PROJET :

EXAMEN CYTOBACTÉRIOLOGIE DES URINES

(ECBU)

Présenter par : benothmen chaima

Demander par : Dr.noura ben mbarek
 Plan
1
• Introduction

2
• Indication des urines

3
• Prélèvement d’un ECBU

4
• Les étapes de réalisation d’un ECBU

5
• Réalisation d’un antibiogramme

6
• Conclusion
 introduction

Cet examen permet d’étudier la

composition de l’urine (étude des cellules,
des facteurs composant l’urine, et
recherche de micro-organismes) pour y
déceler une éventuelle infection. Cet
examen peut se réaliser dans le cadre d’un
diagnostic d’une infection urinaire,
notamment quand la personne présente
des symptômes caractéristiques. Cet
examen est réalisé également en
systématique chez la femme enceinte ou
encore en période préopératoire.
 APPORT DES EXAMENS BACTERIOLOGIQUES DES URINES

Objective 01 Objective 02 Objective 03 Objective 04

• Mettre en évidence • Mettre en évidence et • Contrôler la stérilisation des

• Identifier et étudier la
quantifier une urines après traitement.
la présence de sensibilité des bactéries
• Distinguer une infection
leucocyturie et les
bactéries dans les aux antibiotiques. récidivante d’une rechute.
éléments urinaires
urines (bactériurie). anormaux.
 INDICATION DE L’ECBU
- Brûlures
mictionnelles

-Pollakiurie
-Incontinence

-Hématurie urinaire
- Dysurie

• Modification de
l’aspect des urines
Douleurs pelviennes ou
lombaires
1/- LE PRELEVEMENT :

Il doit être pratiqué avant toute

antibiothérapie ( ou après fenêtre
thérapeutique de 24 heures si l’état
du malade le permet)
 a-Cas général habituel

• Après une toilette locale avec du savon ou un

antiseptique type dakin suivi d’un rinçage a l’eau.

• Recueillir les premières urines du matin après

élimination du premier jet ( 20 ml)

• ou à défaut les urines de la journée 3 à 4 heures au

moins après la dernière miction.
 b-Situations particulières

Chez la femme : éviter la contamination des urines par les leucocytes et

les bactéries de la flore vaginale.
Chez l’homme : Sondage proscrit car risque d’infection urinaire
chronique.
 Chez le nourrisson

On utilise un sac collecteur après

nettoyage de la région périnéale, ce
dernier ne doit pas être laisser en
place plus de 30 mn.(Le renouveler
si pas de miction en ce temps la)
 Chez le sujet sonde :

Ne pas prélever à partir du sac collecteur mais

clamper la sonde en aval pendant 10 mn désinfecter
la sonde a l’alcool iode et ponctionner à l’aide d’une
seringue puis transvaser dans un tube stérile.
 Chez le sujet incontinent ou handicapé :

Homme par collecteur pénien. Femme par sondage urinaire.

 Ponction sus pubienne :
(Geste spécialisé)

 Ne doit être réalisé que si la voie normale est

impossible.
 Réalisée sur vessie plaine après désinfection
soigneuse (le germe isolé est identifié quelle que
soit la numération)
 Recherche de
mycobactéries:

 Examen de seconde intention.

 Effectué sur la totalité de la première miction du matin
après restriction hydrique.
 Doit être répétée à plusieurs reprises car l’élimination des
mycobactéries dans les urines est intermittente.
 l’infection urinaire avec des
bandelettes
Ces bandelettes utilisables directement au lit du patient
ou en cabinet de ville détectent en 1 à 2 minutes :
•la présence de nitrites, témoin de la bactériurie. En
effet la plupart des germes uropathogènes possèdent
une nitrate réductase et donc réduisent les nitrates
urinaires en nitrites. Le seuil de détection est de
105 UFC /mL.
•la leucocyturie par la recherche de leucocytes estérases
produites par les granulocytes neutrophiles. Le seuil de
détection est de 104 leucocytes /mL.
 l’ECBU comprend deux étapes :
Etape cytologique
Recherche d’une quautité anormalement
élevée de différents éléments
La recherche se fait sur le culot urinaire
obtenu après centrifugation
On recherche : des hématies (N=0), des
leucocytes (N=0), des cylindres
protéiques , des cristaux et autres cellules
Etape bactériologique
Normalement l’urine est stérile mais
elle peut etre contaminée lors de
son emission
Attention à l’asepsie : les
précautions de récueil des urines
sont essentielles à l’interprétation
bactériologique
 Examen macroscopique à J1

•Urines claires.
•Troubles (purulentes)
•sanglantes (hématurie initiale, terminale
ou totale)
•Ictérique (jaune brin )
•Rouge, vert (origine alimentaire ou
médicamenteuse )
•Présence de dépôt : cristallin,
blanchâtre
(phosphate ),rouge brique (acide urique),
rose (Urate de soude)
 Examen Microscopique à J1
Centrifugation
Urine entière
Quantitatif:
Sur urine homogénéisée:
* Numération des
leucocytes sur cellule
Nageotte ou malassez (Ou
entre lame et lamelle)
Qualitatif:
Sur le sédiment :
- frottis coloré au Gram: (observation
bactéries)
-frottis coloré au Ziehl Nielsen:
(recherche mycobactéries)
- Etat frais :
* recherche de cellules (hématies,
levures...)
* recherche de cristaux.
* recherche de cylindres
Cylindre leucocytaire Cristaux d’oxalate de calcium Leucocytes Levures

. .
 la Dénombrement et
Isolement des bactéries

• La culture bactérienne permet de préciser l’espèce bactérienne,

quantifier la bactériurie, identifier les différents types des
germes pathogènes, et d’effectuer un antibiogramme.

• Choix des milieux La très grande majorité des bactéries

responsables d’infections urinaires ne sont pas exigeantes et sont
cultivées sur géloses ordinaires
o La méthode de l’anse calibrée c’est une méthode manuelle actuellement la plus utilisée pour
dénombrement des germes urinaires et isolement sont simultanés.
o Elle nécessite un milieu non sélectif coulé en boite de pétri et une anse calibrée de 10ul.
o Déposer 10ul d’urine bien homogénéisée sur un rayon de la boite à l’aide d’une anse
calibrée stérile.
o Une strie centrale est puis ensemencée le dépôt en stries perpendiculaires au rayon sur
toute la surface de la gélose.
o Incuber dans une étuve à 37°C durant 18 à 24heures.
o Après l’incubation, en comparant la densité des colonies présentes sur la présentes sur la
supérieure de la gélose) celle du schéma fourni avec ̎ la planches étalons ̎.
o La culture doit être pure, en cas d’aspect polymicrobien refaire l’analyse.
o Rendre le résultat en nombre UFC/ml d’urine
Les aspects culturaux des Bacilles Gram (-) sur les différents milieux utilisés.
Les aspects culturaux des cocci Gram (+) sur les différents milieux utilisés.
Les résultats de dénombrement bactérien après culture sont :

o Bactériurie ˂ 103 UFC/ml : bactériurie non

significative.

o Bactériurie ˃ 105 UFC/ml : bactériurie

significative.
L’identification de la bactérie est menée en fonction de la morphologie des
colonies, et
des premiers caractères biochimiques d’orientation, propres à chaque espèce.
Le nombre limité d’espèces microbiennes impliquées simplifie le choix de la
galerie
commerciale à utiliser.
Elle se divise en deux types de Tests :
A. Tests Préliminaires
B. Test Biochimiques
 A.Tests Préliminaires :

Catalase négatif Catalase positif Oxydase négatif Oxydase positif.

. .
Coagulase négatif Coagulase positif
B. Test Biochimiques
 antibiogramme

L’antibiogramme est réalisé par méthode de diffusion en disque selon les

recommandations du CLSI pour chaque germe isolé
 Milieu pour antibiogramme :
Le milieu adéquat est la gélose Muller-Hinton (MH) doit être coulé en
boites de pétri sur une épaisseur de 4mm.

 Préparation pour inoculum : o A partir d’une culture pure de 18h à 24h,

racler à l’aide d’une anse de platine quelques colonies bien isolé .
o Décharger par la suite l’anse dans un tube d’eau physiologique stérile.
o Bien homogénéiser la suspension bactérienne jusqu'à devenir trouble
 Ø Ensemencement :
o La technique d’ensemencement par écouvillonnage est celle utilisée dans cette étude.
o Tremper un écouvillon stérile dans l’inoculum.
o puis frotter l’écouvillon sur la totalité de la surface gélosée sèche, de haut en bas, en
stries serrées.
o Répéter l’opération trois fois ; en tournant la boîte de 60° à chaque fois.
o o Finir l’ensemencement en passant l’écouvillon sur la périphérie de la gélose
 Application des disques d’antibiotiques :
o Déposer chaque disque d’antibiotique à tester sur la gélose.
o Puis à l’aide d’une pince bactériologique, le presser pour s’assurer de son
application.
 o Une fois appliqué le disque ne doit pas être déplacé Incubation :
Les boites sont incubées pendant 24 heures à 37°C.
 Conclusion
L’ECBU est un examen de laboratoire assez
fréquemment demandé. il est bien codifie ces deux
temps critiques sont :
* le prélèvement trop souvent victime de son
apparente simplicité.
* l’interprétation micro biologique qui doit s’appuyer
sur des arguments décisionnels irréprochables
Toutes les bactéries peuvent entraîner une infection
urinaire mais également les champignons et les virus.