
si en dehors du laboratoire :
o acheminement rapide pour éviter la déshydratation des selles et
préserver la viabilité des parasites.
o la conservation ne se fait pas à +4°C et pas à 37 °C ( car la
température élevée dégrade les formes végétatives.
si retard d’examen :
o <30 min :pour les selles liquides.
o 1h :pour les selles molles,divers.
N.B :
- préférer l’émission des selles au laboratoire.
- En cas de suspicion d’helminthe :utiliser le formol à 10 % :attention il ne
permet pas la conservation des formes végétatives de protozoaires.
- En cas de suspicion d’amibes :fixation par le MIF(Methiolate-Iode-
Formol) :qui permet la conservation des formes végétatives.
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8.3-Métériels et réactifs
Lugol à 4%.
l’eau physiologique.
lames porte objet et lamelles.
microscope optique.
9. Recherche de K.A.O.P
9.1-Principe
les principes utilisés dans ce mode opératoire consistent à identifier les
parasites soit par leurs morphologies et mobilités(formes végétatives) soit par le
contenu du cytoplasme après coloration et concentration.
9.2-Réalisation
9.2-1-Examen macroscopique
Consistance
o Pâteuse.
o Moulée : kystes.
o Liquide.
o Diarrhéique.
Homogénéité des selles
o Sang
o Pus
o Glaire
Couleur
o Marron
o Noirâtre ou verdâtre
o Brunâtre
Odeur
o Fétide ou non.
Présence ou absence de parasites adultes :oxyure,anneau de
tenia,ascaris,douves,ert.
N.B :
− L’examen macroscopique des selles oriente vers l’urgence de
l’examen :examiner les selles sanguinolentes –glaireuses-liquidiennes en
premier.
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9.2-2-Examen microscopique direct
étape essentielle de l’examen ,elle permet d’étudier :
9.2-2-1-la coprologie fonctionnelle
étude qualitative de la digestion (fibre mal digéré).
recherche de cristaux de Charquot Leiden(CCL) :qui traduisent la
distruction locale des PNE (helminthiase,coccidiose).(il existe un
parallélisme entre CCL et hyperéosinophilie sanguine).
Etudier la cellularité :hématies et leucocytes=caractère invasif du
processus.
9.2-2-2-La recherche et l’identification du parasite
elle peut se faire à l’état frais ou après coloration
Etat frais
o Prélever quelques mg de selles en superficielle et en profondeur et à
différents endroits ,surtout les zones contenant du sang,mucus ou
glaire.
o Préparer des lames couvertes de lamelles par :
− Etalement par dilution si les selles sont liquides ou
glaireuses :déposer une noisette de selles prélevès à différents endroits
sur une lame propre et recouvrir d’une lamelle.
− Etalement après dilution :déposer une goutte d’eau
physiologique sur une lame ,prélever le fragment de selles en piquant
l’anse de platine à plusieurs endroits et réaliser un mélange en tournant
l’anse dans la goutte.
o Lecture au microscope
− Parcourir méthodiquement la surface de la lamelle à l’aide de
l’objectif 10 pour repérer les éléments suspects surtout les hélminthes.
− Observer à l’objectif 40 pour rechercher des éléments de
petites tailles.
Examen direct après coloration
o Si difficulté de l’examen direct à l’état frais
o Coloration au lugol à 4% :sur la même lame utilisée pour l’examen
à l’état frais.
− Colore la forme kystique
− Tue la forme végétative
− Colore la chromatine en foncé.
− Différencie les formes parasitaires selon leurs inclusions
(vacuole,nombre de noyaux ..).
o Coloration au MIF
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− Conserve les formes végétatives
− Méthode de choix pour les protozoaires.
− Fixe immédiatements les formes végétatives ,permet
d’apprécier les pseudopodes
− Colore la membrane nucléaire en rouge foncé,la chromatine
est incolore et le cytoplasme en rouge clair.
o Autres coloration spécifiques :
− Ziehl Neelsen modifiée :oocystes de cryptosporidies :rose sur
fond bleu
− Coloration au trichrome :microsporidies
− Hématoxyline ferique :protozoaire :méthode de référence non
adaptée à la routine.
9.2-3-Techniques de concentration
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o Technique de Bailenger
− Mélanger 2-3 g de selles dans 10 X leur volume de liquide de
Bailenger (solution acéto-acétate pH 5)
− Tamiser à travers une passoire métallique ou filtrer à travers de la
gaze dans un verre à pied ou un tube conique
− Laisser reposer 1 minute: gros débris sédimentent au fond
− Décanter le liquide dans un tube à centrifuger conique
− Ajouter 1/3 du volume total d’éther 9 Technique de Bailenger
− Boucher le tube et agiter de façon à obtenir une émulsion homogène
− Centrifuger 2-5 minutes à 2500 tours/min
− 4 couches :
• Couche éthérée chargée de graisses
• Couche adhérente formée de débris lipophiles
• Couche aqueuse: liquide de dilution
• Culot contenant les parasites 10 Technique de Bailenger
− Rejeter le surnageant (3 couches supérieures) en retournant le tube
− Essuyer les parois du tube avec 1 tampon de coton ou une
compresse
− Récupérer le culot avec pipette Pasteur en ajoutant au besoin une
goutte de sérum physiologique
− Examiner le culot entre lame et lamelle
− Permet de concentrer la plupart des œufs et kystes de parasites
9.2-4-Techniques spécialisées
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Examen de comptage après coloration: technique de Kato-Katz
o Déterminer l’intensité de l’infection: nombre d’œufs par gramme de
selles
− faible : 1 à 4999 œufs/g
− moyenne : 5000 à 49 999 œufs/g
− forte : ≥ 50 000 œufs/g
Méthode de Bearmann
o Méthode d’extraction basée sur les propriétés d’hygrotropisme et de
thermotropisme des larves d'anguillules
o Repose sur l’attraction des larves d’anguillules mobiles contenues
dans les selles par l’eau tiède
o Ces larves sont ensuite concentrées par sédimentation et visualisées
par microscopie
o Réalisation de la méthode d’extraction de Baermann:
− Mettre des selles sur de la gaze disposée sur une passoire
− Poser la passoire dans un entonnoir (fermé) contenant de l'eau tiède
− Laisser reposer 2-3H
− Récupérer le liquide
− Centrifuger 3 min à 1500tr/min
− Réaliser un examen microscopique sur le culot de centrifugation
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ou lors de certaines indications comme bilan de greffe ,ID
,corticoidothérapie,immunosuppresseurs,chimiothérapie.
10.2-interprétation
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o Autres :Blastocystis hominis
Parasites pathogènes
o Protozoaires
− Entamoeba histolitica
− Giardia intestinalis
− Isospora bili
− Cyclospora
− Cryptosporidies
o Helminthes
Suivi d’un malade ayant un EPS + :
Après traitement refaire l’EPS de contrôl 2 à 6 semaines
10.3-délai de réponse
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