Dr SEMMANI.

M
Parasitologie-Mycologie
EHS Elkettar

Diagnostic de laboratoire des parasitoses opportunistes

Cryptosporidiose - Isosporose - Cyclosporose - Sarcocystose

Blastocystose

Introduction :
L’immunodépression prédispose à de nombreuses infections parasitaires à manifestations
variées, pulmonaires, neurologiques, hématologiques et gastro-intestinales conduisant à une
diarrhée souvent sévères et prolongées chez les patients immunodéprimés.

Les coccidioses intestinales (la cryptosporidiose, l’isosporose, la cyclosporose et la

sarcocystose) sont dues à des protozoaires intracellulaires responsables de diarrhée chez
l’homme, bénigne et de courte durée chez les sujets immunocompétents, mais sévère et
chronique chez les immunodéprimés.

La Blastocystose est une protozoose due à Blastocystis sp, un protozoaire unicellulaire

intestinal cosmopolite de pathogénicité controversée. Ceci est principalement dû au fait que ce
parasite peut être fréquemment retrouvé chez des patients asymptomatiques. Cependant, le
Blastocystis sp est aussi le seul parasite identifié chez de très nombreux patients présentant
des troubles intestinaux diarrhées, de vomissements, de douleurs abdominales et de
ballonnements en particulier chez les individus immunodéprimés

Démarche diagnostique

Le diagnostic se base sur l’examen parasitologique des selles, L’émission des parasites
n’étant pas permanente, l’examen doit être répété jusqu’à trois fois avec un intervalle de 3 à 4
jours.
L’étude de selle comprend un examen direct à l’état frais et des techniques de concentration
et de coloration. Le diagnostic par PCR n’est réalisable que dans des laboratoires spécialisés.

➢ Prélèvements:
- La préparation du malade est indispensable. Le malade doit s’abstenir de toute
thérapeutique et éviter les aliments ayant beaucoup de résidus.
- Le recueil des selles fraiches se fait dans des récipients propres et hermétiquement fermés.
- Une Fiche de renseignement doit êtres minutieusement remplie.

➢ Techniques:

1. Cryptosporidiose:
- Examen direct : l'identification directe est difficile, les oocystes peuvent en être confondus avec
d'autres micro-organismes (levures, Blastocystis sp)

1
L’oocyste de Cryptosporidium sp apparait sous forme d’un élément arrondi ou ovalaire,
réfringent, d’aspect granuleux, mesurant 4 à 6 μm et présentant une vacuole bien visible et
un point noir correspondant au corps résiduel.

- Techniques de concentration et de coloration:

➢ Les oocystes sont concentrés dans les selles par des techniques classiques biphasiques de
Ritchie au formol-éther ou de Bailenger.
➢ Plusieurs techniques de coloration sont utilisées pour la recherche de Cryptosporidium :
- Coloration de Ziehl-Neelsen modifiée par Henriksen et Pohlenz : technique de référence
effectuée sur frottis de selles (à partir de culot de centrifugation), elle fait apparaitre les
oocystes en rouge avec une vacuole et un contenu granuleux sur un fond vert

- Autres colorations :

- la coloration de Heine, Oocystes de Cryptosporidium sp

- la coloration à l’auramine,

- Méthodes immunologiques:
- Immunofluorescence directe (IFD): Qui utilise des anticorps monoclonaux dirigés contre l’antigène
de la paroi des oocystes. Les oocystes apparaissent vert pomme (centre clair et périphérie plus
fluorescente).
- Détection des antigènes de cryptosporidies par ELISA :
Les coproantigènes de cryptosporidies sont détectés et révélés par un mélange d’anticorps
monoclonaux et polyclonaux.

2. Isosporose :

Le diagnostic de l’isosporose repose sur la mise en évidence des oocystes d’Isospora belli au
stade non sporulé à l’examen parasitologique des selles,
À l’état frais : L’oocyste d’I. belli est difficile à observer à cause de sa paroi lisse est peu
réfringente, et son cytoplasme très transparent

Après concentration : ou surtout après concentration de routine (méthode de Ritchie,

Bailenger).
a b
On retrouve des oocystes ovales (20-30 µm de
long et 12 à 16 µm de large contenant un
sporoblaste)

Oocystes d’Isospora belli

a : non sporulé
b : après sporulation

2
Après coloration :
La coloration de Ziehl Neelsen modifiée qui est la plus utilisée fait apparaître les oocystes en
rose avec un sporonte coloré en rouge.

- L’examen parasitologique des selles comporte souvent des cristaux de Charcot-Leyden,

produit de la destruction des polynucléaires éosinophiles présents dans l’intestin
- Test de sporulation: le test de sporulation est utilisé comme test de confirmation, dans du
charbon ou bichromate de potassium à 2,5 % pendant 7 à 10 jours entre 27 et 32 °C, les
oocystes matures contiennent 2 sporocystes renfermant chacun 2 sporozoïtes infestants
3. Cyclosporose :
- C’est l’observation directe de selles fraiches, sur montage lu rapidement et préservé de la
dessiccation, qui permet de mettre en évidence le parasite (les oocystes de Cyclospora sont
très sensibles à la dessiccation et à la chaleur)
- Les techniques de concentration sont utilisées pour détecter les faibles infestations
(techniques de Ritchie, de Bailenger).
- Les oocytes de Cyclospora apparaissent sous une forme arrondie de 8 à10 microns de
diamètre, entourée d’une double membrane dont la plus externe est très épaisse. Il contient
une morula verdâtre contenant plusieurs granules réfringents.

Cyclospora : examen direct

- La coloration de Ziehl-Neelsen modifiée et la coloration à la safranine visualisent les

Cyclospora en rouge bien visible sur un fond vert.

4. Sarcocystose :
Le diagnostic de la Sarcocystose intestinale est basé sur la mise en évidence des oocystes dans
les selles, par un examen direct et des techniques d’enrichissement.

Les sporocystes de la plupart des espèces mesurent 15 à 20μm sur 8 à 10 μm, chaque
sporocyste contient quatre sporozoïtes

Sarcocystis : examen direct

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5. Blastocystose :
Le Blastocystis sp est recherché par l’examen microscopique des selles fraichement émise, qui
est largement suffisant pour la mise en évidence des formes vacuolaires, les formes
granulaires ou amiboïdes y sont plus rarement retrouvées. Les kystes, du fait de leur petite
taille, restent très difficiles à mettre en évidence par microscopie.

➢ Blastocystis sp : 10 à 100 µm (très polymorphes) avec présence

de grosse vacuole entourée d’une couronne de plusieurs noyaux

L’Examen après concentration (technique de Ritchie modifiée) peut êtres utilisé mais sont
parfois responsables d’une lyse du parasite
L’Examen après coloration: l’hématoxyline ferrique, le MIF (Mertthiolate Iode Formol) ou la
coloration au trichrome peuvent permettre d’augmenter la sensibilité de l’examen
microscopique
La culture de selles en anaérobiose et les outils de diagnostic par biologie moléculaire sont
aussi utilisés (dans les laboratoires spécialisés)