DIAGNOSTIC DES PARASITOSES CARDIOVASCULAIRES

Plan :
1. Gnralits
3. Les affections concernes

4. Diagnostic Biologique des diffrentes affections Prsomption Certitude 5. Autres examens :

1. Gnralits
Le Systme cardio- vasculaire ne constitue pas un site de prdilection des parasites. En effet la plupart des parasites retrouvs dans le sang sont des formes larvaires dexpression des parasites telles que les filaires microfilarmie. Les parasites adultes ou les formes larvaires retrouvs dans le sang et les tissus hmatopotique appartiennent aux : Helminthes : - Filaires microfilarmie - Schistosoma, forme adulte Sporozoaires intra globulaires (hmospoiroidies) - Plasmodium - Babesia Autres protozoaires - Leishmanies agents des LV - Trypanosomes - Toxoplasma

Diagnostic des filarioses microfilarmie

Il sagit de : Loa loa, Des Filaires lymphatiques (Wuchereria bancrofti. B. malayi ) et les filaires des sreuses (M. ozzardi M. perstans) Filaires des sreuses cest des filaires animales pouvant parasiter lhomme : Mansonelloses de singes M. Pertans et ozzardi peuvent sassocier : - W. bancrofti en Amrique du Sud et en Afrique - Loa loa en Afrique, Mansonella 1

M. perstans : Adultes vit enkyst dans les tissus sous sreux : pricarde, pelvipritoine et msentre. Les microfilaires peuvent tre retrouves dans le sang diurne M. ozzardi (Amrique latine et Carabes) msentre et graisse periviscrale

2.1. Prsomption clinique

2.1.1. Interrogatoire Antcdents Sjour ou origine Habitudes alimentaires 2.2.2. Renseignements cliniques Donns par le prescripteur et dcouvert au cours de lexamen

2.2. Orientation biologique

NFS : une hyper osinophilie importante 1 000 1 500 PNE / mm3. Immunologie : Test cutans disponibles

2.3Diagnostic de certitude
2.3.1. Directe : mise en vidence des microfilaires dans le sang. Le Prlvement : compte tenue de la priodicit le moment optimal doit tre exploit : W. Bancroft priodicit nocturne (22 H idal).B. malayi est apriodique Pour Loa loa diurne idal vers 10H Pour les autres diurne Prlvement fait aprs le Test la dithyl carbamazine. En effet, pour les filaires lymphatiques, La prise de 100 mg de dithyl carbamazine une heure avant l'examen favorise la sortie des microfilaires dans le sang priphrique et permet de faire des prlvements diurnes Techniques danalyse : G.E colore au Giemsa caractristiques principales (LI), numrotation importante et Concentration (leuco concentration en saponine). Observation : On recherchera des microfilaires dont les caractristiques principales permettent de les distinguer Numrotation des parasites importante

Le diagnostic fait appel la recherche et la mise en vidence des microfilaires sanguicoles, ou de microfilaires in situ lors de biopsies cutanes. Plus rarement, les filaires adultes peuvent tre retrouves dans leur localisation sous-cutanes.

1. Examen de sang priphrique pour mise en vidence de microfilaires sanguicoles

Examen direct d'une goutte de sang frais (photo)
Mthode simple mais avec une faible sensibilit. L'chantillon doit imprativement tre examin avant coagulation, ou prlev sur anticoagulant. Mode opratoire Dposer sur une lame une goutte de sang aprs ponction des capillaires cutans. L'observer immdiatement au microscope entre lame et lamelle. Les microfilaires sont repres au milieu des hmaties grce leur mouvements ondulatoires.

Etalement sanguin 2

Mthode trs simple et utilisable en diagnostic de routine. Elle manque de sensibilit du fait de l'absence de concentration. Nanmoins, elle respecte bien les structures des parasites. Mode opratoire Dposer sur une lame une petite goutte de sang aprs ponction des capillaires cutans. Etaler la goutte l'aide d'une lamelle le plus finement possible et scher. Effectuer une coloration (exemple : May-Grnwald-Giemsa) Examiner au microscope la queue du frottis, plus riche en parasites.

Goutte paisse
Mthode trs simple mais dont les rsultats ne sont observables que 24 heures aprs. Elle permet une certaine concentration des parasites. Mode opratoire Prlever une grosse goutte de sang par ponction des capillaires cutans. Dposer la goutte sur une lame en lui imprimant des mouvements circulaires l'aide de l'extrmit de la pipette ou d'un coin de lamelle. Ne pas taler. Laisser scher 12 heures l'abri de la poussire. Dposer une goutte d'eau distille et laisser agir 20 minutes (hmolyse). Scher. Effectuer une coloration (May-Grnwald-Giemsa) puis observer au microscope.

2. Examen de sang veineux (aprs enrichissement)

Sdimentation (technique de KNOTT modifie) (photo)
Cette mthode permet d'obtenir de bonnes prparations microscopiques, avec une sensibilit optimale. Mode opratoire Prlever du sang par ponction veineuse. Dans un tube essai, mlanger 1 ml de sang 9 ml de Teepol 10% (hmolyse). Laisser reposer 12 24 heures ou centrifuger 10 min. 2000 t/min. Prlever une grosse goutte du culot de sdimentation.(Technique de la goutte paisse.) Dposer la goutte sur une lame en lui imprimant des mouvements circulaires l'aide de l'extrmit de la pipette. Ne pas taler. Laisser scher 12 heures l'abri de la poussire. Dposer sur la goutte sche de l'eau distille et laisser agir 20 minutes (hmolyse). Scher. Effectuer une coloration (May-Grnwald-Giemsa) puis observer au microscope.

Filtration sur membrane (Kits du commerce) (photo)

Ex : Difil-test kit Cette mthode a t la plus usite. Elle allie la fiabilit, la rapidit et la facilit de sa mise en uvre, mais ncessite de possder des filtres adquats. Mode opratoire Prlever 1 ml de sang. Aspirer, dans la mme seringue, 9 ml d'une solution hmolysante (10% Teepol, 90% srum physiologique ; ou formol 2%). Agiter. Adapter le porte-filtre, muni d'une nouvelle membrane, sur l'embout de la seringue. Chasser le contenu de la seringue au travers du filtre. Rincer la seringue l'eau distille et en chasser le liquide au travers du filtre. Dmonter le filtre, rcuprer la membrane et la dposer sur une lamelle. Verser deux gouttes de colorant, recouvrir d'une lamelle. A l'aide d'une gaze, essuyer l'excs de

colorant sur les bords de la lamelle. Observer au microscope.

CARASTERISTIQUES DISTINCTIFS DES MICROFILAIRES SUR UNE GOUTTE EPAISSE

Microfilaire Loa loa

C ritresdidentification: -T aille: grande (200 -300m) - Gaine: prsente , mal ou non colore au MGG - Espace cphalique: long - Noy aux som atiques: pais, ovales, serrs, indistincts -C orpsinterne: gnralement non visible. -Extrm caudale: effile, dernier noyau terminal it

Microfilaire Loa loa

Micro W. bancrofti

Diagnostic indirect : Recherche des Anticorps disponible et peut tre utilis mais manque de spcificit. Il existe des ractions croises entre les filaires elles mmes et avec dautres nmatodes AUTRES ELEMENTS DIAGNOSTIC

2.6.

Radiographie pulmonaire certains stades ou des membres qui peut montrer la calcification des trajets des macro filaires mortes

Dcouverte fortuite dans les biopsies Lymphographie pour valuer lobstruction lymphatique.

Les Schistosomes
Il sagit de des vers plats du genre Schistosoma dont les adultes mles et femelles vivent dans les plexus veineux.

Les manifestations pathologiques sont lies au systme ou lorgane atteint, et les formes de dissmination qui aident au diagnostic seront
retrouves dans les selles ou dans les urines selon le cas. Schistosoma japonicum agent de la schistosomose artrioveineuses. Schistosoma mansoni agent de la schistosomose intestinale. Les ufs sont retrouvs dans les selles (Voir systme digestif) Schistosoma intercalatum agent de la schistosomose ano-rectale : Les ufs sont retrouvs dans les selles (Voir systme digestif) Schistosoma haematobium agent de la schistosomose uro-gnitale. Les ufs sont retrouvs dans les urines (Voir systme uro-gnital) Les manifestations artrioveineuses seront lies lhypertension portale do des dmes et des panchements divers. 2. Diagnostic Biologique du paludisme

4.1. Elments de prsomption clinique

8-15 j selon lespce plasmodiale, silencieuse elle correspond au cycle prrythrocytaire. 4. 1.2. Phase dinvasion Signes et Symptmes frquents : - Des accs de fivres violents durant 4 6 h suivi de sudation qui alternent avec une sensation de froid suivi de frissons intermittents le tout survenant de faon rythmique tous les 2/3 jrs ou alors une fivre continue et moins prononce. Autres : Arthralgies, pleur, nauses, et vomissements picotements cutans notamment P. falciparum Signes et symptmes inconstants : - En gnral : Splnomgalie, cphales svres, ischmie crbrale, hpatomgalie. Le paludisme svre peut progresser rapidement vers la mort en quelques j. voire quelques h Complications: l'hmoglobinurie, avec atteinte rnale, des convulsions. Les enfants atteints du paludisme crbral ont souvent une posture anormale pouvant tre lies des svres lsions crbrales. On peut avoir : des lsions neurologiques, des retards cognitifs chez les enfants. I anmie alors que lon se trouve une priode de dveloppement crbral rapide - plus long terme, des problmes de dveloppement ont t rapports pour les enfants ayant souffert de priodes de paludisme svre 4.2. Arguments biologiques de prsomption Anmie microcytaire hypochrome Thrombopnie Hypoglycmie

Autres en fonction des complications 4.3. Elments de certitude Rappels cycle : Phase sanguine ou rythrocytaire : - Les mrozotes pr-rythrocytaires s'accolent aux GR, les envahissent, s'y dveloppent en trophozotes puis s'y divisent en schizontes jeunes, murs ou corps en rosace, ensuite gs. Les hmaties ainsi bourres clatent en librant des substances pyrognes. - L'clatement des schizontes mrs ou corps en rosaces termine le premier cycle schizogonique rythrocytaire en librant dans le sang, avec les dchets du mtabolisme plasmodial (pigments et dbris cellulaires du GR), une nouvelle gnration de plasmodiums, les mrozotes rythrocytaires throphozoites capables de rinfecter d'autres GR. - Une succession rgulire de ces cycles va suivre et, en fonction des dfense de lhte, arrtent leur multiplication, modifient leur rapport nuclo-plasmatique, et un noyaux volumineux, cytoplasme densifi, apparat. Ce sont les gamtocytes mles et femelles qui peuvent demeurer 20 j. en attente dans le sang. Examens directs : Examen sanguin au microscope : Mise en vidence du parasite - Prlvement : sang capillaire ou veineux. On confectionne un frottis et une GE

Lame prpare avec un Frottis mince et1 GE colors MGG et Giemsa prts tre examine au microscope. La microscopie demeure la rfrence, elles ncessitent une mthodologie simple, mais prcise et rigoureuse et un long apprentissage. La sensibilit est corrle au temps dobservation (pour un frottis : lecture dau moins 100 champs, en pratique 20 minutes). La mthode la moins chre et la plus fiable et la plus rpandue est l'examen - Le frottis permet d'identifier les caractristiques despce, car l'aspect du parasite est mieux conserv - La GE permet de parcourir un volume sanguin plus large. La sensibilit de la GE est environ 11 fois plus leve que le frottis. Avec cette GE, un oprateur expriment peut dtecter des parasitmies trs basses 0,0001 % des GR Le diagnostic au microscope peut, en outre, tre difficile car les premiers trophozotes (en anneau) des quatre espces ont une apparence presque identique. L'identification de l'espce doit alors toujours se baser sur plusieurs trophozotes. Avantages du frottis mince : - Dtermination de lespce de Plasmodium - Estimation du niveau de parasitmie - Conservation de frottis permanents pour dossiers, enseignement, etc. GE : Dsavantage Pas aussi sensible que la goutte paisse pour dtecter les faibles
parasitmies Avantage :

- Meilleure sensibilit pour dtecter les faibles parasitmies Sa sensibilit est 20 30 fois plus leve que celle du frottis mince.
- Trs utile pour le dpistage des parasites Dsavantage : - Difficile de dterminer lespce de Plasmodium Requiert plus dexpertise pour dtecter les parasites

Observation

Noyau

sp

Vacuole Cytoplasme

Plasmodiumsp sur frottis sanguin

P ovale . P malariae .
P falciparum .

P vivax .

Tableau 5 : cellule hte

Recherches dAg - Tests de terrain recherche dAG . Des tests immun chromatographiques (galement appels tests de diagnostic rapide du paludisme, ou dipsticks ) ont t crs et tests sur le terrain. Ces tests utilisent une goutte de sang du doigt ou d'une veine, ils durent 15 20 minutes, sans avoir besoin d'un laboratoire. La limite de dtection avec ces tests est de l'ordre de 100 parasites par microlitre de sang (l), contre 5 par test microscopique.

Les premiers tests qui utilisaient le glutamate dhydrognase du P. falciparum ont t vite remplacs par le lactate dshydrognase. C'est un des enzymes les plus abondants gnrs par P. falciparum. La concentration de PLDH sanguin est assez troitement corrle la prsences des parasites. La disparition de cet Ag aprs le traitement permet d'utiliser le test pLDH pour prdire le succs thrapeutique. L'OptiMAL-IT permet de distinguer P. falciparum et P. vivax (diffrences AG es isoenzymes pLDH. Ce test permet de dtecter falciparum jusqu' une parasitmie de 0,01 %, et les non-falciparum jusqu' 0,1 %. Paracheck-Pf peut dtecter des parasitmies de 0,002 % mais ne distingue pas les espces. - Mthodes molculaires La PCR en temps rel dans l'espoir de les mettre en place dans les zones endmique, une technique plus prcise que la microscopie, mais aussi plus chre et demandant un laboratoire spcialis. De plus, les niveaux de parasitmie ne sont pas ncessairement corrls avec la progression de la maladie, en particulier quand le parasite peut adhrer aux parois des vaisseaux sanguins, d'o l'intrt des mthodes moins avances. 4.2.3. Examens indirects : Recherche dAc pas de valeur sous les tropiques
4.3. TESTS RAPIDES (DTECTION DANTIGNES) - ParaSight F (P. falciparum) - ICT Malaria P.f ou P.f/P.v - OptiMAL (P. falciparum et non-P. falciparum) - Makromed (P. falciparum) 4.4. PCR Amorces spcifiques chacune des espces

4.

Diagnostic Biologique de BABESIA SP.

Cest un sporozoaire sanguin intracellulaire, vecteur : tique (Ixodes scapularis)
Forme caractristique : en ttrade (peu frquente) Autres caractristiques : plomorphes souvent en forme de larmes. Les parasites sont multiples dans un seul rythrocyte (frquent)

5.

Trypanosomes Humaine Africaine 6.1. Rappels

Protozoaire flagells sanguicole, leur corps est corps fusiforme allong. Le noyau arrondiest. Il possde un central lment postrieur le kintoplaste do part le flagelle, membrane ondulante Taille variable, formes longues 30 40 -, courtes 12 18 Vivent dans le sang (extracellulaires), ganglions, LCR et dans le Trypanosomes dans le systme lymphatico-sanguin et nerveux 6.2. Arguments cliniques volution spontanment mortelle dans un tableau de tableau de mningoencphalite Maladie en pleine expansion Deux parasites: Trypanosoma brucei gambiense Trypanosoma brucei rhodesiense

5.3. Prsomption Biologique: lvation du taux dIgM de 8 16 fois la normale sang et surtout dans le LCR+++ (agglutination) Anmie Recherche danticorps: test sur carte CATT mais faux ngatifs, IFI, ELISA Recherche dantignes: ELISA, CIATT 5.4. Diagnostic de certitude direct parasitologique: recherche au Prlvementniveau du chancre, suc ganglionnaire Recherche dans le sang: talement sur sang frais, goutte paisse, centrifugation en tube capillaire, QBC (quantitative buffy coat), mini-colonne changeuse dions Recherche dans le LCR: cellules de Mott,

T rypanosom b a rucei
L SIM G S E AE

L SIM G S E AE

T cruzi .
LES IMAGES

T brucei .

6. Trypanosome Amricaine = Chaggas 7.1. Orientation clinique Passe souvent inaperu au stade aige lorsquil est possible de mettre en vidence le parasite dans le sang. Souvent 7.2. Diagnostic parasitologique: Direct: mise en vidence des trypanosomes dans le sang la phase aigu, mthodes Indirectes (xnodiagnostic) Indirect: recherche danticorps HAI, IFI, ELISA

7. Leishmanies agents des Leishmanioses viscrales 8.1. Prsomption clinique

8.1.1. Interrogatoire Antcdents Sjour ou origine Profession

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8.2.2. Renseignements cliniques Donns par le prescripteur et dcouvert au cours de lexamen

8.2. Orientation biologique

hyperprotidmie I

2.4Diagnostic de certitude
2.3.1. Directe : mise en vidence des microfilaires dans le sang. Le Prlvement : compte tenue de la priodicit le moment optimal doit tre exploit : W. Bancroft priodicit nocturne (22 H idal).B. malayi est apriodique Pour Loa loa diurne idal vers 10H Pour les autres diurne Prlvement fait aprs le Test la dithyl carbamazine. En effet, pour les filaires lymphatiques, La prise de 100 mg de dithyl carbamazine une heure avant l'examen favorise la sortie des microfilaires dans le sang priphrique et permet de faire des prlvements diurnes Techniques danalyse : G.E colore au Giemsa caractristiques principales (LI), numrotation importante et Concentration (leuco concentration en saponine). - Observation : On recherchera des microfilaires dont les caractristiques ovode de 2 6 -m avec noyau et un kintoplaste Forme immobile, parasite du systme rticulohistiocytaire, homme Forme de 15 25 -m allonge, kintoplaste antrieur, flagelle, confre une mobilit Forme chez le vecteur et dans les milieux de culture Pancytopnie: anmie, leucopnie (granulopnie), thrombocytopnie Syndrome inflammatoire Immunologie: IF, ELISA Parasitologie: mise en vidence du parasit lexamen direct et culture des divers ponction mdullai, sang, biopsie prlvements sur milieu NNN ou autre

ponction

mdullaire, sang, biopsie

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